葛棗獼猴桃組培繁殖的研究

李桂君 宋嘉隆 吳 捷

（黑龍江省林業科學研究所 森林培育室，黑龍江 哈爾濱150081）

葛棗獼猴桃（Actinidia polygama）為獼猴桃科的多年生滕本植物，自然分布于我國東北三省、朝鮮和日本等地。其果實含有豐富的維生素、氨基酸和微量元素，果實和葉片中還含有許多生物活性物質和醫藥成份，對早期快速生長的腫瘤具有明顯的抑制作用。日本人用其葉片制成保健茶葉，十分暢銷。寄生在果實中的癭蠅具有強心利尿、祛風濕、回春等功效。所以，葛棗獼猴桃在市場上有十分廣闊的發展前景。葛棗獼猴桃在我國東北分布雖然較廣，但多是呈零星分布狀態，自然資源不多。加之用途廣泛，采收強度大，資源日趨減少。對葛棗獼猴桃進行組織培養，有利于快速推廣其優良品系，擴大種群數量，為繁榮林區經濟做出貢獻。此前，葛棗獼猴桃組培僅見于劉永立等的報道，他們從葉柄愈傷組織分化出了不定芽并長成了完整植株。而本研究則是通過腋芽增殖的途徑獲得了試管苗并建立了組培快繁體系。

1 材料和方法

2月下旬至3月上旬，剪取葛棗獼猴桃莖段，在室內水培催芽。當腋芽萌動抽出的嫩莖葉長約2cm左右時，從莖部將其切下，放入自來水中沖洗5分鐘，洗去表面污物，向水中加入幾滴洗潔精，搖動片刻后，置于自來水龍頭下沖洗至泡沫全無。倒去自來水后，將材料放入0.1%氯化汞溶液中消毒6至8分鐘，在超凈工作臺上，用滅過菌的蒸餾水浸泡清洗5-6次，將氯化汞殘液洗凈，用無菌濾紙吸干材料上的多余水分。切去斷口部分，將材料切成單芽莖段后接種到誘導培養莖中。

接種時先用手術刀將材料的剪口部位切去，用長鑷子夾取材料將其直接插入培養基約0.8~1.0cm并使其保持直立，每個培養基組合接六瓶，每瓶接種材料五個，接種后一周內及時觀察雜菌污染情況，若發現培養瓶內發生污染立即把未污染的材料轉移到新鮮的培養基或重新接種補齊。接種分別使用MS、WPM和WHITE三種基本培養基，補加0.5-2.0（單位：mg/L下同）的6－芐基嘌呤（BA）或1.0的6-呋喃氨基嘌呤（KT），0.05的α-萘乙酸（NAA）和1－4%的蔗糖，為了便于單因子比較培養基組合詳見表1。

繼代增殖使用的培養基為：MS+BA0.5+NAA0.02+2%蔗糖和WHITE+BA0.5+NAA0.02+2%蔗糖。

生根培養基按表二配制，其組成成分見表2。

培養基配完后加0.6%的瓊脂粉，溶化后用0.1N的NaOH將PH調至5.8，分裝后在1Kg/cm2條件下熱壓滅菌20min。

接種后的材料置于架上光照培養。培養時晝夜溫度變化于20~25℃，白天補充日光燈照明14h，光強度2000lx。

試管苗移栽采用珍珠巖，蛭石，沙壤土三種基質。

2 結果和討論

2.1 誘導培養

材料接種后約一周，腋芽開始膨脹。再經5~6天腋芽開裂長出新的幼芽。接種后20天新芽進入正常生長階段。部分材料由于太過細弱或由于滅菌時間過長使外植體受到藥害，逐漸黃化枯萎，接種后25天時調查材料生長情況見表1。

?

在以MS為基本培養基的組合中，以BA1.0+NAA0.05和2%蔗糖的2號培養基的生長情況最好，誘導率高達80.00%，BA的濃度為2.0和0.5時誘導率分別下降為76.77%和56.67%。在用KT1.0取代BA1.0的4號培養基中，誘導率為73.33%，說明在本實驗條件下，KT的效果不及BA。因此，激素的合理使用對誘導效果有重要作用。若仍采用較優的2號培養基的激素組合，而只將蔗糖濃度調整到1%和4%，誘導率則分別下降到56.67%和30.00%，這說明在葛棗獼猴桃的莖段培養中，蔗糖濃度不宜偏高和偏低，蔗糖濃度為4%時的誘導率較2%時降低幅度達62.50%，所以，較高的蔗糖濃度尤其不宜。

從同時進行的7號和8號培養基組合來看，無機鹽總量中等的WPM培養基和無機鹽總量偏低的White培養基，其誘導率分別為70.00%和50.00%，均低于有同樣附加成分的MS培養基。看來，在葛棗獼猴桃莖段誘導培養階段，仍以無機鹽總量偏高的MS效果為好，無機鹽總量偏低的White培養基其誘導效果最差。

2.2 繼代增殖

當材料長到3~4cm高時，可從節間處將其剪成單節莖段，轉入繼代培養基中進行增殖。繼代培養采用MS和White兩種基本培養基，由于此時試管苗內的激素成分已有所積累，故將BA和NAA濃度分別降至0.5至0.02。這時的材料已完全適應培養基的條件且處在旺盛生長期，生長速度和增殖速度都很快。通過比較發現，從兩種繼代增殖培養基的效果看，MS培養基好于White培養基，可能是后者因無機鹽含量低，營養條件不足所致。經統計，此階段試驗材料的月增殖系數可達到3.0~4.0，完全能夠滿足建立快繁體系的要求。

?

2.3 誘導無根苗生根

將繼代增殖的材料從節間處剪成單節莖段扦插在生根培養基中，14~17天莖基部開始生根，第25天調查的生根情況見表2。

從表2可以看出，不同培養基組合，其生根率有明顯差別，在激素相同的情況下，MS（半）的生根率高于MS培養基。這表明在生根階段適當降低培養基的無機鹽濃度有利于生根，這與其他作者的結果一致。而基本培養基同為MS（半），NAA、IAA和IBA也同為0.5時，其生根率分別為88%、80%和84%。使用NAA者生根率最高，但根較細弱，且莖基部有少量組織；使用IAA時，生根率較低，但根較長，莖基部無愈傷組織；而使用IBA者，生根率較使用NAA時略低，但根較粗壯，且莖基部無愈傷組織。三者綜合比較，使用IBA者根較健康，且莖基部無愈傷組織產生，因此效果最好。

2.4 試管植株移栽

試管植株生根后，增加自然光照強度，使其更加健壯，當根生長至1.5~2.5cm長時移栽效果最好。此時可去掉瓶塞，煉苗3、4天備用。

移苗基質為珍珠巖、蛭石和壤土加沙土（1：1），但后者事先經過了消毒處理，以防雜菌污染。栽苗的容器采用小號營養杯或植苗盤。

移栽時，仔細取出瓶苗，用清水洗去根部的培養莖，勿傷根系，移后，覆好基質，壓實，澆足水，置于光線充足又無陽光直射處緩苗。在幼苗上方覆以塑料膜保持空氣濕度，每天適量噴水并適時打開塑料膜通風換氣，隔日用1%~3%波爾多液噴霧，防止病害發生，1個月后去掉塑料膜進入正常管理。經調查，首批移栽入珍珠巖、蛭石和沙壤土中的試管苗成活率分別為85.00%、90.00%和81.67%。

葛棗獼猴桃試管植株移栽時，有兩個問題值得注意：一是試管植株本身具有完整根系，植株健康；二是移栽條件要有保障，基質溫度23～25℃；基質（土壤）含水量16～18%，水分不宜過大；空氣相對溫度65～70%。只要滿足上述條件，移栽成活率可達90%以上。

興安石竹利用腋芽增殖，產生的再生植株在遺傳上相對穩定，因此這一途徑已在不少植物的快繁上得到了應用。

[1]周以良主編．黑龍江省樹木志，黑龍江科學技術出版社，1986，哈爾濱。

[2]周以良主編．黑龍江植物志，東北林業大學出版社，2003，哈爾濱。

[3]龍曉峰．不同激素水平對西瓜、麗格秋海棠試管苗誘導的影響，內蒙古農業科技，2008（5）。

[4]馮健、蘇麗娜．長白山百合的離體快繁技術研究，北方園藝，2009（4）。

5.朱至清編著．植物細胞工程，化學出版社，2003，北京。

[5]劉永立等．葛棗獼猴桃組織培養中的器官形成與植株再生，果樹學報，2005，（3）