環(huán)孢素A單克隆全血試劑盒殘余試劑再利用研究

鄭芝欣，翟保同，周 成

（河南省南陽市中心醫(yī)院，河南南陽 473001）

環(huán)孢素A是目前臨床常用的強效免疫抑制劑，廣泛用于器官移植術后抗排異反應和某些自身免疫性疾病的治療[1]。由于在治療劑量下，其生物利用度和藥動學個體差異很大，治療中進行血藥濃度監(jiān)測及藥動學和藥效學研究，對提高移植器官的存活率、減少毒性反應和排異反應的發(fā)生具有重要的臨床意義[2-3]。環(huán)孢素A的血藥濃度監(jiān)測方法有高效液相色譜法（HPLC）、放射免疫法（RIA）、熒光偏振免疫法（FPIA）等[4-5]。FPIA因方法快捷、靈敏可靠、重現(xiàn)性好而被臨床廣泛采用。在利用FPIA對環(huán)孢素A進行血藥濃度監(jiān)測過程中，主要依賴于環(huán)孢素A試劑盒，由于目前國內(nèi)尚無技術生產(chǎn)該試劑盒，試劑盒的供應還依賴于進口，價格較為昂貴，是環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測的最主要耗材，也是造成臨床上環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測成本和費用較高的主要原因。在環(huán)孢素A的實際血藥濃度監(jiān)測中，每套試劑盒利用100次左右時就不能再用，而試劑盒中仍殘余不少試劑，扔掉極為可惜。為探討如何利用這些殘余試劑，降低臨床監(jiān)測成本，筆者進行了該項研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

TDX/FLX全自動快速血藥濃度測定儀，高速離心機，TDX單克隆全血濃度標準曲線盒（批號93258Q100），質控盒（批號 03071Q100），標準試劑盒（批號 13107Q102），混合試劑盒（批號13107Q100的殘余試劑與批號17774Q101的殘余試劑進行混合）；以上均為美國ABBOTT公司產(chǎn)品。

1.2 樣品來源

2007年6～9月在我院進行環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測的20例腎移植患者，年齡20～60歲，手術時間6個月～5年，均同時于9∶00服藥前抽取血樣，分別用標準試劑盒和混合試劑盒進行環(huán)孢素A血藥谷濃度測定。

1.3 方法

所有樣品均在同一上午測定。標準試劑盒測定：用微量移液器精密吸取150 μl混勻后的全血樣品，置于離心管中，精密加50 μl紅細胞溶解劑，再精密加300 μl沉淀劑，在渦旋混合器上充分混勻，高速離心后將上清液全部倒入樣品杯中用標準試劑盒進行測定。混合試劑盒測定：用微量移液器精密吸取168 μl混勻后的全血樣品，置于離心管中，精密加50 μl紅細胞溶解劑，再精密加 282 μl沉淀劑，在渦旋混合器上充分混勻，高速離心后將上清液全部倒入樣品杯中用混合試劑盒進行測定。所有操作均嚴格按照操作規(guī)程進行，微量移液器使用也嚴格按照說明書要求進行。

2 結果

2.1 兩試劑盒的質控結果比較

質控標準分三檔，分別為高（680～920 ng/ml）、中（340～460 ng/ml）、低（120～180 ng/ml），兩試劑盒質控均符合標準要求，但混合試劑盒高、中、低質控值均比目標濃度低約12%。見表1。

表1 兩試劑盒質控結果（ng/ml）Tab.1 The results of control in two reagent packs(ng/ml)

2.2 兩試劑盒測定結果比較

標準試劑盒測定結果（X）＞混合試劑盒測定結果（Y）的樣品數(shù)為11個，X＜Y的樣品數(shù)為9個，同一樣品最大差距為7.26 ng/ml，最小差距為0.44 ng/ml，兩組數(shù)據(jù)經(jīng)配對t檢驗，無顯著性差異（P＞0.05）。 見表 2。

表2 兩試劑盒測定結果統(tǒng)計學分析（n=20）Tab.2 The statistic analysis of the results in two reagent packs(n=20)

2.3 兩試劑盒測定結果相關性分析

以標準試劑盒測定結果為X，混合試劑盒測定結果為Y進行線性回歸分析，得回歸方程為：Y=-1.9380+1.0058X，r=0.9994（n=20）。

3 討論

由表1可以看出，標準試劑盒高、中、低質控結果與目標濃度吻合較好，說明測定所用標準曲線液、試劑、質控液均較穩(wěn)定，對測定結果影響較小；而混合試劑盒高、中、低質控結果雖然也在要求范圍之內(nèi)，但3個質控結果均比目標濃度低約12%，說明兩個殘余試劑盒混合后也很穩(wěn)定，但與標準試劑盒相比存在一定的偏差，而偏差方向一致，存在一定的系統(tǒng)誤差，為使測定結果更加準確，在利用混合試劑盒測定樣品時筆者對每個樣品均比常規(guī)抽取量（150 μl）多抽取12%（18 μl），而對沉淀劑比常規(guī)抽取量（300 μl）少抽取 18 μl，每份樣品混合后總量仍為500 μl。

結果表明，利用標準試劑盒對標準抽取量的樣品進行測定結果與利用混合試劑盒對經(jīng)過調(diào)整抽取量的樣品測定結果吻合非常好，統(tǒng)計學處理顯示無顯著性差異，相關性分析顯示相關性較強，說明采取該種方案可行。據(jù)此，我們在實際操作中可以根據(jù)每套殘余試劑混合后與標準質控存在的偏差比例，對抽取的樣品量作出適當調(diào)整，使測定結果更加準確，更能反映真實的血藥濃度。由于機器內(nèi)部設定操作次數(shù)限制和試劑盒中殘余試劑液面較低，每套環(huán)孢素A試劑盒用到100次左右就無法再用，而每套試劑盒中殘余的試劑經(jīng)與另一套殘余試劑混合后至少還可操作15～20次，可節(jié)約成本2000～3000元，經(jīng)濟效益非常明顯。

[1]陳耿,董家鴻.環(huán)孢素A治療藥物監(jiān)測的研究進展[J].第三軍醫(yī)大學學報,2003,25(6):551-554.

[2]李金恒.臨床治療藥物監(jiān)測的方法和應用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:102-103.

[3]魏筱華,劉通,劉明珪,等.腎移植術后CsA血藥濃度監(jiān)測及其臨床意義[J].江西醫(yī)藥,2003,38(6):414-416.

[4]繆海均,鄧渝林,惲蕓蕾,等.不同免疫分析儀在環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測中的差異[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2004,24(4):223.

[5]劉文豹,劉杰,劉增.FPIA、RIA在環(huán)孢素A血藥濃度監(jiān)測中的對比分析[J].放射免疫學雜志,2008,21(5):423.