β-人絨毛膜促性腺激素在牙齦癌中的表達(dá)

陳勇 李浩渤 閆威 馬超

人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin，hCG)是由胎盤(pán)所分泌的糖蛋白激素。與靶細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，主要通過(guò)腺苷酸環(huán)化酶系統(tǒng)刺激甾體類(lèi)激素的生成，從而對(duì)性細(xì)胞成熟、受精卵著床及妊娠的維持等生理過(guò)程起重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)有研究表明，人絨毛膜促性腺激素α、β兩亞基在非生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中存在表達(dá)，且hCG亞基可能與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。α亞單位為hCG非特異的組分，難以作為腫瘤的標(biāo)記物，其主要與激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。β亞基主要和激素與受體的結(jié)合有關(guān)，且與惡性腫瘤自我生長(zhǎng)的調(diào)控功能、腫瘤的轉(zhuǎn)移特性和分化程度、以及與腫瘤微環(huán)境和免疫耐受的形成等都具有密切關(guān)系[1]。為探討牙齦癌中β-HCG亞基的表達(dá)，我們采用免疫組化方法檢測(cè) β-HCG亞基在牙齦癌變中的表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 試驗(yàn)組:收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院及滄州中心醫(yī)院 2000至 2005年牙齦癌蠟塊標(biāo)本 46例(所有患者在取標(biāo)本前未經(jīng)任何治療)，其中高分化 15例，中分化 14例，低分化 17例。每例標(biāo)本均進(jìn)行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師閱片后確診。其中男 25例，女 21例;年齡 40～75歲，平均年齡62.5歲。對(duì)照組:正常牙齦組織 22例，其中男 14例，女 8例;年齡 23～56歲，平均年齡 42.72歲。每例均進(jìn)行 HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師閱片后確診。

1.2 主要試劑與儀器 試劑:兔抗人 β-HCG濃縮液，使用濃度 1∶75，β-HCG及二抗 SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑，多聚賴(lài)氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑購(gòu)于河北博海生物工程有限公司。儀器:LEICA石蠟切片機(jī)，ZHPY-型恒溫式附貼切片展片儀(河北醫(yī)科大學(xué))，PGB/20-002臺(tái)式保溫培育箱，(中華人民共和國(guó)重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)，ZD-Ⅲb快速生物試驗(yàn)用微波爐(上海中達(dá)醫(yī)學(xué)醫(yī)用研究所)，Olympus PM-10ADS型雙目顯微鏡。

1.3 對(duì)照實(shí)驗(yàn) 用已知 β-HCG陽(yáng)性的絨癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照;以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組織化學(xué)SP法(過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素法)。所有標(biāo)本均經(jīng) 10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個(gè)蠟塊切為 4～5μm的切片，共切 3張，1張 HE染色，1張作為陰性對(duì)照，1張行β-HCG染色。

1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定 β-HCG陽(yáng)性結(jié)果判定:以細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，以組織中無(wú)明顯陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞為陰性。結(jié)果評(píng)定參照 Lorenzolomuzio標(biāo)準(zhǔn)，每個(gè)視野計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞，觀察陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù) 10個(gè)高倍視野中陽(yáng)性細(xì)胞的百分比，依此將陽(yáng)性表達(dá)又分為:弱陽(yáng)性(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＜10%;陽(yáng)性(++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為 10% ～50%;強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) ＞50%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，出現(xiàn)小值頻數(shù)時(shí)，采用 Fisher精確概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 在正常牙齦組織中，β-HCG未見(jiàn)表達(dá)(圖 1、2)。在牙齦癌組織中，β-HCG的陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞的胞漿內(nèi)，呈棕黃色顆粒染色(圖 3、4)。β-HCG在牙齦癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為 67.39%，在對(duì)照組的陽(yáng)性表達(dá)率為 0，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高，二者的陽(yáng)性表達(dá)率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜ 0.05)。見(jiàn)表 1。

2.2 β-HCG的陽(yáng)性表達(dá)與牙齦癌的分化程度相關(guān)，分化程度越低，β-HCG的表達(dá)越明顯(P＜ 0.05)。與患者的性別、年齡無(wú)明顯的相關(guān)性(P＞0.05)。見(jiàn)表 2、3。

圖 1，2 β-HCG在正常黏膜中的陰性表達(dá)

圖 3，4 β-HCG在牙齦癌中的陰性表達(dá)

表 1 β-HCG在正常黏膜和牙齦癌組織中的陰性表達(dá) 例

表 2 β-HCG的陽(yáng)性表達(dá)與牙齦癌分化程度的關(guān)系 例

表 3 β-HCG的陽(yáng)性表達(dá)與患者性別、年齡的關(guān)系 例

3 討論

β-HCG是一種糖蛋白激素。在妊娠期主要由胎盤(pán)合體滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌產(chǎn)生，在非妊娠情況下，機(jī)體內(nèi)含量極微。活性β-HCG在維持早孕女性的黃體功能以促使妊娠繼續(xù)進(jìn)行、胎兒性別的分化以及防止母體排斥妊娠產(chǎn)物等方面具有重要的生理功能。自報(bào)道滋養(yǎng)層癌細(xì)胞和非滋養(yǎng)層惡性腫瘤細(xì)胞可異位表達(dá) β-HCG以來(lái)，惡性腫瘤細(xì)胞表達(dá)的異位 β-HCG一直受到人們的關(guān)注。目前發(fā)現(xiàn)，β-HCG在非生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中存在表達(dá)，且對(duì)免疫系統(tǒng)及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移、分化程度等都有重要作用[2]。惡性腫瘤表達(dá)的異位 β-HCG和正常 β-HCG具有相似或相同的分子特征。正常β-HCG由α和β兩個(gè)不同的亞單位以非共價(jià)鍵連結(jié)成二聚體。研究表明，β亞基主要和激素與受體的結(jié)合有關(guān)，且與惡性腫瘤自我生長(zhǎng)的調(diào)控功能、腫瘤的轉(zhuǎn)移特性和分化程度、以及與腫瘤微環(huán)境和免疫耐受的形成等都具有密切關(guān)系。現(xiàn)已公認(rèn) β-HCG是一種腫瘤標(biāo)志物(tumormarker)。這些腫瘤主要有子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、肺癌、胃癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、黑色素瘤等[3]。本研究即通過(guò)檢測(cè) β-HCG在牙齦癌中的表達(dá)，探討了 β-HCG與牙齦癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，本研究結(jié)果顯示在牙齦癌組織中，β-HCG的陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞的胞漿內(nèi)，呈棕黃色顆粒染色。β-HCG的表達(dá)率為 67.39%。在正常牙齦組織中，β-HCG未見(jiàn)表達(dá)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的陽(yáng)性率明顯增高，二者的陽(yáng)性表達(dá)率之間有顯著性差異(P＜ 0.05)。該結(jié)果顯示牙齦癌細(xì)胞表達(dá) β-HCG，可作為牙齦癌的標(biāo)志物，但其機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

大量研究證實(shí) β-HCG在滋養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的惡性腫瘤侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中的作用與其在非滋養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的惡性腫瘤侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中的作用并不一致[1]。β-HCG對(duì)某些非滋養(yǎng)層細(xì)胞源性的惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用，而對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移則有抑制作用，其原因及作用機(jī)制尚不完全明確。在非滋養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的腫瘤中，近幾年國(guó)內(nèi)外學(xué)者已相繼發(fā)現(xiàn)β-HCG在膀胱、肺、胃、結(jié)腸、食管等腫瘤中表達(dá)，并與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。遺憾的是，本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有研究 β-HCG與牙齦癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，今后需進(jìn)一步探討。

有學(xué)者證實(shí)非滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤產(chǎn)生異位hHCG對(duì)腫瘤患者的治療和預(yù)后的判斷可能有益，提出非滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤細(xì)胞分泌異位 HCG是腫瘤細(xì)胞幼稚的表現(xiàn)，并發(fā)現(xiàn)分泌異位 HCG的大腸癌和乳腺癌的侵襲力強(qiáng)，惡性程度較高，且化療不甚敏感或緩解期短，腫瘤容易復(fù)發(fā)，因而預(yù)后較差[4]。本研究中顯示 β-HCG的表達(dá)與患者的性別、年齡以無(wú)明顯的相關(guān)性(P＞0.05)，而與牙齦癌的分化程度相關(guān)，分化程度越低惡性度越高，β-HCG的表達(dá)越明顯。因此，預(yù)測(cè) β-HCG可能是判斷牙齦癌預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。

總之，正常細(xì)胞的增殖分化在體內(nèi)生長(zhǎng)因子、激素及環(huán)境等多種信號(hào)的調(diào)控影響下是一個(gè)嚴(yán)格控制和高度穩(wěn)定的復(fù)雜過(guò)程。牙齦癌中由正常上皮轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞并生長(zhǎng)浸潤(rùn)的復(fù)雜過(guò)程，顯然不能用單一因素完全解釋。HCG及其亞基作為多種非生殖系統(tǒng)腫瘤的生物學(xué)標(biāo)記物，β-HCG與惡性腫瘤生長(zhǎng)的自我調(diào)控能力、腫瘤的形成發(fā)展以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和免疫耐受的形成都有一定的關(guān)系。本研究中，我們從惡性腫瘤異位產(chǎn)生 β-HCG的角度探討了牙齦癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，這有助于我們進(jìn)一步了解 β-HCG的生理功能及其與在人類(lèi)腫瘤發(fā)生中的機(jī)制，為我們?cè)O(shè)計(jì)新的藥物和有效的治療方法提供了新思路。但 β-HCG對(duì)牙齦癌發(fā)生的作用大小，所處的地位及與其它致癌因素的復(fù)雜關(guān)系等尚不完全清楚，還有待于進(jìn)一步研究。

1 何柯，徐建設(shè)，宋麗萍.惡性腫瘤異位人絨毛膜促性腺激素表達(dá)的研究.國(guó)外醫(yī)學(xué)婦幼保健分冊(cè)，2005，16:420-422.

2 人絨毛膜促性腺激素在非生殖系統(tǒng)腫瘤中的表達(dá)及其臨床病理意義.診斷病理學(xué)雜志，1998，5:231-232.

3 Acevedo HF，Krichevsky A，Campbell-Acevedo EA，et al.Flow cytometrymethod for the analysis ofmembrane-associated human chorionic gonadotropin，its subunits，and fragments on human cancer cells.Cancer，1992，69:1818.

4 汪萬(wàn)英，張世馥，姚敏，等.胃腸道癌產(chǎn)生異位 HCG的研究.蚌埠醫(yī)學(xué)院報(bào)，1994，19:166-167.