胎膜組織中IL－2水平變化與胎膜早破關系的探討

葛會敏 郭海英

胎膜早破(PROM)是指臨產前胎膜破裂。胎膜早破的發病因素至今仍未完全明確，一般認為是基因、環境等多因素造成的。本實驗利用原位雜交法觀察Th－1型細胞因子 IL－2在胎膜早破孕婦與正常妊娠孕婦的胎膜組織中的表達情況，通過比較胎膜早破組與正常妊娠組胎膜組織中的Th1型因子 IL－2是否存在差異，從免疫角度分析胎膜組織中Th1型因子IL－2與胎膜早破的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選擇我院2006年12月至2007年6月住院胎膜早破孕婦20例(PROM組)、正常足月妊娠孕婦20例分娩的單胎初產婦，所有受試對象孕期順利，無產科及內外科合并癥，胎膜早破者均在破膜12 h內剖宮產終止妊娠。2組年齡、孕齡差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 胎膜早破、正常組臨床資料對照n=20，

表1 胎膜早破、正常組臨床資料對照n=20，

組別 年齡(歲) 孕齡(孕周)PROM組27.0±2.12 35.25±1.09對照組27.8±3.05 36.24±1.83

1.2 方法

1.2.1 標本采集:術后留取剖宮產近胎兒娩出口處胎膜二塊1.5cm×1.5cm大小，用4%多聚甲醛固定、石蠟包埋備用。

1.2.2 試劑:兔抗人的IL－2單克隆抗體SP免疫組化試劑盒均購自武漢博士德生物技術有限公司。

1.2.3 實驗步驟:①將胎膜蠟塊連續切片二張，分別做HE染色、IL－2檢測。②HE染色、觀察:切片脫蠟至水，HE染色脫水透明封片，光學顯微鏡觀察炎細胞浸潤情況。結果判定:根據高倍鏡下(×200)白細胞是否浸潤羊膜、絨毛膜，將40例胎膜分為2組:羊膜絨毛膜炎組即白細胞浸潤≥5個/HP，無羊膜絨毛膜炎組即白細胞浸潤＜5個/HP或無浸潤。③IL－2免疫組化法檢測免疫組化SP法染色，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照，用已知IL－2的組織切片作陽性對照(染色步驟按試劑盒說明操作)。

1.3 免疫組化結果判定 所有標本均先在光鏡下觀察切片陽性染色的分布及強度，胞漿中出現黃色和棕黃色顆粒為陽性信號，在計算機Motic Med 6.0數碼醫學圖像分析系統內測定陽性染色部位的平均光密度值(OD)，隨機選取5個視野，分別計算每個視野的陽性強度，取其平均值。IL－2以陽性細胞染色的積分光密度值(OD)值來表示抗原表達量。

1.4 統計學分析應用SPSS 14.0統計軟件，計量資料以表示，先進行方差齊性檢驗，方差齊用t檢驗和方差分析，不齊則用t檢驗，單因素兩組間比較用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胎膜組織中Th1細胞因子IL－2水平比較 IL－2陽性反應物均為黃色顆粒，可分布于細胞漿，主要位于羊膜上皮細胞、成纖維細胞、絨毛膜滋養細胞。見圖1。

圖1 IL－2在正常妊娠組的胎膜中表達(HE×400)

2.2 PROM組與正常組的Th1型細胞因子IL－2水平比較PROM組胎膜組織中Th1型細胞因子 IL－2表達為(0.2958±0.0103)均高于正常組(0.1987±0.421)，差異有統計學意義(P＜0.05)。數據顯示:胎膜組織中Th1型細胞因子 IL－2表達水平升高與胎膜早破的發生可能有關。

2.3 羊膜絨毛膜炎組與無羊膜絨毛膜炎組胎膜組織中Th1型細胞因子IL－2表達水平比較 羊膜絨毛膜炎組胎膜組織中Th1型細胞因子 IL－2表達水平為(0.3015±0.0225)高于無羊膜絨毛膜炎組(0.2307±0.0307)，差異有統計學意義(P＜0.05)。數據顯示:羊膜絨毛膜炎時胎膜組織中Th1型細胞因子 IL－2表達水平升高。

2.4 胎膜無羊膜絨毛膜炎組再分為PROM、正常組，并對其胎膜組織中Th1型細胞因子IL－2水平進行比較 PROM組胎膜組織中Th1型細胞因子IL－2水平為(0.2505±0.0304)高于正常組(0.2009±0.1001)，差異有統計學意義(P＜0.05)。數據顯示:無羊膜絨毛膜炎時胎膜早破的胎膜Th1型因子IL－2胎膜早破表現更明顯。可以推測胎膜早破的發生與胎膜細胞免疫亢進有關。

3 討論

3.1 Th1型細胞因子IL－2與胎膜早破 Th1型細胞因子IL－2是由活化的T細胞、NK細胞、巨噬細胞分泌［1］，它可以促進炎細胞的滲出與趨化并且激活單核－吞噬細胞、中性粒細胞等，此外對母胎界面滋養細胞的生長和代謝活性有較強的抑制和促調亡作用。IL－2受體屬于Ⅱ型細胞因子受體家族，分布在除成熟紅細胞外的幾乎所有細胞表面，IL－2可以與細胞外基質相連的形式存在故通過旁鄰的方式控制細胞生長。

胎膜內層是羊膜，外層由絨毛膜和已明顯萎縮的包蛻膜及壁蛻膜組成。羊膜源于外胚層的無血管透明膜，主要靠羊水供應營養;絨毛膜是由滋養葉細胞而來的中胚層組織，絨毛膜內有血管，可通過彌散作用為羊膜提供營養，它與羊膜一樣起保護作用，提供免疫耐受，防止早產發生;蛻膜組織是由母體子宮內膜在孕激素作用下衍變來。這三層組織共同維持胎膜完整，當胎膜細胞數量減少、膠原纖維含量減少及結構改變，均可以導致胎膜張力降低［2］，導致胎膜早破的發生。

本研究發現:PROM孕婦胎膜組織中IL－2水平顯著升高，可能參與了胎膜早破的發生機制。推測有以下幾方面原因:(1)PROM胎膜中IL－2升高表明了胎膜局部Th－1細胞及Th－1細胞因子占優勢。細胞毒T細胞可以通過自身分泌顆粒酶溶解細胞壞死，還可以通過Fas－FasL途徑誘導細胞調亡;IL－2可以通過刺激炎細胞分泌細胞因子如TNF、IL－6等發揮其細胞毒作用。(2)IL－2因子自身不僅促使胎膜細胞調亡增加，而且可誘導mmP 表達，增強，MMPs的活性，使胎膜降解［3］。(3)體外實驗證明IL－2具有抑制成纖維細胞合成Ⅰ、Ⅲ膠原纖維和纖連蛋白作用，使膠原合成減少，胎膜張力降低而破裂［4］。

3.2 胎膜早破與羊膜絨毛膜炎的關系 本研究比較了有羊膜絨毛膜炎組與無羊膜絨毛膜炎癥組胎膜中Th1型細胞因子IL－2水平，結果表明羊膜絨毛膜炎組胎膜組織中Th1型細胞因子IL－2水平高于無羊膜絨毛膜炎組(P＜0.05)。提示羊膜絨毛膜炎時胎膜局部存在Th1型因子IL－2增高，存在感染Th1炎癥極化現象。

Th1型因子IL－2參與了胎膜局部炎癥發生，也可能與PROM發生有關。首先IL－2有明顯的促炎作用［5］可以促進炎細胞的滲出與趨化并且激活單核－吞噬細胞、中性粒細胞等，活化的炎細胞分泌大量酶分解膠原纖維，胎膜破裂;再者IL－2可誘導其它 Thl細胞因子(如 IL－6、7、8、17、TNF－α 等產生)［6］，共同組成炎性細胞因子正反饋網絡，可促使MMP－9mRNA的表達，破壞胎膜組織細胞結構和功能。

3.3 無炎癥組的PROM與正常組的比較 本研究顯示無炎癥的PROM組與正常妊娠組的比較結果與不分炎癥時比較結果是一致的。即PROM組IL－2表達水平顯著高于正常妊娠組，說明細胞免疫在PROM的重要作用。

目前公認胎膜滋養細胞不受NK細胞的攻擊主要依賴于HLA－G的存在，而據劉伯寧［7］報道起免疫保護作用的 HLA－G僅在人類的底蛻膜和平滑絨毛膜中的絨毛外滋養細胞(EVT)表達，那么當HLA－G表達量減少時，胎膜滋養細胞就要受NK細胞的攻擊，導致PROM的發生發展。

Thl/Th2型細胞因子與滋養細胞的HLA－G表達存在以下關系:Th2型因子IL－10上調胎膜滋養細胞HLA－G，當母體免疫微環境中過量表達Thl型細胞因子如IL－2等抑制了Th2型因子IL－10的表達，間接導致胎膜滋養細胞HLA－G下調，HLA－G表達量減少，一方面促使Th0向Th1分化，誘導了Thl型細胞因子IL－2等偏移，同時對NK細胞抑制作用減弱，激發母體對胎兒的免疫排斥，如淋巴細胞毒性反應。如此往復，形成惡性循環，導致PROM的發生發展。綜上所述本研究提示了胎膜組織中IL－2水平升高與胎膜早破之間存在密切關系，進一步揭示了細胞免疫可能參與了胎膜早破發生。

1 龔非力主編.醫學免疫學.第2版.北京:科學出版社，2003.72－75.

2 Vishal Pandey，Kellie Jaremko，Robert M，et al.The force required to rupture fetal membranes paradoxically increases with acute in vitro repteated stretching.Am J Obstet Gynecol，2007，196:165－167.

3 EISS，Makhseed M，Aizieh F，et al.Increased expression of pro－inflammatory cytoxines in placentas of women undergoing spontaneous preterm delivery or premature rupture of membranes.Am J Report Immunol，2004，52:45－52.

4 The Essential Involvement of Cross－Talk between IL－2and TNF－βin the skin Would－Healing Process.Yuko，Ishida Toshikazu Konda etal The Journal of immunology，2004，172:1848－1855.

5 豐有吉主編.婦產科學.第2版.北京:人民衛生出版社，2005.101－104.

6 龔非力主編.醫學免疫學.第2版.北京:科學出版社，2003.64.

7 劉伯寧.妊娠期高血壓疾病的胎盤病理學研究進展.中國實用婦科與產科雜志，2004，20:597.