北京市藥品監(jiān)督管理局關(guān)于印發(fā)《醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（2010版）》的通知

為增強(qiáng)本市醫(yī)療器械監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產(chǎn)關(guān)鍵環(huán)節(jié)的認(rèn)識和掌握，為全市醫(yī)療器械監(jiān)管人員開展監(jiān)督檢查工作和醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)開展醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理工作提供參考，根據(jù)本市生產(chǎn)企業(yè)現(xiàn)狀和監(jiān)督管理工作的實(shí)際情況，北京市藥品監(jiān)督管理局組織制訂了《醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（2010版）》，現(xiàn)印發(fā)給你們，請參照執(zhí)行。

特此通知。

北京市藥品監(jiān)督管理局

2010年9月14日

附件 醫(yī)療器械無菌試驗(yàn)檢查要點(diǎn)指南（2010版）

無菌檢驗(yàn)是無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)控制過程中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。其檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果判定及檢驗(yàn)人員業(yè)務(wù)能力等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。作為無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)，其無菌檢驗(yàn)工作應(yīng)由本企業(yè)獨(dú)立完成。

本指南旨在幫助北京市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員增強(qiáng)對無菌檢驗(yàn)相關(guān)知識的認(rèn)識，指導(dǎo)和規(guī)范全市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗(yàn)過程控制水平的監(jiān)督檢查工作，同時(shí)，為醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)（以下簡稱生產(chǎn)企業(yè)）在無菌檢驗(yàn)的過程管理要求提供參考和依據(jù)。

當(dāng)國家相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、檢查要求發(fā)生變化時(shí)，應(yīng)重新修訂本指南。

一、適用范圍

本指南適用于北京市藥品監(jiān)督管理局組織、實(shí)施的《醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證》核發(fā)、變更、換證等現(xiàn)場檢查、醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系考核、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范檢查、醫(yī)療器械生產(chǎn)日常監(jiān)督等各項(xiàng)涉及無菌檢驗(yàn)的檢查。

二、檢查內(nèi)容

檢查人員應(yīng)在充分了解生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗(yàn)活動的情況下，對其無菌檢驗(yàn)過程的控制水平進(jìn)行客觀的檢查和評價(jià)。

一般情況下，檢查人員可按照以下順序開展檢查工作，并適時(shí)做好相關(guān)記錄：

1.了解產(chǎn)品特性及生產(chǎn)企業(yè)選擇的無菌檢驗(yàn)方法。常見的產(chǎn)品無菌檢查法包括直接接種法和薄膜過濾法。當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查方法時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進(jìn)行方法的驗(yàn)證，以證明所采用的方法能夠給出正確的結(jié)果。若該產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，檢查方法應(yīng)重新驗(yàn)證。驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)按供試品無菌檢查的規(guī)定及有關(guān)要求進(jìn)行操作。對藥典規(guī)定的每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)也可與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。

2.了解檢驗(yàn)人員的專業(yè)背景、培訓(xùn)情況及工作經(jīng)歷。可通過查看學(xué)歷證書、培訓(xùn)證書或當(dāng)面詢問檢驗(yàn)人員的方式，檢查無菌檢驗(yàn)人員是否具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。

3.現(xiàn)場查看無菌實(shí)驗(yàn)室。無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)（如在萬級潔凈間內(nèi)配置超凈工作臺等）中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期監(jiān)測。

4.現(xiàn)場察看無菌試驗(yàn)所需的設(shè)備和器具。其中，主要設(shè)備包括：恒溫培養(yǎng)箱（真菌、細(xì)菌）、恒溫水浴箱、壓力蒸汽滅菌器、電熱干燥箱、電子天平、光學(xué)顯微鏡、集菌儀、過濾裝置（無油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子）等；（從試驗(yàn)安全性考慮，建議陽性對照試驗(yàn)使用生物安全柜）

主要器具有：試管及試管架、酒精燈、75%乙醇棉、滅菌刻度吸管(1ml)、滅菌平皿（9cm）、錐形瓶、三角燒瓶、滅菌剪刀、鑷子等。

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)采用可靠方法對與供試液接觸的所有器具滅菌，通常置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃30分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2小時(shí)。器具滅菌后必須做好標(biāo)識，標(biāo)明滅菌的時(shí)間和使用有效期。器皿在滅菌后，最多1周即用完。檢查時(shí)還應(yīng)注意清點(diǎn)培養(yǎng)皿的個(gè)數(shù)，與試驗(yàn)記錄中反映的培養(yǎng)基個(gè)數(shù)是否一致。

5.對照生產(chǎn)企業(yè)有關(guān)無菌試驗(yàn)的管理制度、操作規(guī)程等相關(guān)技術(shù)文件，要求檢驗(yàn)人員當(dāng)場操作或口述無菌檢驗(yàn)的過程。

（1）培養(yǎng)基制備

生產(chǎn)企業(yè)可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2℃～25℃、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在1年內(nèi)使用。

無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。

（2）供試品的無菌檢查

無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。無菌試驗(yàn)過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對微生物無毒性。

無菌操作時(shí)，對供試品容器表面應(yīng)用適宜的消毒液進(jìn)行徹底消毒，如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無菌器材（如帶有除菌過濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣，再按無菌操作起開容器取出內(nèi)容物。

（3）培養(yǎng)及觀察

含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

在觀察試驗(yàn)結(jié)果的過程中，還應(yīng)考慮假陰性的影響。其中影響假陰性發(fā)生的因素有：培養(yǎng)條件不能支持微生物的生長（促生長試驗(yàn)）；在無菌試驗(yàn)中，產(chǎn)品中釋放出了殺菌或微生物電解的物質(zhì)（消除抑菌物質(zhì)）；從滅菌處理到培養(yǎng)有一定的時(shí)間間隔（確定滅菌后產(chǎn)品的儲存條件及儲存時(shí)間）。

（4）結(jié)果判斷

生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷：

①若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；②若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長，否則試驗(yàn)無效。

當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)，方可判試驗(yàn)結(jié)果無效：①無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求；②回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；③供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。

試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。

6.查閱試驗(yàn)記錄。完整的試驗(yàn)記錄應(yīng)明確包含下列幾類信息：

（1）樣品記錄，至少應(yīng)包括：取樣日期、樣品名稱、樣品規(guī)格、樣品批號、取樣地點(diǎn)、取樣方式、取樣人、原始試驗(yàn)記錄序號。

（2）滅菌物品制作記錄

①培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)基批號、培養(yǎng)基用量（g）、蒸餾水用量（ml）、培養(yǎng)基分裝數(shù)量、滅菌日期、滅菌的實(shí)際溫度和壓力、滅菌時(shí)間、制作人、培養(yǎng)基存放地點(diǎn)和有效期等。

②器具：器具名稱、器具數(shù)量、滅菌日期、滅菌的實(shí)際溫度和壓力、滅菌時(shí)間、制作人、器具存放地點(diǎn)、有效期等。

（3）原始試驗(yàn)記錄，至少應(yīng)包括：記錄名稱、記錄序號、樣品名稱、樣品唯一性標(biāo)識（例如：樣品號）、樣品規(guī)格、樣品批號、滅菌批號、樣品數(shù)量、取樣日期、檢驗(yàn)日期、檢驗(yàn)依據(jù)、主要試驗(yàn)設(shè)備及器具、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)環(huán)境條件、試驗(yàn)結(jié)果（每日觀察的結(jié)果）、試驗(yàn)結(jié)論、檢測人、復(fù)核人等。

（4）廢棄物處理記錄，至少應(yīng)包括：廢棄物形態(tài)（固體、液體）、廢棄物數(shù)量、滅菌時(shí)間和壓力、經(jīng)辦人、處理日期等。

三、其他應(yīng)注意的問題

1.生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)確保樣品具有代表性：試驗(yàn)樣品應(yīng)從常規(guī)產(chǎn)品中能夠代表加工過程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機(jī)的。試驗(yàn)樣品的選擇和處理技術(shù)應(yīng)明確，以免對樣品上所含的微生物的數(shù)量和種類造成污染和改變。試驗(yàn)樣品可以選擇制造過程中的不合格產(chǎn)品，它們應(yīng)該代表這個(gè)生產(chǎn)批的加工程序和條件。用于試驗(yàn)的不合格產(chǎn)品應(yīng)不會影響無菌測試的有效性。

2.生產(chǎn)企業(yè)對于供試品的選取、轉(zhuǎn)移過程要采取防止污染措施，確保試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。選取制作供試品的試驗(yàn)樣品時(shí)，樣品包裝須完好無損，尤其是只有一層包裝的樣品。進(jìn)入無菌檢驗(yàn)室的樣品若有兩層（或兩層以上）包裝的，須將外包裝在傳遞窗（或緩沖間）拆除后，傳入實(shí)驗(yàn)室。

3.無菌檢驗(yàn)中接觸供試品的試驗(yàn)用具溫度不能過高以防可能存在的菌被燙死。對不同種類和不同批次的產(chǎn)品，在拆包裝及夾取樣品時(shí)，應(yīng)更換試驗(yàn)用具（如：剪刀、鑷子）。

4.進(jìn)入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的外表都應(yīng)采用適用的方法進(jìn)行消毒處理（如：紫外燈照射不少于30分鐘），以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗(yàn)室。出具試驗(yàn)結(jié)果后，所有培養(yǎng)物須經(jīng)121℃高壓滅菌30分鐘的處理。

5.由于無菌檢驗(yàn)時(shí)間跨度較長，因此過程的記錄應(yīng)能夠完整體現(xiàn)試驗(yàn)的全過程，對于在試驗(yàn)過程中出現(xiàn)的各種情況，均應(yīng)在記錄中客觀反映。

參考資料一：常見的名詞解釋（略）

參考資料二：無菌室空氣中菌落數(shù)的檢查（略）

參考資料三：供試品數(shù)量的選擇（略）

參考資料四：培養(yǎng)基的制備（略）

參考資料五：培養(yǎng)基的適用性檢查（略）

參考資料六：方法驗(yàn)證試驗(yàn)（略）

參考資料七：供試品處理及接種培養(yǎng)基（略）

參考資料八：對照試驗(yàn)（略）

參考資料九：參考標(biāo)準(zhǔn)（略）