乳腺癌組織中ER β與NF-κB的表達(dá)及意義

韓芬 楊曉

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率逐年上升。大量研究認(rèn)為其發(fā)病與雌激素刺激有關(guān)，而雌激素通過雌激素受體(ER β)發(fā)揮作用，雌激素受體與乳腺癌關(guān)系一直是國內(nèi)外研究的重點(diǎn)。核因子κB(NF-κB)是一種廣泛存在于體內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，對腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡具有核心調(diào)節(jié)作用。本研究采用免疫組化SP法對乳腺癌中NF-κB與ER β的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，并結(jié)合臨床病理學(xué)特征分析其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2008年1月至2009年1月河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科手術(shù)治療、病理資料完整的乳腺癌病理蠟塊82例，全部病例術(shù)前均未行放療、化療及性激素藥物治療。患者均為女性，年齡30～76歲，平均年齡47.5歲。其中有腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者47例，無腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者35例。根據(jù)2002年國際抗癌協(xié)會(huì)(UICC)TNM分類標(biāo)準(zhǔn)分為:I期12例，Ⅱ期36例，Ⅲ期19例，Ⅳ期15例。組織病理學(xué)分級(jí)(按病例資料記錄):G1(高分化)36例，G2(中分化)17例，G3(低分化)29例。同時(shí)收集到同期45例患者的癌旁正常組織作對照。

1.2 主要試劑 兔抗人NF-κB多克隆抗體、鼠抗人ER β單克隆抗體及SP試劑盒、DAB顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，做4 μm連續(xù)切片，用高壓鍋抗原修復(fù)，SP兩步法、DAB顯色，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。PBS替代一抗作為陰性對照，已知陽性的乳腺癌切片作為陽性對照。

1.4 結(jié)果判斷 光鏡下NF-κB陽性反應(yīng)為細(xì)胞漿呈現(xiàn)棕黃色，ER β陽性反應(yīng)為細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色。在400倍光鏡下觀察，并選取10個(gè)背景清晰的高倍視野，根據(jù)陽性細(xì)胞所占視野所有腫瘤細(xì)胞的百分比計(jì)算出每例標(biāo)本的NF-κB與ER β表達(dá)率。根據(jù)其表達(dá)率及染色強(qiáng)度分別記為:(-，陰性)無明顯陽性反應(yīng)細(xì)胞或陽性細(xì)胞面積小于10%，染色淺;(+，弱陽性)陽性細(xì)胞面積大于10%，但小于50%，染色較深;(++，強(qiáng)陽性)陽性細(xì)胞面積大于50%，染色深。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)或Fisher＇s確切概率法，相關(guān)分析采用列聯(lián)表資料的χ2檢驗(yàn)。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB和ER β在乳腺癌和癌旁正常組織中的表達(dá)(見表1) NF-κB表達(dá)于細(xì)胞漿，乳腺癌組織中陽性表達(dá)率分別為45.1%，高于癌旁組織陽性表達(dá)率15.6%，具有顯著性差異(P＜0.05)。ER β表達(dá)于細(xì)胞核，乳腺癌組織中ER β陽性表達(dá)率為25.6%，低于癌旁組織64.5%，具有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 乳腺癌組織三種蛋白的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系(例，%)

2.2 NF-κB和ER β與乳腺癌主要臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系(見表1) NF-κB的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率(55.3%)高于無腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(31.4%)，二者之間具有顯著性差異(P＜0.05);NF-κB的表達(dá)與腫瘤大小、組織分級(jí)、TNM分期之間無顯著性差異(P＞0.05)。

ER β的表達(dá)與組織分級(jí)有關(guān)，高分化組陽性表達(dá)率(38.9%)高于中低分化組(15.2%)，二者之間具有顯著性差異(P＜0.05);ER β的表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間無顯著性差異(P＞0.05)。

表2 乳腺癌組織中NF-κB與ER β表達(dá)的相關(guān)性(例)

2.3 NF-κB與ER β在乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性(見表2)

ER β陽性表達(dá)的21例乳腺癌組織中，NF-κB陽性表達(dá)7例(33.34%)，ER β 陰性表達(dá) 61 例中，NF-κB 陽性表達(dá) 30 例(49.18%)，Pearson相關(guān)分析顯示，NF-κB 和ER β 在乳腺癌組織中的表達(dá)無關(guān)(P＞0.05)。

3 討論

核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-κB)是一種廣泛存在于細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)錄因子，是多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的聚會(huì)點(diǎn)。活化的NFKB在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制與它抗凋亡及促進(jìn)細(xì)胞生長等有關(guān)［1］。本研究結(jié)果顯示:NF-κB在乳腺癌組織陽性表達(dá)率(45.1%)高于癌旁正常組織(15.6%)，NF-κB蛋白的表達(dá)與是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05)，提示NF-κB參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，且與乳腺癌的浸潤及轉(zhuǎn)移有關(guān)，與國外學(xué)者［2］研究結(jié)果相似。

雌激素受體ER β是在人乳腺組織中發(fā)現(xiàn)的一種新的雌激素受體亞型。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)ER β幾乎存在于所有正常個(gè)體的乳腺組織內(nèi)，并且是乳腺間質(zhì)中主要ER形式［3］。在對一系列乳腺癌癌前期病變研究中也發(fā)現(xiàn)ER β蛋白水平較正常明顯下降。大多數(shù)研究結(jié)果提示ER β蛋白陽性表達(dá)是一個(gè)提示預(yù)后良好的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，ER β在癌旁正常組織中陽性表達(dá)率(64.5%)明顯高于乳腺癌組織(25.6%)，與國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道相符。ER β表達(dá)與組織分級(jí)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，與 Skliris等［4］研究結(jié)果一致。ER β 在乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展中的作用，可能成為評(píng)估乳腺癌病變及患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一。

本研究顯示，NF-κB和ER β在乳腺癌組織中的表達(dá)無關(guān)(P＜0.05)。目前，有關(guān) ER與NF-κB的相互作用已被廣泛地研究，但在目前的研究中仍存在不一致的結(jié)論，其差異可能與不同的組織細(xì)胞類型及相互作用的環(huán)節(jié)不同有關(guān)，因此二者在乳腺癌中的表達(dá)關(guān)系仍需進(jìn)一步研究。

ER β在乳腺癌中的潛在作用存在著很大的爭議。有研究發(fā)現(xiàn)ER β有促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。因此，ER β與NF-κB的相互作用十分復(fù)雜，作用環(huán)節(jié)仍未完全明確，有待進(jìn)一步研究和探討。

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［2］Nagai S，Washiyama K，Kurimoto M，Takaku A，Endo S，Kumanishi T.Aberrant nuclear factor kappa B activity and its participation in the growth of human malignant astrocytoma.J Neurosurg，2002，96(5):909-917.

［3］Roger P，Sahla ME，Makela S，et al.Decreased expression of estrogen receptor beta protein in proliferative preinvasive mammary tumors.Cancer Res.2001，61(6):2537-2541.

［4］Skliris GP.Munot K.Bell SM，et al.Reduced expression of oestrogen receptor beta in invasive breast cancer and its reexpression using DNA methyl transferase inhibitors in a cell line model.J Pathol 2003，201(2):213-220.