HPLC法測定裸花紫珠片中木犀草素的含量

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(深圳市羅湖區(qū)中醫(yī)院，廣東 深圳 518001)

裸花紫珠片具有消炎、解毒[1]、收斂、止血的功效，臨床上主要用于細菌感染引起的炎癥，急性傳染性肝炎，急性扁桃體炎、慢性咽炎，外用治燒、燙傷，外傷出血等[2]。有報道對其水提物采用分光光度法進行總黃酮的含量測定[3]，該法干擾多，專屬性差。裸花紫珠中分離到紫珠萜酮、木犀草素等化合物，木犀草素及其配糖體是裸花紫珠中含量較多的成分[4]，為了更好地控制裸花紫珠片的質(zhì)量，保證臨床療效，本實驗采用高效液相色譜法對木犀草素進行含量測定。

1 儀器與試藥

LC-10ATVP泵高效液相色譜儀(日本島津公司)，SPD-10AVP型紫外可見檢測器(日本島津公司)，電子天平，超聲波清洗器。木犀草素對照品(批號111520-200201，購自中國藥品生物制品檢定所)，裸花紫珠片由海南九芝堂藥業(yè)生產(chǎn)，規(guī)格為0.5 g/片×24片。甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4mm,5 μm)，流動相：甲醇-水-磷酸(50∶50∶0.2)，柱溫：25℃；檢測波長：350 nm；流速為1.0 mL/min；進樣量:10 μL。理論板數(shù)按木犀草素峰值計算應(yīng)不低于2 200。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取木犀草素對照品約10 mg,置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻,即得木犀草素對照品儲備液。精密吸取上述溶液1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品20片，除去簿膜衣，精密稱定，研細，取約2.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，甲醇溶液回流提取，提取液水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，濾過，濾液轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照樣品溶液的制備 取不含裸花紫珠的陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制備取得。分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照樣品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖。陰性對照樣品溶液在木犀草素出峰位置處無干擾。

2.5 標準曲線的制備 分別精密吸取木犀草素對照品儲備液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度、搖勻，在上述色譜條件下，各進樣10 μL，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=1.092 6×10-4X-0.080 3，r=0.999 3。結(jié)果表明木犀草素的進樣量在0.012 5～0.206 6μg線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液，重復(fù)進樣6次，測定峰面積1.53%(n=6)。結(jié)果表明儀器的精密度符合要求。

2.7 重復(fù)性試驗 取批號100050裸花紫珠片6分，制備供試品溶液，測定含量，6分樣品中木犀草素的平均含量為1.426 3 mg/片，求得RSD為1.39%。表明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品液，分別于0，2，4，6，8，10 h,進樣10 μL測定木犀草素的含量，RSD為0.68%(n=6)，表明樣品在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 取批號100050裸花紫珠片(含木犀草素2.843 1 mg/g)0.25 g，分別稱取6分，精密稱定，分別精密加入0.10 mg/mL木犀草素對照品溶液1 mL，制備供試品溶液，測定，結(jié)果平均加樣回收率為99.89%，RSD為1.79%。

2.10 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以外標法計算其含量，結(jié)果3批樣品中木犀草素的含量分別為1.436 6，1.469 8，1.583 2 mg/片。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 用紫外可見檢測器對木犀草素的標準溶液進行檢測，木犀草素的最大吸收波長為348 nm，考慮到此波長處為末端吸收,干擾較大,故把檢測波長定在350 nm。

3.2 方法的可靠性 本方法測定裸花紫珠中的木犀草素含量，具有提取及測定方法簡便、快捷、準確，重復(fù)性好的特點，可作為該制劑含量測定的方法。

[1]陳穎,楊國才.裸花紫珠抗炎作用及增強免疫功能的實驗研究[J].廣東微量元素科學(xué),2006,13(8):39-41.

[2]胡蓉,姚閩,李玉云,等.HPLC法測定裸花紫珠藥材中木犀草素的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2009,3(20):271-272.

[3]宋永強,諶樂剛.分光光度法測定裸花紫珠片中總黃酮含量[J].海南醫(yī)學(xué),2005,16(6):152.

[4]王祝年,韓壯,崔海濱,等.裸花紫珠的化學(xué)成分[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報,2007,15(4):359-362.