華蟾素片的含量及釋放度測定

田 磊

（淮北礦業股份有限公司職業病防治院藥劑科，安徽 淮北 235000）

華蟾素片為干蟾皮經加工制成的浸膏片，具有解毒、消腫、止痛的功效，對治療中、晚期腫瘤及慢性乙型病毒性肝炎等有良好療效[1]，原質量標準中無含量測定項[2]。為有效控制藥品質量，筆者參考相關文獻[3-4]，以制劑中主要成分吲哚類總生物堿5-羥色胺為指標，建立了華蟾素片釋放度和含量的測定方法，報道如下。

1 儀器與試藥

ZRS-8G型智能溶出度測定儀（天津大學無線電廠）；UV-2401型紫外分光光度計（日本島津）；梅特勒AE-240型電子分析天平。5-羥色胺對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111656-200401）；華蟾素片（安徽金蟾生化股份有限公司，規格為0.3 g，批號分別為 090601，090602，090603）；鹽酸、對二甲氨基苯甲醛、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 5-羥色胺含量測定

2.1.1 溶液制備

精密稱取置五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的5-羥色胺對照品9.31 mg，置50 mL量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品10片，除去包衣，碾細，稱取約1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）適量，超聲處理10 min，放冷，用鹽酸溶液（9→1000）稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液5 mL，置10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2 方法學考察

線性關系考察：精密量取對照品溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加水使成5.0 mL，搖勻，加15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，放置30 min，照分光光度法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅣA]，以水作空白，在555 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標、質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=0.03841 X-0.00210，r=0.9999（n=6）。結果表明，5-羥色胺質量濃度在 1.862 ～18.620 μg/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

精密度試驗：精密量取對照品溶液4 mL，置10 mL量瓶中，加水使成5.0 mL，搖勻，加15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，依法測定吸光度。結果的 RSD=0.02%（n=6），表明方法精密度較好。

重復性試驗：取同一批（批號為090601）樣品6份，依法制備供試品溶液并測定含量。結果每片平均含量為0.4383 mg，RSD=0.07%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一批（批號為090601）供試品溶液，于3 h內每隔30 min依法測定吸光度。結果的 RSD=0.28%（n=7），表明供試品溶液在3 h內穩定。

加樣回收試驗：取本品10片，除去包衣，碾細，稱取約0.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，分成3份，每份分別精密加入對照品溶液3，4，5 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果見表1。

表1 5-羥色胺加樣回收試驗結果（n=9）

2.1.3 樣品含量測定

取本品10片，依法制備供試品溶液，按線性關系考察項下方法測定吸光度，用回歸方程計算含量。結果批號為090601，090602，090603的樣品中，每片分別含5-羥色胺0.4382，0.4345，0.4356 mg（n=3）。

2.2 釋放度測定

2.2.1 測定條件選擇

釋放方法：本品為腸溶片，應先以鹽酸溶液（9→1000）為溶劑，再以磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）為溶出溶劑。由于本品中5-羥色胺含量較低，因而在釋放度測定方法選擇時，宜選用2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩD收載的釋放度試驗第二法并采用溶出度測定法（附錄ⅩC第三法）裝置試驗為宜，釋放介質量選用100 mL。

釋放轉速：取樣品，每溶出杯放置5片，轉速分別為50，75，100 r/min，依釋放度測定方法項下方法操作，于45 min時取樣，測定釋放百分率。由表2可見，當轉速為75 r/min和100 r/min時，5-羥色胺的45 min累積釋放百分率接近，且優于50 r/min。綜合考慮，選擇釋放轉速為75 r/min。

表2 釋放轉速選擇試驗45 min時的結果

2.2.2 釋放度均一性試驗

取本品5片，按釋放度測定方法項下方法操作，于5，10，15，30，45，60 min時分別取樣，每次10 mL，然后補入10 mL已預熱至37.5℃的溶劑。將取出的樣品測定釋放百分率，繪制釋放曲線。結果見圖 1。可見，樣品在溶出30 min后，累積釋放百分率高于70%，45 min后累積釋放百分率趨于穩定。

2.2.3 釋放度測定方法

取本品，每杯置5片，照釋放度測定法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩD第二法（二）]，采用溶出度測定法[2005 年版《中國藥典（二部）》附錄ⅩC第三法]裝置試驗。先以鹽酸溶液（9→1000）100 mL為釋放介質，轉速75 r/min，依法操作，經2 h后棄去鹽酸溶液，檢查每片腸膜均不得有裂縫，繼以磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）100 mL 為 釋 放介質，經45 min時取溶液適量，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，精密吸取濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液（2→3）至刻度，搖勻，放置30 min，照分光光度法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅣA]，以水作空白，在555 nm波長處測定吸光度。另精密稱取5-羥色胺對照品適量，加水使溶解并配制成相應的對照品溶液，依法測定其吸光度。以外標法計算，計算結果與每片中的平均含量相比較，即得每片的釋放百分率。

圖1 3批樣品釋放曲線

3 討論

對華蟾素片中吲哚類生物堿的含量測定采用分光光度法，其基本原理是吲哚類生物堿分子中的芳伯氨基可與芳醛（如對二甲氨基苯甲醛）發生縮合反應，在酸性溶液中生成有色的希夫氏堿，這種有色物質在某個波長處有明顯的吸收峰。試驗結果表明，該方法合理、有效，專屬性強，顯色穩定且重現性好。樣品的釋放度測定中，樣品的批內釋放均一性與批間釋放重現性均較好，表明建立的釋放度測定方法可行。

本試驗建立的釋放度和含量測定方法簡便、準確，靈敏度高，且費用低廉，與高效液相色譜法等[5-6]方法相比，更適合于基層醫院制劑或制藥企業生產工藝流程中間環節的質量監控。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典臨床用藥須知（中藥卷）[M].北京：人民衛生出版社，2005：61-62.

[2]WS3-B-2687-97，中華人民共和國衛生部頒藥品標準·中藥成方制劑（第十四冊）[S].

[3]WS3-B-2132-96，中華人民共和國衛生部頒藥品標準·中藥成方制劑（第十一冊）[S].

[4]WS3-B-3045-98，中華人民共和國衛生部頒藥品標準·中藥成方制劑（第十六冊）[S].

[5]張紅霞，于 輝，張 磊，等.HPLC法測定華蟾素注射液中華蟾素含量及有關物質[J]. 武警醫學，2008，19（8）：722-723.

[6]王建化.RP-HPLC法測定華蟾素片中華蟾毒配基、酯蟾毒配基的含量[J]. 中國中醫藥科技，2009，16（2）：125-126.