蒙藥冬葵果的薄層色譜鑒別*

馬 強(qiáng) ，董 玉 ，朱曉玲 ，李樹明

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)科學(xué)技術(shù)廳，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010； 2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059）

冬葵果（Fructus Malvae）系蒙古族習(xí)用藥材，蒙古名瑪寧占巴、額布勒珠爾其其格，為錦葵科植物冬葵 Malva verticillata L.的干燥成熟果實(shí)，夏、秋二季果實(shí)成熟時(shí)采收，除去雜質(zhì)，陰干[1]。該藥性涼，味甘、澀，具有利尿通淋、清熱消腫、止渴等功效，在我國藥用歷史悠久，療效確切，主治尿閉、淋病、水腫、口渴、腎熱、膀胱熱等癥，臨床上主要用于治療尿路感染[2]。文獻(xiàn)[3]報(bào)道，冬葵果中含有阿魏酸、蘆丁，但本課題組以兩者為指標(biāo)，經(jīng)薄層層析、高效液相色譜檢測，發(fā)現(xiàn)檢測結(jié)果不靈敏，專屬性不強(qiáng)，效果不理想。本研究從冬葵果中首次提取、分離出了其主要有效成分并鑒定為咖啡酸。咖啡酸具有止痛、止血、抗氧化、抗炎癥、抗風(fēng)濕、抗肝毒、抗?jié)兊茸饔肹4-7]，這與冬葵果治療尿路感染的功效相符合。2005年版《中國藥典（一部）》冬葵果項(xiàng)下無薄層鑒別項(xiàng)，因此筆者建立了冬葵果藥材中咖啡酸的薄層鑒別方法，用以控制冬葵果的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

Sld-1型薄層色譜攝影儀（天津思利達(dá)色譜技術(shù)開發(fā)公司）；聚酰胺薄膜（浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）；硅膠（青島海洋化工廠）；反相硅膠柱（北京金歐亞科技發(fā)展有限公司）及Sephadex LH-20（Amersham Pharmacia Biotech AB）。咖啡酸對照品（中國藥品生物制品檢定所）；3批冬葵果藥材（采自錫盟白旗和內(nèi)蒙古呼和浩特，購自內(nèi)蒙古天力藥業(yè)有限公司）經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院龐秀生副教授鑒定為錦葵科植物冬葵 Malva verticillata L.的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 冬葵果化學(xué)成分研究

采用反復(fù)常壓硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、反相柱層析及Sephadex LH-20柱層析對冬葵果乙酸乙酯部位進(jìn)行分離。通過分離、1HNMR、13CNMR 鑒定，得到單體化合物咖啡酸（caffeic acid）。該化合物為首次從冬葵果中分離出。

分離方法：取冬葵果藥材5 kg，用70%乙醇回流提取，每次2 h，減壓回收溶劑至無醇味，分別以石油醚、乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱色譜（以不同比例氯仿-甲醇梯度洗脫），再經(jīng)聚酰胺柱、反相硅膠柱、Sephadex LH-20柱層析后，得一黃色固體。

黃色固體：熔點(diǎn)221～223℃，分子式為C9H8O4。溴酚藍(lán)反應(yīng)陽性，提示為有機(jī)酸類化合物。三氯化鐵反應(yīng)陽性，提示含有酚羥基。

1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.17（1H，d，J=16 Hz，H-8），7.49（1H，d，J=16 Hz，H-7），表明存在一對烯氫，且為反式；6.98（1H，d，J=2 Hz，H-2），6.88（1H，d，J=8 Hz，H-5），6.73（1H，dd，J=8 Hz，2 Hz，H-6），3個(gè)芳?xì)湔f明苯環(huán)上有3個(gè)取代基，且為ABX系統(tǒng)。

13CNMR（CD3OD，500 MHz）δ：127.8（C-1），115.1（C-2），147.0（C-3），149.4（C-4），115.5（C-5），122.8（C-6），146.8（C-7），116.5（C-8），171.0（C-9）。

以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中的咖啡酸數(shù)據(jù)基本一致，與咖啡酸對照品共薄層，結(jié)果 Rf值一致，混合熔點(diǎn)不下降，故化合物鑒定為咖啡酸。

2.2 咖啡酸薄層色譜鑒別

取本品粉末（過50目篩）1.0 g，置圓底燒瓶中，用70%乙醇加熱回流2 h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0 mL使溶解，取上清液2 mL，上 Cleanert ODS-SPE萃取柱，流速1 mL/min，以5 mL蒸餾水沖洗，流速1 mL/min，蒸餾水洗脫液作為供試品溶液；另取咖啡酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取對照品溶液 4 μL 和供試品溶液 20 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇 -水 -冰乙酸 （3 ∶2 ∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖1）。

圖1 冬葵果聚酰胺薄層色譜圖

3 討論

曾比較了冬葵果藥材的幾種提取方法（回流2 h、超聲1 h、索氏提取4 h），結(jié)果表明超聲、索氏提取所得總酚酸、咖啡酸的含量均不及回流提取的高，因此確定采用回流提取方法。溶劑回收為40℃減壓回收至近干，否則溫度過高會破壞咖啡酸等酚酸類成分，使總酚酸、咖啡酸的含量降低。冬葵果藥材提取液純化方法用Cleanert ODS-SPE柱對提取液進(jìn)行純化，能排除其他成分對咖啡酸薄層的干擾。曾比較了硅膠板[8]和聚酰胺薄膜板，后者效果更好，故選用聚酰胺薄膜板。采用聚酰胺薄膜板，分別以甲醇-水-冰乙酸（3 ∶2 ∶0.1）和氯仿 -甲醇（8 ∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，結(jié)果前者優(yōu)于后者。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：76.

[2]中國醫(yī)學(xué)百科全書蒙醫(yī)學(xué)編委會.中國醫(yī)學(xué)百科全書：蒙醫(yī)學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1992：213.

[3]陳燕飛，劉樂樂，王玉華，等.薄層色譜法鑒定冬葵子中阿魏酸[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，30（2）：115-117.

[4]張?zhí)m珍，秦 雯，張小華，等.夏枯草不同部位中咖啡酸和迷迭香酸的含量測定方法研究[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30（5）：343-345.

[5]Catalan J，F(xiàn)ernandez-Alonso JI.An investigation of the possible relation between electronic structure and antirheumatic activity in the hydroxy-benzoic acids[J].Experientia，1976，23（Suppl）：177-183.

[6]Mehler EL，Habicht J，Brune K.Quantum chemical analysis of structure activity relationships in nonsteroidals antiinflammatory drugs[J].Molpharmacol，1982，22（3）：525-528.

[7]Kiso Y，Suzuki Y，Watanabe N，et al.Antihepatotoxic principles of Curcuma longa rhizomes[J].Planta Med，1983，49（3）：185-187.

[8]原 忠，余江天，蘇世文.用薄層掃描法測定中藥狗脊和黑狗脊中原兒茶酸及咖啡酸的含量[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，17（5）：338-340.