葛根素對血管平滑肌細胞遷移的影響

柴欣樓 王 偉 王綠婭 張永生

(1北京中醫藥大學，北京市朝陽區北三環東路 11號，100029;2北京市安貞醫院)

冠脈形成術造成了血管內皮細胞損傷，加速了血栓的形成。附壁血栓的形成，不僅造成血管的急性閉塞，而且為平滑肌細胞 (vessel smooth musle cell，VSMC)的內遷提供了框架，增殖的 VSMC由血管中層向內膜的遷移是內膜增厚的一個重要機制。在此過程中，細胞邊緣存在大量基質金屬蛋白酶(maxtrix metalloproteinases，MMPs)和纖維蛋白溶解酶，這 2種物質可降解細胞外基質，加速 VSMC的遷移[1]。VSMC遷移的結果可導致內膜中 VSMC的大量積聚和結締組織的形成，進而促進新生內膜形成。

葛根素(Pur)為異黃酮類化合物，屬于植物雌激素。現代藥理研究證明 Pur在心血管中具有多種功能，可擴張心、腦血管，降低血黏度，抑制血小板活性，降低血小板黏附率;可對抗 H2O2引起的無血清培養的 VSMC凋亡及壞死[2]。

本研究以葛根素為研究對象，構建 VSMC遷移模型，Boyden小室法檢測 VSMC的遷移，ELISA法檢測MMP-2、MMP-9的含量，在此基礎上采用明膠—聚丙烯酰胺電泳酶譜分析 VSMC分泌 MMP-2的活性。

1 材料與方法

1.1 材料與分組 1)主要試劑:DMEM培養液(美國GIBCO公司產品)，胎牛血清 (FBS，Hyclone公司產品)，凝血酶(凍干粉，美國 Sigma公司產品)，葛根素原粉(純度 99.7%，由衛生部藥品生物制品鑒定所提供)，MTT、二甲基亞砜(DMSO)、胰蛋白酶和 EDTA、SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒(北京中杉生物制品有限公司)，BCA蛋白定量試劑盒(美國 Bio-Rad公司)，MMP-2、MMP-9 ELISA試劑盒(鼎國試劑公司)。2)VSMC體外培養及鑒定:常規組織貼塊法培養VSMC。實驗用 4～8代細胞。用光鏡和免疫組化方法進行鑒定。3)藥物配制及梯度稀釋。……