樂果中毒大鼠肝臟損害及氯磷定治療的影響

高恒波 田英平 姚冬奇 蘇建玲 佟飛 馬玉騰 霍書花 陳慧 王英輝

急性有機磷中毒(acute organophasphorous pesticides poisoning，AOPP)是常見的農藥中毒，尤其在發展中國家，農業人口較多，發病率高，救治水平低，AOPP病死率可達 4%～30%[1]。本實驗通過對 SD大鼠胃內灌注致死量樂果制備 AOPP模型，對中毒大鼠不予治療及給予氯磷定和阿托品治療或單用阿托品治療，觀察其病情變化，于染毒后不同時間取血測丙氨酸氨基轉移酶(ALT)進行肝細胞損害的研究。報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物分組 SD大鼠 180只，體重 180～220 g(河北醫科大學實驗動物中心提供)。隨機分為 6組，其中對照組 6只，未治療組 6只，治療組 168只分為 4組，組別為阿托品組、大、中、小劑量氯磷定 +阿托品組[2]，各治療組染毒后每個時段(1、2、4、6、8、10、12 d)6只。

1.2 試劑 樂果乳油，江蘇南京農藥廠生產。氯磷定，北京四環制藥廠生產(批號:070902)。阿托品，天津金耀氨基酸有限公司生產(批號:0707032)。

1.3 實驗方法 對照組:給 1ml 0.9%氯化鈉溶液灌胃。剩余各組:給予 2L D50(640 mg/kg)的樂果灌胃，用 0.9%氯化鈉溶液將設計量的樂果稀釋到 1 ml給大鼠一次性灌胃染毒。未治療組:無特殊處理。阿托品組:3 min左右給予阿托品10mg/kg肌內注射，之后據大鼠流涎、流淚、呼吸困難等體征情況酌情追加給藥。小劑量氯磷定 +阿托品組:3 min左右給予阿托品10 mg/kg肌內注射 +氯磷定 10mg/kg肌內注射，之后阿托品據大鼠體征情況酌情給藥；此后氯磷定于中毒后 2、4、6分別給予5 mg/kg肌內注射，然后停藥。中劑量氯磷定+阿托品組:3 min左右給予阿托品 10mg/kg肌內注射 +氯磷定 10 mg/kg肌內注射，之后阿托品據大鼠體征情況酌情給藥；氯磷定于中毒后 2、4、6 h分別給予 5 mg/kg肌內注射，之后 5 mg/kg肌內注射每 6小時 1次，用至 24h，改為 5mg/kg肌內注射每 12小時 1次，用至 48 h停藥。大劑量氯磷定+阿托品組:3 min左右給予阿托品 10 mg/kg肌內注射 +氯磷定 20 mg/kg肌內注射，之后阿托品據大鼠體征情況酌情給藥；氯磷定突擊劑量 10 mg/kg肌內注射:1次 /h，連用 3次，之后每 2小時 1次連用 3次，再每 3小時 1次用至 24 h，每 4小時 1次用至 48 h，最后每 6小時 1次用至第 4天，停用氯磷定。

1.4 6組大鼠中毒后表現與評定標準 流涎、流淚、肌顫、肌無力、抽搐、呼吸困難、發紺；肌無力評分標準參照 De Bleecker標準對大鼠 Ops中毒后肌無力癥狀進行評分:0分:正常活動，無肌無力；1分:后肢肌無力導致共濟失調但仍能自主活動；2分:尾部疼痛刺激后僅有輕微活動；3分:尾部給予疼痛刺激后肢體不能活動，不伴昏迷。

1.5 標本采集 未治療組待大鼠死亡，治療組于染毒后 1、2、4、6、8、10、12 d取血，測 ALT值分析其變化規律。

1.6 統計學分析 應用 SPSS 11.0統計軟件，計量資料以 ˉx±s表示，進行方差齊性檢驗，有意義者進行最小顯著差法(LSD法)，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床表現 樂果染毒后，未治療組依次出現流涎、眼分泌物增多、下頜肌肉顫動、全身肌顫、呼吸困難、口唇明顯發紺、肌力逐漸下降，所有大鼠于(9±8)h出現口吐白沫、抽搐而死亡。其他各治療組能很好地改善染毒大鼠癥狀，除阿托品治療組死亡 2只外，其余中毒大鼠均存活。給予氯磷定+阿托品治療組均比同等劑量單用阿托品治療組癥狀輕，恢復快(P＜0.01)，大劑量氯磷定+阿托品組比中小劑量組癥狀輕、恢復快(P＜0.01)。中劑量氯磷定 +阿托品組比小劑量組恢復快(P＜0.01)。 見表 1、2。

表 1 5組主要癥狀發生時間比較 n=6，h，ˉx±s

表2 4組主要癥狀持續時間比較n=6，h，ˉx±s

2.2 ALT結果

2.2.1 應用氯磷定 3組與阿托品組比較結果:在染毒后第 6天 3組比較除中小劑量組間無差異外(P＞0.05)，其余均存在明顯差異(P＜0.05或 ＜0.01)，3氯磷定治療組 ALT峰值均明顯低于阿托品組(P＜0.05)。見表 3。

2.2.2 ALT峰值隨時間變化均有下列趨勢:染毒后 ALT隨時間延長逐漸升高，至 6 d時達高峰。見表 3、圖 1。

表 3 4組 ALT值比較 n=6，U/L，ˉx±s

圖 1 4治療組不同時期 ALT值變化曲線

3 討論

樂果屬工農業生產常用的高毒類有機磷農藥，其中毒機制為通過抑制體內膽堿酯酶(ChE)活力，從而產生一系列毒蕈堿及煙堿樣癥狀，嚴重時可導致患者死亡。有觀點認為膽堿酯酶復能劑對樂果中毒療效可疑[3]，本實驗模擬不同劑量氯磷定治療 AOPP的方法，結果表明治療效果明顯。對于早期、足量、足療程應用氯磷定治療 AOPP，臨床報道已經不少[4]，本實驗進一步驗證了突擊量應用氯磷定治療AOPP的有效性及可行性。

肝臟是人體重要的代謝器官，是機體的重要防線，在解毒過程中起重要作用。AOPP患者普遍存在肝功能損害，嚴重者還可導致肝功衰竭，但臨床工作中往往被忽視。ALT主要存在于肝細胞漿內，細胞內濃度高于血清中 1 000～3 000倍。只要有 1%的肝細胞被破壞，就可以使血清酶增高一倍[5]。因此，ALT被世界衛生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。本研究通過對 ALT的測定，表明樂果中毒大鼠 ALT均有不同程度升高，提示中毒后肝細胞損害的存在，且其損害程度隨氯磷定用量增加而減少。因此恰當的復能劑治療不僅可緩解臨床癥狀，還可減輕肝損害的程度。ALT峰值在第 6天出現，考慮與樂果在體內半衰期長及毒物在胃內重吸收有關，因此有人主張中毒后反復洗胃 48h[6]，同時復能劑不能過早停用。這種肝損害的發生與肝細胞缺氧，細胞器的損傷(線粒體，溶酶體，粗面內質網，滑面內質網，胞膜)密切相關[7]。同時樂果可顯著誘導肝臟中的細胞色素氧化酶的活性[8]，對肝臟產生氧化脅迫，從而加重肝損害。

1 關里，王漢斌，趙得祿.肟類復能劑治療急性有機磷農藥中毒的研究現狀.中華內科雜志，2004，43:157-158.

2 田英平，蘇建玲，李星海，等.急性樂果中毒大鼠實驗治療研究.中國急救醫學雜志，2004，24:799-801.

3 葉任高主編.內科學.第 6版.北京:人民衛生出版社，2006.964.

4 趙德祿，關里們，王漢斌.國內外肟類能劑在救治有機磷農藥中毒中的應用.中華急診醫學雜志，2003，12:382-383.

5 高英梅，石桂英，郝玉杰，等.急性重癥有機磷農藥中毒 150例救治體會.河北醫藥，2009，31，2088.

6 陳成偉主編.藥物與中毒性肝病.第 1版.上海:上海科學技術出版社，2002.75-80.

7 宋會霞，劉曉燕.重癥有機磷農藥中毒 95例的搶救與護理.中國誤診學雜志，2010，10:387-388.

8 馬紅霞，程培英.樂果急性、亞急性暴露對大鼠膽堿酯酶及細胞色素氧化酶影響的研究.吉林農業大學學報，2006，28:678-681.