侯紅巖,何家惠,侯繼波
(國家獸用生物制品工程技術研究中心,江蘇南京 210014)
豬傳染性胸膜肺炎(PCP) 是由胸膜肺炎放線桿菌(APP)引起豬的一種高度接觸性呼吸道疾病,又稱為豬接觸性傳染性胸膜肺炎。它可致各年齡段的豬發生急性和慢性感染,急性豬傳染性胸膜肺炎以急性出血性纖維素性胸膜肺炎為特征,病豬發熱(可達42℃)、呼吸困難、食欲不振,呈現高死亡率;慢性豬傳染性胸膜肺炎以慢性纖維素性壞死性胸膜肺炎為特征,潛伏于豬群內,可使豬只生長緩慢,平均日增重下降,飼養報酬降低,給養豬業造成巨大的經濟損失。
豬傳染性胸膜肺炎是一種世界性疾病,廣泛分布于全世界所有養豬國家,近十幾年來本病的流行呈上升趨勢,給世界養豬業造成巨大的經濟損失。自1957年Pattison等首次報道豬傳染性胸膜肺炎以來,世界大部分國家相繼報道了本病的暴發和流行,如歐洲、美國、加拿大、墨西哥、南美、韓國、日本、澳大利亞。在我國,1987年哈爾濱獸醫研究所發現臨床病例,并證明豬傳染性胸膜肺炎在我國的存在和流行,特別是近年來隨著我國規模化養豬業的發展,豬傳染性胸膜肺炎在我國多省流行蔓延開來,呈現暴發式流行,嚴重威脅著我國養豬業的發展。
豬胸膜肺炎放線桿菌(APP)是豬傳染性胸膜肺炎的病原菌,該菌屬于放線菌屬,為革蘭氏染色陰性,兩極著色,有莢膜,無芽孢,無運動性。本菌包括兩個生物型,生物Ⅰ型為NAD依賴型,毒力強,生物Ⅱ型為NAD非依賴型,毒力弱。根據細菌莢膜多糖和細菌脂多糖的不同,生物Ⅰ型分為12個血清型,其中血清5型進一步分為5A和5B兩個亞型。但有些血清型有相似的細胞結構或相同的LPSO鏈,這可能是造成有些血清型間出現交叉反應的原因,如血清8型與血清3型和6型,血清1型與9型間存在有血清學交叉反應。我國流行的主要以血清7型為主,其次為血清2、4、5、10型。生物Ⅱ型有2個血清型(13、14),主要分布于歐洲。
研究表明,胸膜肺炎放線桿菌的主要毒力因子包括莢膜、脂多糖、外膜蛋白、黏附素和Apx毒素等。其中,Apx毒素是APP最主要的毒力因子,目前已知APP至少分泌4種Apx毒素,除了新發現的ApxⅣ毒素在所有血清型中都存在外,其他3種只被某些血清型分泌。
豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌與不良飼養管理條件及易感豬群等綜合因素相互作用而引起豬的一種呼吸道傳染病。各種年齡、性別的豬都有易感性,其中6周齡至6月齡的豬較多發,但以3月齡仔豬最為易感,主要是仔豬斷奶后母源抗體消失,增加了對該病的易感性。病豬和帶菌豬是本病的傳染源,急性感染耐過豬或隱性感染豬是帶菌者,成為該病流行的潛在傳染源,是本病防控和根除的隱患。感染豬的鼻汁、扁桃體、支氣管和肺臟等部位是病原菌存在的主要場所,病菌隨呼吸、咳嗽、噴嚏等途徑排出后形成飛沫,通過直接接觸而經呼吸道傳播,也可通過被病原菌污染的車輛、器具以及飼養人員的衣物等而間接接觸傳播,小嚙齒類動物和鳥類也可能傳播本病。
本病的發生具有明顯的季節性,多發生于冬春季節,通風不良、濕度過高、氣溫驟變,可引起本病發生,另外飼養環境突然改變、豬群的轉移或混群、擁擠或長途運輸等應激因素,亦可加速疾病傳播,使發病率和死亡率增加。
本病的流行病學調查方法主要有病原學和血清學。血清學方法有間接血凝試驗、ELISA、協同凝集試驗、乳膠凝集試驗等,血清學方法簡便、快速,但該方法也有其自身的局限性,如亞臨床感染或帶菌狀態下易造成假陰性,且由于國內目前用的疫苗大都是滅活苗,很難對免疫豬和感染豬作出鑒別診斷,使用分子生物學技術建立相關的病原學診斷方法則有著快速、敏捷、特異的優點?,F將幾種實用的流行病學調查方法介紹如下。
(一)間接血凝試驗(IHA)1974年,Nielsen首次報告用IHA來檢測胸膜肺炎放線桿菌的抗體,1983年,Mittal 建立了用于APP檢測和分型的IHA方法, IHA在血清型6和8之間有交叉反應,但可將4型和7型分開,而其它的許多檢測方法都不能將此兩種血清型分開。1999年,逯忠新等建立間接血凝試驗方法,將經戊二醛-鞣酸處理的綿羊紅細胞用豬胸膜肺炎放線桿菌抗原致敏,以間接血凝試驗來檢測豬傳染性胸膜肺炎血清抗體。致敏紅細胞的最佳抗原濃度為100~150μg/ml, 超免血清的抗體效價達1:512~1:1 024,對人工感染4 d的豬血清抗體的檢出率高達80%,與豬瘟、豬肺疫、喘氣病、豬萎縮性鼻炎的陽性血清無交叉反應。間接血凝試驗具有敏感、特異、適用于早期診斷的特點,且能區別經常有交叉反應的血清型4型和7型胸膜肺炎放線桿菌,目前該方法在國內被廣泛采用。
(二)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)該方法敏感性和特異性都較好,莢膜多糖、脂多糖、外膜蛋白等已經作為APP特異性抗原被廣泛應用于ELISA方法的研究,且已經取得很好效果。Leiner 等以原核表達的外毒素ApxII重組蛋白作為抗原,建立了一種特異性ELISA診斷方法。Nielsen 等以APP培養物上清中提取的外毒素ApxI、ApxII、ApxIII作為抗原,建立了相應的ELISA診斷方法,并對APP血清1-12型和14型感染豬只進行了檢測。結果表明,三種毒素的ELISA抗體不能區分不同血清型產生的毒素,認為三種毒素間有抗原相關性。其中外毒素ApxII抗體在各個感染豬都比較高,適合用于APP抗體的檢測。1999年外毒素ApxIV的報道為種特異性ELISA的研究提供了新的方向,豬傳染性胸膜肺炎15個血清型均能夠產生ApxIV毒素,但是在體外培養胸膜肺炎放線桿菌時并不能夠檢測到ApxIV毒素的存在,只有在體內感染(自然感染)的情況下才能夠檢測到ApxIV毒素及其抗體,同時,ApxIV毒素存在于15個血清型中,具有種特異性?;贏pxIV毒素的這種特性,研制的豬胸膜肺炎放線菌ApxIV-ELISA檢測方法,適用于胸膜肺炎放線桿菌感染的鑒別診斷、區分胸膜肺炎放線桿菌感染豬與豬傳染性胸膜肺炎滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬的鑒別診斷,目前已有商品化試劑盒。
(三)聚合酶鏈式反應(PCR)目前,聚合酶鏈式反應(PCR)已經成為APP檢測的一種較流行的手段。該方法敏感性和特異性均高于血清學檢測,可用于疾病的早期診斷和細菌的快速鑒定。國內外學者已經針對APP的omlA基因、apxI、apxII、apxIII、apxIV基 因、omp基因、tbpA和tbpB基因及aroA基因等的特異性片段相繼建立了多種PCR診斷方法,用來檢測胸膜肺炎放線桿菌。不僅可以通過APP基因組進行PCR鑒定,Chiers等還成功擴增到鼻腔和扁桃腺拭子培養基中APP的dsbE類基因,特異性試驗表明相關種屬細菌和其他種屬細菌均擴增不出該基因片段。該試驗方法與基于擴增omlA基因的PCR試驗相比較,前者的符合度較好,特異性和敏感性符合率分別為95%和82%。因此認為,基于擴增dsbE樣基因的PCR試驗是診斷APP菌的一種有效方法。
自2000年以來,豬傳染性胸膜肺炎在國內多省市出現暴發性流行。近年來,北京、貴州、江西、河南等地均報道了未免疫豬群豬傳染性胸膜肺炎的流行情況。
傅彩霞等采用間接血凝試驗對北京地區11個區縣未用過豬傳染性胸膜肺炎疫苗的部分規?;i場的1 980份血清樣品,進行了豬傳染性胸膜肺炎感染抗體檢測。結果顯示,豬傳染性胸膜肺炎總陽性率為25.35%,其中斷奶仔豬陽性率為17.68%,育肥豬陽性率為33.03%,育肥豬的感染陽性率高于斷奶仔豬。19個豬場中有13個為豬傳染性胸膜肺炎陽性豬場,豬傳染性胸膜肺炎在冬春季節的感染率較高,1~3月的陽性率高于4~6月。
陳麗雯等采用間接血凝試驗對2007年和2008年貴陽市不同飼養規模以及不同生產階段的未免疫豬群進行豬傳染性胸膜肺炎(PCP)血清抗體檢測。結果顯示:規模養豬場的PCP陽性血清檢出率為60.2%和52.6%,農村散養戶為25.0%和12.5%;育肥豬群PCP血清抗體陽性率為62.2%和47.4%,斷奶仔豬群為30.3%和23.5%。調查結果表明,貴陽市不同豬群中已普遍存在豬傳染性胸膜肺炎感染,規模豬場感染率高于散養豬,育肥豬感染率高于斷奶豬。
趙萍等通過間接血凝檢測方法對江西省部分豬場的豬傳染性胸膜肺炎的流行情況進行了調查研究,研究結果表明本地區總陽性率為40%,其中母豬陽性率偏高。豬群感染胸膜肺炎放線桿菌的情況可根據臨床癥狀的有無和血清學狀態依次劃分為3個類型,即臨床癥狀陽性血清學陽性(Ⅰ類);臨床癥狀陰性血清學陽性(Ⅱ類);臨床癥狀和血清學均為陰性(Ⅲ類)。通過本次血清學調查,結果Ⅱ類情況居多,即血清學陽性但臨床癥狀陰性;生產母豬的陽性率高于其它日齡豬,可能是生產母豬飼喂時間較長,管理不嚴和圈舍條件有限,容易感染本病,如果感染沒有引起致病,就會成為帶菌者,長期以來就容易產生抗體;從仔豬情況來看,1月齡較2~3月齡的陽性率偏高,這是由于1月齡仔豬受母源抗體與自然感染的雙重影響,消除母源抗體影響, 2~3月齡豬其陽性率結果基本上反映自然感染的情況。
王偉等對周口市所有縣、市、區的畜牧獸醫站與養豬協會和38個不同規模類型的豬場進行了問卷調查和實地走訪,并對5個未免疫豬場的814份豬血清抗體進行檢測,分析豬傳染性胸膜肺炎在周口市養豬業中的流行與感染狀況。結果表明,周口市2005—2007年豬的呼吸道病發病起數占傳染性疾病發生起數的23.71%,對38個不同豬場檢測感染豬傳染性胸膜肺炎的病豬數占飼養豬總數的比例在0~64.45%范圍內,發病豬主要是外來品種,豬發生傳染性胸膜肺炎主要在冬春季節,并且與引種有很大關系。
(一)有明顯的季節性該病的流行具有明顯的季節性特點,特別是氣溫突變及寒冷時多發,病情也較嚴重。豬舍溫度變化過大、濕度過大,豬舍通風不良、空氣質量差(氨氣、硫化氫、二氧化碳),群飼養密度過大,豬的混群、轉群,飼養管理不善,營養不良等應激因素均可導致該病的發生與傳播。
(二)育肥豬感染率高由于種母豬存在較高的豬傳染性胸膜肺炎抗體,哺乳仔豬通過吸乳得到一定量的母源抗體,而仔豬斷奶后,母源抗體消失,容易遭受環境中豬胸膜肺炎放線桿菌的感染,造成發病。另外飼料中保健添加劑減少、豬群的轉群、飼養密度大、其他疫病的發生造成該病在育肥豬和成年豬的發病幾率大大增加。在多處國內流行病學調查也顯示了這一結果。
(三)規模豬場易造成該病的暴發豬傳染性胸膜肺炎在不同飼養規模豬場的流行情況不同,該病經空氣和接觸傳播,規?;i場飼養密度越大,一旦感染,則傳播很快,造成疾病的暴發。因此,養豬集約化程度高的國家和地區該病流行更為嚴重,一旦發生會造成巨大的經濟損失。而散養豬場飼養密度低,流通小,接觸傳染源機會少,感染率低。因此,規?;B豬場豬傳染性胸膜肺炎流行較農村散養戶嚴重。
(四)該病易與其他疾病混合感染豬感染胸膜肺炎放線桿菌后,??梢鹌渌毦幕旌细腥?臨床上常見與副豬嗜血桿菌、多殺性巴氏桿菌的混合感染,從而引起更復雜的呼吸道綜合征,給臨床診斷和控制帶來了一定的難度。另外,豬群感染豬瘟、 豬藍耳病 、豬圓環病毒病等疫病后,機體免疫力下降,繼發豬傳染性胸膜肺炎,繼發感染會使病程延長,病情加重,甚至導致死亡,引起發病豬群的死亡率升高,造成巨大的經濟損失。
豬傳染性胸膜肺炎給我國養豬業造成巨大的危害,尤其近年來,各種疾病混合感染,給該病的診斷與防控帶來一定的難度。因此,應根據豬傳染性胸膜肺炎的流行特點,加強對豬傳染性胸膜肺炎的綜合防控措施,控制該病的發生。
(一)堅持自繁自養實施先進的飼養模式,規范引種程序,加強種豬檢疫,堅持自繁自養,減少引入帶菌種豬。堅持不同日齡豬群分群飼養,堅持全進全出。
(二)加強飼養管理出欄后欄舍徹底清潔消毒,空欄1周才重新使用;改善豬舍不良環境,保持豬舍通風干燥,注意冬季保溫和夏季防暑工作。
(三)加強疫苗免疫目前國內外均已有商品化的滅活疫苗用于本病的免疫接種。一般在5~8周齡時首免,2~3周后二免,母豬在產前4周進行免疫接種,由于豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌血清型較多,各血清型之間交叉保護性不強,應用包括國內主要流行菌株和本場分離株制成的多價滅活疫苗預防本病,效果更好。