乳腺癌骨轉移與耐藥基因蛋白表達的關系及臨床病理意義

張志強 陳剛 李揚揚 韓玉貞

乳腺癌是女性最常見惡性腫瘤之一，并且其發病率呈逐年上升趨勢，嚴重危害廣大婦女的身體健康。應用99mTc-MDP對乳腺癌患者進行全身骨掃描可以早期發現骨轉移病灶，并且有很高的靈敏度，對指導患者的治療以及判斷預后有很重要的意義。耐藥基因蛋白檢測對指導臨床化療有重要意義。關于骨掃描與耐藥基因蛋白的關系國內未見報道。本文通過對乳腺癌骨掃描和耐藥基因蛋白的檢測，以期探明乳腺癌骨轉移與耐藥基因蛋白之間關系及臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集濱州醫學院附院2006年1月～2008年12月乳腺浸潤性導管癌61例，并同期進行99m锝-亞甲基二磷酸鹽(99mTc-MDP)全身骨掃描檢查，患者均為女性，行乳腺癌改良根治術，術前均未進行過放療、化療及免疫治療。所有標本均用10%的中性甲醛溶液固定，石蠟制片，4μm連續切片，行HE及免疫組化染色。

1.2 方法

99mTc-MDP全身骨掃描檢查所用儀器為德國西門子公司生產的單光子發射型計算機斷層顯像儀(Siemens,e.Com SPECT)，靜脈注射99mTc-MDP20～25mci，注射后囑患者飲水500～1000ml，2～3h后進行顯像。檢查前排盡尿液，減少膀胱干擾；檢查過程中防止病人體位移動。患者取仰臥位，進行前位和后位兩個體位的顯像。

免疫組化采用Envision二步法，TopoⅡ、LRP和GST-π抗體均購自福州邁新公司。切片常規脫蠟至水，用微波修復抗原，DAB顯色，蘇木素復染。用PBS代替一抗作為陰性對照，已知陽性切片作為陽性對照。

1.3 結果判定

1.3.1 骨轉移判斷標準 骨顯像結果由兩位有經驗的ECT診斷醫師閱片。正常骨骼顯像清晰，頭顱、脊柱、骨盆呈均勻放射性分布，雙側肢體、肋骨呈對稱、均勻放射性分布；與正常放射區相比，特別是與對側或四周骨比較，當出現彌漫性、隨機性或者局限性的單發或多發的異常放射性濃聚或稀疏區時，結合臨床，排除外傷和其它骨骼病變，判斷為骨轉移。

1.3.2 免疫組化染色 TopoⅡ以細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性判定標準；LRP和GST-π以細胞漿中出現棕黃色顆粒為陽性判定標準。根據癌細胞的陽性細胞所占的百分數等級，將結果分為：陽性細胞表達數＜10%為陰性，10%～25%(+)，＞25%～50%(++)，＞50%(+++)；(+)～(+++)均為陽性。

1.4 統計學處理

用Visual FoxPro 6.0數據庫管理軟件調用患者原始數據，查詢出相應的頻數資料；用SPSS13.0統計軟件導入數據進行Pearsonx2檢驗及關聯分析。

2 結果

2.1 全身骨掃描轉移率與臨床病理特征的關系

61例乳腺癌患者的全身骨掃描檢查骨轉移率為52.46%(32/61)；骨轉移與腫瘤的大小、腋窩淋巴結轉移呈顯著正相關(均P＜0.01)，而與年齡大小無顯著關系(P＞0.05)。全身骨掃描轉移率與臨床病理特征的關系見表1。

2.2 耐藥基因蛋白與臨床病理特征的關系

TopoⅡ的陽性率與腫瘤的大小呈顯著正相關關系(P＜0.01)，而與年齡大小及淋巴結轉移無顯著相關(均P＞0.05)。LRP和GST-π與年齡、腫瘤大小及淋巴結轉移無顯著相關(P＞0.05)。耐藥基因蛋白與臨床病理特征的關系見表2。

2.3 全身骨掃描與TopoⅡ、LRP、GST-π之間的關系

61例乳腺癌組織中的TopoⅡ、LRP和 GST-π的表達率分別為78.69%(48/61)、77.05%(47/61)和75.41%(46/61)。乳腺癌中骨轉移陽性率與TopoⅡ的陽性表達率呈明顯正相關關系(r=0.423，P＜0.01)，而與LRP，GST-π無顯著相關關系(P＞0.05)，全身骨轉移與TopoⅡ、LRP和GST-π的關系見表3。

表1 全身骨掃描轉移率與臨床病理特征的關系

表2 耐藥基因蛋白與臨床病理特征的關系

表3 全身骨轉移與TopoⅡ、LRP和GST-π的關系

3 討論

有研究表明，應用99mTc-MDP進行全身骨掃描可以早期發現骨轉移病灶，并且有很高的靈敏度[1-2]，同時對指導患者的治療以及判斷預后有很重要的意義[3-4]。本研究發現，在乳腺癌中全身骨掃描陽性率與腫塊大小呈正相關，說明乳腺癌腫塊大者腫瘤細胞的侵襲性較強，與血管內皮細胞粘附、穿過血管內皮和基底膜的能力增強，進而較易發生骨轉移，與文獻報道一致[5-6]；同時觀察到全身骨掃描檢查的骨轉移與腋窩淋巴結轉移呈正相關，說明乳腺癌發生淋巴結轉移者，腫瘤細胞通過血道轉移進而發生骨轉移的能力亦增強，與有關研究結果相符[2,7-8]，提示隨著腫瘤不斷浸潤性生長，其發生淋巴道和血道轉移的幾率不斷增加。

乳腺癌是一種對化療比較敏感的實體瘤。目前化療仍是乳腺癌術后主要的治療手段之一，在乳腺癌的綜合治療中占有很重要的地位。但是腫瘤的多藥耐藥是導致化療失敗的主要原因，臨床上如何合理選擇化療藥物并減少或避免多藥耐藥一直是研究的熱點。腫瘤多藥耐藥的機制尚不完全明了，其與TopoⅡ、LRP和GST－π的表達關系密切。本研究觀察到腫塊直徑≥3cm的乳腺癌中TopoⅡ的陽性表達率高于腫塊直徑＜3cm的乳腺癌(P＜0.01)；TopoⅡ的陽性表達與腫塊的大小呈顯著正相關(P＜0.01)，與相關文獻報道一致[9-11]，提示TopoⅡ的表達可以作為評價乳腺癌患者預后的指標[12-14]；有學者研究TopoⅡ之所以可以作為評價預后的指標，與TopoⅡ的表達能夠反映腫瘤細胞的增殖活性有關[14-15]。有關乳腺癌骨轉移與耐藥基因蛋白表達的關系，國內未見報道。本研究結果表明：全身骨掃描骨轉移陽性率與TopoⅡ的表達呈正相關關系(r=0.423,P＜0.01)，而與LRP和GST－π的表達無相關關系(P＞0.05)，提示乳腺癌骨轉移的患者有較高的TopoⅡ基因蛋白的表達，在臨床化療時可以選擇針對TopoⅡ作為靶目標的相關治療藥物，通過干擾TopoⅡ的功能發揮其殺傷腫瘤細胞的作用，具體的作用機制及其臨床療效尚有待于進一步研究。

綜上所述，在乳腺浸潤性導管癌中，腫塊的大小、腋窩淋巴結轉移以及TopoⅡ陽性表達可以作為評價患者預后的指標。乳腺癌患者進行全身骨掃描檢查，對骨轉移陽性者檢測TopoⅡ的表達，可針對性選擇化療藥物，提高療效。

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