內蒙古野生銀白離褶傘子實體組織分離試驗

馮曉宇，鄒 莉，王志英，臧丹丹

（東北林業大學林學院，黑龍江 哈爾濱 150040）

銀白離褶傘Lyophyllum connatum(Schum.:Fr.)Sing.又叫做合生杯傘、真姬菇 （日本）、從生杯傘。同物異名：Clitocybe connata(Schum.:Fr.)Gill.隸屬傘菌目Agaricales、白蘑科Tricholomataceae、離褶傘屬Lyophyllum。銀白離褶傘子實體一般較小或中等大小，呈石膏樣白色。菌蓋直徑3 cm~8 cm，扁平球形至近平展，中部稍突或平，表面白色，后期近灰白色，近邊緣有皺條紋。菌肉白色。菌褶后期似帶粉黃色，直生又延生，稠密，不等長。菌柄細長，白色，下部彎曲，常有許多柄叢生一起，內部實心至松軟[1]。可食用，有特殊的香氣味[1]。

1 材料和方法

1.1 供試種菇

從內蒙古圖里河地區采集的野生銀白離褶傘，選擇朵型正常，無病害、蟲孔、破損的子實體作為供試種菇。

1.2 培養基配方

馬鈴薯葡萄糖瓊脂 （PDA）培養基：去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g~20 g，水1 000 mL，自然pH。121℃高壓蒸氣滅菌20 min。

1.3 試驗方法

1.3.1 孢子印觀察

選取形狀規則八九分成熟的種菇，切去大部分，菌柄用無菌水沖洗數遍后再用已滅菌的濾紙吸干表面水分。在無菌室內，把種菇菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面，漏斗倒蓋在培養皿上面；上端小孔用棉花塞住。靜置12 h~20 h，菌褶上孢子就會散落在培養皿內，形成孢子印。

1.3.2 菌絲體形態觀察

在載玻片上滴加1滴蒸餾水，用解剖針從生長有銀白離褶傘的PDA平板中挑取少量菌絲，用50%的乙醇浸潤，再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細地用解剖針將菌絲分散開來。蓋上蓋玻片，勿產生氣泡，且不要移動蓋玻片。先用低倍鏡，再轉換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結果。

1.3.3 子實體的組織分離

在超凈工作臺上，將子實體用75%的醫用酒精擦拭表面2遍~3遍；先用解剖刀沿銀白離褶傘縱向輕輕劃開小口，再用手掰開；切取菌蓋處、菌褶和菌柄交界處、菌柄處的組織塊，分別接種于PDA培養基平板上。每皿接4塊子實體，設置4組重復，置于25℃恒溫無光培養。每隔1 d觀察并記錄菌絲生長情況。

1.3.4 新鮮子實體與陰干3 d子實體的對比分離

組織分離法分別分離新鮮的子實體和經過陰干3 d后的子實體，各接4塊子實體于PDA平板上，設置4組重復，置于25℃無光條件下恒溫培養。每隔1 d觀察并記錄菌絲生長情況。

1.3.5 污染率

每隔1 d觀察菌絲體的生長情況，對發生污染的培養皿及時進行轉皿培養，并做好記錄。

2 結果與分析

2.1 孢子印的觀察

觀察到的孢子印與菌褶排列一致，孢子印白色，粉末狀或放射狀。

2.2 菌絲體形態的觀察

經過24 h培養后，可見組織塊上面長出放射狀的菌絲，再經過1 d菌絲開始蔓延到平板培養基上。大約25 d～30 d菌絲可長滿整個培養皿，結果見圖1、圖2。

圖1 菌絲體形態

圖2 菌絲體顯微結構

從圖1可以看出菌絲潔白、粗壯、顏色一致；菌落呈規則圓形、邊緣整齊；無菌絲分泌物，并且具特殊的香味。從圖2可以看出，顯微鏡下的菌絲較纖細，粗細均勻，菌絲細胞呈狹長狀。

2.3 子實體不同分離部位的菌絲生長對比

子實體不同分離部位的菌絲生長對比情況見表1。

表1 子實體不同部位分離結果

從表1可以看出，菌褶和菌柄交界處的組織塊為最佳組織培養部位，萌發快，菌絲生長速度快，菌絲潔白細密。菌蓋處和菌柄處次之。

2.4 菌絲體污染率

新鮮子實體的菌絲體污染情況見表2。

從表2可以看出，新鮮子實體的菌絲體，菌蓋處的平均污染率為31.25%，菌褶和菌柄交界處的平均污染率為18.75%，菌柄處的平均污染率為31.25%。可見，菌褶和菌柄交界處的污染率最低，菌柄處和菌蓋處的污染率相同，均較高。陰干3 d子實體的菌絲體污染情況見表3。

從表3可以看出，經陰干3 d后的子實體生長的菌絲體，菌蓋處的平均污染率為25.00%，菌褶和菌柄交界處的平均污染率為12.50%，菌柄處的平均污染率為18.75%。可見菌褶和菌柄交界處的污染率最低，菌柄處略高，菌蓋處的污染率最高。

3 結論

內蒙古野生銀白離褶傘子實體各部位經組織分離均能萌發，菌褶和菌柄交界處菌絲生長勢相對最旺且菌絲生長最快，污染率相對最低，為最佳組織分離部位；新鮮子實體的分離污染率相較于陰干3 d后的子實體分離污染率高，選擇陰干子實體的組織進行分離，可得更高的分離率。

表2 新鮮子實體的菌絲體污染率

表3 陰干3 d子實體的菌絲體污染率

目前世界有記錄的離褶傘屬有200余種，其中許多種既是美味的可食菌類，又是很好的藥用真菌，還有抑制癌細胞的效果[2]。但國內外研究最多的是荷葉離褶傘，墨染離褶傘和榆生離褶傘也有研究[2]。

銀白離褶傘作為一種待開發的珍稀野生食用菌，其生物學特性、遺傳育種、馴化栽培研究以及營養和藥用價值等在國內外均未見報道，本文首次對銀白離褶傘進行生物學特性研究，對其進行的試驗可為其價值和栽培的繼續研究提供支持和參考，以便于將來深入研究和開發利用這一珍貴的種質資源。

[1]卯曉嵐.中國大型真菌[M].河南：河南科學技術出版社，2000.

[2]李永紅，柴紅梅，李樹紅，等.離褶傘研究進展[J].中國食用菌，2008， 27(2)： 10－12.