紫外可見分光光度法測定不同產地柴胡中多糖含量

李棣華，劉俊紅，伍孝先

（天津市南開醫院中西醫結合急腹癥研究所，天津 300100）

《中國藥典》（2005版）規定供藥用的柴胡為傘形科柴胡或狹葉柴胡功能具有和解退熱、疏肝解郁、升舉陽氣。為中醫治療少陽證的首選中藥。筆者通過建立柴胡多糖的含量測定方法及測定11個不同產地的柴胡中多糖含量，以便初步考察不同產地柴胡有關多糖含量方面的質量狀況。

1 儀器與試藥

UV—160型SHIMADZU紫外分光光度儀；十萬分之一天平Sartorius BP211D;無水葡萄糖對照品（批號：110833-200302）購自中國藥品生物制品檢定所；試劑均為分析純；

2 方法[1]與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取無水葡萄糖對照品22.60 mg，置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水使溶解，稀釋至刻度，搖勻；精密吸取上述溶液3.0 mL，置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻即得對照品溶液。

2.2 對照品溶液最大吸收波長測定 精密吸取無水葡萄糖對照品溶液，按標準曲線項下操作，于200～800 nm進行全波長掃描，無水葡萄糖在487 nm處有最大吸收，故確定檢測波長為487 nm。

2.3 線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 分別置于 10 mL 容量瓶中，分別加蒸餾水至1.0mL，再分別加入5%苯酚1.6mL，混勻，然后加濃硫酸7.0 mL，混勻，放置10 min，再于冷水中冷卻15 min，加水至刻度，搖勻，隨行空白，于487 nm處測定吸光度；以葡萄糖重量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程為：C＝16.259ABS－0.0169，r＝0.9986，表明無水葡萄糖在10.848～75.936 μg 之間線性關系良好。

2.4 供試品溶液的制備方法考察

2.4.1 乙醇回流次數考察 取柴胡粉末0.25 g，精密稱定，置于100 mL圓底燒瓶中，每次加入乙醇50 mL，按設定提取次數水浴回流提取，每次1 h，濾過，濾液棄去。殘渣揮干乙醇，連同濾紙一起加入60 mL蒸餾水，回流提取1 h，濾過，用熱水洗滌殘渣3次，定容至100 mL容量瓶中，搖勻。再精密吸取5.0 mL置于25 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻即可，按標準曲線項下操作進行測定。結果提取次數分別為1、2、3次時，多糖含量分別為65.993、62.985、61.689 g/kg生藥。根據結果，同時考慮操作時間，以提取2次為宜。

2.4.2 水提取用量考察 取柴胡粉末0.25 g，精密稱定，置于100mL圓底燒瓶中，每次加入乙醇50mL，水浴回流提取2次，每次1 h，濾過，濾液棄去。殘渣揮干乙醇，連同濾紙一起加入按設定用量蒸餾水，回流提取1 h，以下同2.4.1操作。結果水用量分別為45、60、75 mL 時，多糖含量分別為 59.824、62.985、60.539 g/kg生藥。結果表明水提取用量以60 mL為佳。

2.4.3 水提取時間考察 取柴胡粉末0.25 g，精密稱定，置于100mL圓底燒瓶中，每次加入乙醇50mL，水浴回流提取2次，每次1 h，濾過，濾液棄去。殘渣揮干乙醇，連同濾紙一起加入60 mL蒸餾水，按設定回流時間提取，以下同2.4.1操作。結果提取時間分別為 0.5、1.0、1.5 h，多糖含量分別為 60.097、62.985、63.282 g/kg生藥。結果表明，水提取時間以1.5 h為佳。

2.4.4 結論 根據上述實驗可確定柴胡藥材多糖供試品溶液制備的主要步驟為乙醇回流提取2次，殘渣加入60 mL蒸餾水，水提取1.5 h。

2.5 穩定性實驗 精密吸取無水葡萄糖對照品溶液，按標準曲線項下操作，每30 min測定吸光度，共測定5次。柴胡多糖吸光度的相對均數標準±偏差值（RSD）為0.69%，說明供試品溶液在2 h內穩定。

2.6 重復性實驗 按照供試品溶液制備方法，取同批柴胡藥材，制備6份供試品溶液，按標準曲線項下操作測定，柴胡多糖含量的RSD%為3.08%。

2.7 加樣回收率實驗 取已知含量柴胡藥材，按照供試品溶液制備方法制備6份，加入適量對照品溶液，按標準曲線項下操作測定，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率結果（n=6）Tab.1 Results of spotting recovery（n=6）

2.8 樣品含量測定 按2.4項下制備11種不同產地柴胡藥材供試品溶液，平行取樣3份，按標準曲線項下操作測定，計算多糖含量。結果見表2。

3 討論

柴胡多糖的加樣回收率實驗過程中發現，柴胡藥材中加入無水葡萄糖進行回收率實驗，測定值比理論值減少近50%，經分析表明無水葡萄糖溶于95%乙醇中，乙醇提取時損失。曾采用先以95%乙醇提取柴胡藥材，再加入無水葡萄糖進行回收率實驗，結果回收率仍不合格，為找原因進行了無水葡萄糖耐熱實驗，發現無水葡萄糖損失率達62.94%。表明無水葡萄糖對熱不穩定。因此本實驗采用在最后定容時加入無水葡萄糖標準品進行加樣回收率實驗。

表2 柴胡藥材多糖含量測定結果（n=3）Tab.2 Results of quantification of polysaccharide（n=3）

在實驗過程中，發現柴胡多糖供試品放置一定時間后含量下降，經分析認為可能是供試品中含有的細菌分解多糖之故。供試品經蒸汽滅菌后，再進行穩定性實驗，結果顯示含量穩定，表明上述假設正確。這提示含多糖的樣品若需要一定時間后在測定或進行動物實驗，必須滅菌保存。

[1] 余 暉,陸兔林.柴胡不同炮制品多糖含量測定[J].時珍國醫國藥，1997，8（5）：447-448.