金標法與酶聯免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的方法學比較

066100 北京軍區北戴河療養院 李巖 姜梅 陳松楠 李娜

乙型肝炎是目前流行最廣泛、危害最嚴重的病毒性肝炎之一[1]，我國為乙型肝炎病毒感染的高流行區，正常人群的乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶率一般為10%～15%[2]。目前檢測HBsAg的方法以酶聯免疫吸附法 (ELISA)為代表，該法以其操作簡便、快速、靈敏、準確、重復性好、無放射污染等特點被廣泛使用；金標法(Gold immnnochromatography，GICA)是在ELISA基礎上發展起來的一種檢測技術，由于其具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設備等優點，也廣泛應用于HBsAg的初篩。本文對兩種方法檢測結果進行比較，探討其差異性。

1 材料與方法

1.1 標本來源 來自2009年4～8月北京軍區北戴河療養院體檢人員、門診患者及療養人員1 024例，其中男615例，女409例。抽取靜脈血3 mL，標本靜置后離心取血清。

1.2 方法

1.2.1 金標法 嚴格按照使用說明書的要求操作，在層析擴散正常的情況下，質控區出現1條紫紅色條帶，測試區未出現紫紅色條帶為陰性；質控區和測試區均出現紫紅色條帶為陽性；僅測試區出現，質控區未出現紫紅色條帶，結果無效。HBsAg金標試紙條加樣后15～20 min觀察結果，30 min后出現的反應線視為無效。

1.2.2 ELISA 采用雙抗體夾心法原理在微孔條上預包被純化乙肝表面抗體(HBsAb)，配以酶標記抗體(HBsAb-HRP)及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的HBsAg。嚴格按照說明書進行操作。

2 試劑與儀器

金標法快速測試條由浙江杭州艾康生物技術有限公司提供(批號：200805164/d)，ELISA試劑盒由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供(批號：X20090101)，酶標儀：Rayto6000，洗板機：Rayto3000，恒溫箱：WMZK-02，加樣器：M148023。

3 結果

金標法與ELISA檢測HBsAg的比較，在1 024份標本中ELISA檢出HBsAg陽性92份，陽性率為8.98%；金標法有5份假陰性，9份假陽性，陽性率為9.37%，靈敏度為94.56%，特異度為99.03%。兩法結果經配對計數資料的χ2檢驗，χ2＝0.046 9，結果顯示兩種方法測定的HBsAg結果間差異無統計學意義，P＞0.05。但漏檢率仍為5.4%，誤差率為0.88%，準確度為98.63%(表1)。

表1 金標法與ELISA法檢測結果比較

4 討論

用抗HBsAg多克隆抗體包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標記的抗(HBsAg)單克隆抗體HBsAb，應用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清或血漿中HBsAg。

本實驗結果表明，金標法與ELISA法的靈敏度有差異，金標法的靈敏度稍低于ELISA法[3-4]。目前，國產的HBsAg膠體金試紙條檢測靈敏度已達到1 ng/mL[5]，而ELISA試劑的靈敏度可達0.5 ng/mL，這可能是造成ELISA法檢測弱陽性標本金標法檢測陰性的主要原因，還有金標法存在的一個重要的問題就是層析的速度，如果速度過快，HBsAg未能與試紙條上的HBsAb結合，就越過了檢測線，弱陽性樣本還未顯示，這也可能導致漏檢。國內作者報道，由于金標法易受環境、濕度、反應時間及加樣量的影響，對于低滴度HBsAg感染者極易造成漏檢[6]。ELISA法檢測HBsAg以靈敏度高、特異性強、可進行定量和半定量測定尤為突出，重復性好，可進行批量檢測，但操作步驟相對繁瑣，試劑實際要求嚴格，影響因素多。因此實驗室要結合工作情況合理選用試驗方法。

[1]葉維法，鐘振義.肝炎學大典[M].天津：天津科學技術出版社，1996：463-515.

[2]姜雙應.青海省病毒性肝炎血清流行病學調查[J].中國病毒性肝炎血清流行病學調查(下卷)，1997，7(1)：224.

[3]陳瀑，康紅.膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎的評價[J].臨床輸血與檢驗，2003，5(1)：30-31.

[4]曾章新，劉文星，樂忠勇，等，膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原的評價[J].中華醫學檢驗雜志，1999，22(6)：327-329.

[5]周繼文，戎廣亞，楊守純，等.膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎病毒表面抗原[J].中華醫學檢驗雜志，1998，21(1)：30.

[6]施紀問，徐簡華，溫惠萍.ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原的比較[J].現代檢驗醫學雜志，2005，20(5)：48-49.