輕度認知功能障礙淋巴細胞及炎癥蛋白檢測

吳萬振 于恩彥 任愛華 朱利月 周建妹 王 強

輕度認知功能障礙淋巴細胞及炎癥蛋白檢測

吳萬振 于恩彥 任愛華 朱利月 周建妹 王 強

目的 探討MCI認知功能與淋巴細胞及炎癥蛋白的關系。方法 研究阿爾茨海默病(AD，36例）、輕度認知障礙(MCI，34例）及認知功能正常老年人(認知正常組，36人）的外周血淋巴細胞亞群、免疫球蛋白及炎性蛋白的差異。結果 認知正常組、MCI組與AD患者的免疫球蛋白G(IgG）濃度中位數依次為10.5g/L、10.6g/L、13.1g/L(χ2=14.28，P＜0.01）；輔助性T淋巴細胞(TH）比例的中位數依次為41%、35%、37%(χ2=9.96，P＜0.01）；三組間差異有統計學意義。其中認知正常組與MCI組的IgG差異無統計學意義(Z=0.64，P=0.52），而AD組IgG水平高于MCI組(Z=3.26，P＜0.01）和認知正常組(Z=3.22，P＜0.01）；認知正常組TH高于AD組(Z=2.55，P＜0.05）和MCI組(Z=2.95，P＜0.01），而MCI組與AD組的TH差異無統計學意義(Z=0.18，P=0.86）。結論 IgG可能在AD與MCI、認知功能正常者的鑒別方面具有重要意義；TH水平降低可能是認知功能受損的標志。

輕度認知障礙 阿爾茨海默病 輔助性T淋巴細胞

阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD）是一組病因未明的原發性退行性腦變性疾病，多起病于老年期，潛隱起病，以智能損害為主，緩慢不可逆地進展(2年或更長）。但病因尚不清楚，近年來，越來越多的研究表明AD起病及其發展過程中與腦內炎癥改變有關［1］。輕度認知障礙(mild cognition impairment，MCI）描述的是介于正常老化和AD之間的一種過渡階段的認知狀態［2］，本研究檢測認知功能正常老年人、AD及MCI患者外周血淋巴細胞及炎癥相關物質，探討炎癥與認知功能的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

病例組研究對象來源于2006年8月—2008年8月在我院住院年齡大于60歲的患者。

AD組：采用簡易智力狀態檢查［3］(minimentalstatus examination，MMSE）以及臨床癡呆評分量表［4］(clinical dementia rating，CDR）作為篩選工具，其中，評分標準如下：0提示健康，0.5提示可疑癡呆，1.0為輕度癡呆，1.5為中度癡呆，2.0為重度癡呆［4］。再采用美國國立神經病語言機能紊亂和卒中研究所及阿爾茨海默病和相關疾病協會的標準［5］作出可能AD的診斷。

MCI組，主要為認知功能受到損害，但是尚未達到癡呆的程度，參考Grundman［6］標準，納入標準為：①主訴記憶障礙，而且有知情者證實；②總體認知功能正常，但可有某一認知方面的變化；③日常生活能力基本正常；④與相同年齡和同等教育程度者相比，存在記憶損害，記憶功能評分在這些匹配組分值1.5個標準差以下，亦即MMSE總分24～28分，CDR評分為0.5分；⑤不夠癡呆的標準。

認知功能正常老年組(簡稱認知正常組），主要來源于參加社區健康宣教者，沒有記憶力明顯下降的主訴，社會功能正常，MMSE總分30分。

排除具有明確證據的感染(體溫＞37.2℃，白細胞或者中性粒細胞增多），使用免疫抑制劑者。

研究經過本院倫理委員會審核通過，所有的受試者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

檢測認知正常組、MCI組與AD患者外周血淋巴細胞亞群(TT為總T淋巴細胞，TB為總B淋巴細胞，TH為輔助性T淋巴細胞，TS為抑制性T淋巴細胞，TNK為總自然殺傷細胞），免疫球蛋白(IgA，IgG，IgM）及炎性蛋白(AAG為α1-酸性糖蛋白，CER為銅藍蛋白，HPT為觸珠蛋白）。檢測淋巴細胞方法，抽取外周靜脈血，EDTA-K2抗凝，采用Becton Dickinson，FACScanlibur流式細胞儀，雙色檢測法，采用Becton Dickinson simultest IMK-lymphocyte原裝配套試劑盒，嚴格按照說明書流程操作；炎癥相關物質檢測方法，抽取外周靜脈血，分離血清，采用Beckman Immage 800特種蛋白儀檢測炎癥相關物質，試劑采用Beckman原裝配套試劑盒，嚴格按照說明書流程操作。

1.3 統計方法

所有資料均使用SPSS11.5統計軟件包分析，符合正態分布的計量資料用均數±標準差表示，用方差分析進行檢驗。不符合正態分布的計量資料用中位數表示，采用秩轉換的非參數檢驗，多個樣本之間比較采用Kruskal-Wallis檢驗，兩組之間比較用Mann-Whitney檢驗，以P＜0.05為檢驗水準。

2 結果

本研究納入受試者情況如下：AD組共36例，男性26例，女性10例，平均年齡(83.2±3.5）歲，MMSE得分為(13.9±8.7）分，CDR評分為1～3分。MCI組共34例，男性26例，女性8例，平均年齡(81.9±4.0）歲，MMSE得分為(26.2±1.7）分，CDR評分為0.5分。認知正常對照組共36人，男性24人，女性12人，平均年齡(81.5±3.4）歲，CDR評分為0分。三組的性別構成(χ2=0.84，P=0.65）、年齡(F=2.15，P=0.12）差異無統計學意義。

三組檢測結果見表1。認知正常組、MCI組與AD患者三組間的IgG和TH差別具有統計學意義。其中認知正常組與MCI組的IgG差異無統計學意義(Z=0.64，P=0.52），而MCI組IgG水平低于AD組(Z=3.26，P＜0.01），認知正常組IgG水平低于AD組(Z=3.22，P＜0.01）；認知正常組TH高于AD組(Z=2.55，P＜0.05）和MCI組(Z=2.95，P＜0.01），而MCI組與AD組的TH差異無統計學意義(Z= 0.18，P=0.86）。三組間α1-酸性糖蛋白，銅藍蛋白以及觸珠蛋白差異無統計學意義。

表1 認知正常組、MCI與AD患者外周血淋巴細胞亞群免疫球蛋白及炎性蛋白檢測結果

3 討論

近年來研究發現在AD患者腦組織病理變化中伴隨某些腦內免疫反應，并與病情變化有一定的聯系，在疾病的進程中，神經炎癥反應包括有利和有害作用。AD患者神經病理研究表明，小膠質細胞的活化比較早，要先于老年斑和神經纖維纏結的形成。活化的小膠質細胞產生并釋放潛在的毒性物質，包括氧自由基，致炎癥細胞因子，興奮性毒素和蛋白酶，這可能破壞鄰近的神經元。除了產生致炎癥細胞因子，小膠質細胞也可以產生抗炎癥細胞因子，比如白介素(IL）-10［7］。這些發現提示AD患者腦部免疫功能改變，同時發現AD患者存在著外周淋巴細胞免疫功能的改變［8］。

研究提示，AD患者TT的百分比低于健康對照組［8］，本研究顯示，AD組TT水平與認知正常組差異無統計學意義，結果的不同可能與樣本的來源、數量及方法等多種因素有關，但本研究AD組TH水平低于認知正常組，支持重度AD患者TH亞組水平明顯降低［9］的結論，這可能是因為TH淋巴細胞在AD患者細胞調亡中表現出更強的易損性［10］。本研究顯示，AD組與MCI組TH水平差異無統計學意義，提示MCI作為AD的臨床前狀態，在外周淋巴細胞免疫功能的改變有別于認知功能正常者，提示TH水平降低可能是認知功能受損的標志。Magaki［11］對MCI的研究中，發現細胞因子IL-6，IL-8，IL-10產生增加，表明免疫活化是一個在AD之前的早期現象，而MCI作為癡呆的臨床前期，TH受到的影響更大；在癡呆患者中，TH比例稍增加推測可能隨著疾病的進程，認知功能的下降，免疫狀態處于新的動態平衡，CD4+免疫細胞數目略微恢復。然而，也存在不同的發現［8］。TH細胞主要是通過分泌細胞因子，如γ-干擾素(IFN-γ），IL-2，IL-10等發揮免疫功能，IFN-γ活化巨噬細胞，還能促進IgG的生成，IgG能夠通過調理作用和激活補體系統促進巨噬細胞的吞噬和殺傷能力；IL-2刺激激活的T細胞增生和產生細胞因子，促進炎癥反應；IL-10可以抑制促炎癥細胞因子的產生，抑制T細胞產生IL-2，并且抑制抗原特異性T細胞的激活，以及抑制單核細胞和巨噬細胞的活性［12］。

IgG是血清和細胞外液中含量最高的免疫球蛋白，是再次免疫應答的主要抗體，其親和力高，分布廣泛，通過經典途徑活化補體，并且可以與巨噬細胞、NK細胞結合，發揮調理作用，以及抗體依賴細胞介導的細胞毒作用［12］。有一些證據表明，AD患者血清或者外周循環細胞出現特異性的免疫改變［8，13］。本研究結果顯示，AD患者的IgG含量較MCI組與健康對照組明顯升高，表明AD患者存在著外周淋巴細胞免疫功能的改變，支持前述的研究結果，雖然，AD患者的IgG含量升高的機制還不清楚，但這一結果提示IgG含量在鑒別AD與MCI及認知功能正常者的方面可能具有重要意義。

α1-酸性糖蛋白、銅藍蛋白以及觸珠蛋白為非特異性急性反應相蛋白，血清中含量如果升高，可能預示某種疾病或病理狀態［14］，其在AD中的研究相對較少［15］，而在MCI中研究則未見報道。本研究三組間三者的差異無統計學意義，但我們做的只是初步的探討，有必要擴大樣本進一步驗證這一結果。

由于MCI描述的是介于正常老化和癡呆之間的一種過渡階段的認知狀態，因此隨著潛在的生理和病理過程的不同，MCI組可能存在著顯著的異質性［2］。我們選擇的MCI同樣存在這些問題，因此需要動態觀察這組患者認知功能以及其免疫功能的變化。AD腦內免疫反應是一個復雜的過程，其外周炎癥反應尚需進一步探討。

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2 吳萬振，于恩彥.輕度認知障礙概念和神經心理學研究進展.神經疾病與精神衛生，2007，7(4）：311-315.

3 張明園.精神科評定量表手冊.長沙：湖南科技出版社，2003：184-188.

4 Morris JC.The clinical dementia rating(CDR）：current version and scoring rules.Neurology，1993，43(11）：2412-2414.

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6 Grundman M，Petersen RC，Ferris SH，et al.Alzheimer's disease cooperative study.Mild cognitive impairment can be distinguished from Alzheimer disease and normal aging for clinical trials.Arch Neurol，2004，61(1）：59-66.

7 Rogers J，Strohmeyer R，Kovelowski CJ，et al.Microglia and inflammatory mechanisms in the clearance of amyloid beta peptide.Glia，2002，40(2）：260-269.

8 Richartz-Salzburger E，Batra A，Stransky E，et al.Altered lymphocyte distribution in Alzheimer's disease.J Psychiatr Res，2007，41(1 -2）：174-178.

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11 Magaki S，Mueller C，Dickson C，et al.Increased production of inflammatory cytokines in mild cognitive impairment.Exp Gerontol，2007，42(3）：233-240.

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15 Marianne JE，Mirjam IG，John MM，et al.Inflammatory proteins in plasma and the risk of dementia：the Rotterdam study.Arch Neurol，2004，61(5）：668-672.

Objective：To investigate the relationship between inflammation and cognitive function. Methods：The differences of peripheral blood lymphocyte subsets，immunoglobulin and inflammatory protein among Alzheimerˊs disease(AD，n=36），mild cognitive impairment(MCI，n=34）and healthy elderly(n= 36）were examined.Results：The median levels of immunoglobulin G(IgG）and the percentages of helper T lymphocytes(TH）were 10.5g/L，10.6g/L，13.1g/L(χ2=14.28，P＜0.01）and 41%，35%，37%(χ2=9.96，P＜0.01），respectively，among healthy elderly，MCI and AD，in that order.There were statistically significant among three groups.There was no statistically significant difference in IgG between healthy elderly and MCI(Z =0.64，P=0.52）.The level of IgG was higher in AD than in MCI(Z=3.26，P＜0.01）and healthy elderly (Z=3.22，P＜0.01）.The level of TH was higher in healthy elderly than in AD(Z=2.55，P＜0.05）and MCI(Z=2.95，P＜0.01）.There was no statistically significant difference in TH between MCI and AD(Z= 0.18，P=0.86）.Conclusion：IgG may play an important role in differentiating healthy elderly，MCI and AD. Reduction in TH level could be a sign of cognitive impairment.

Mild cognitive impairment Alzheimer's disease Helper T lymphocyte

2009-06-01）

(本文編輯：張紅霞）

Examinations of lymphocytes and inflammatory proteins in mild cognitive impairment Wu Wanzhen，Yu Enyan，Ren Aihua，Zhu Liyue，Zhou Jianmei，Wang Qiang.Zhejiang Hospital of Zhejiang Provence，Hangzhou 310013

浙江省醫藥衛生科技計劃項目(2006A013）

浙江省浙江醫院 310013。通信作者：于恩彥，電子信箱y_enyan@yahoo.com.cn