復方消經痛膠囊對痛經模型大鼠血清及子宮組織中 MDA、NO、SOD、GSH-PX的影響

李蘭芳 解麗君 李國風 郝娜 張勤增 盧樹杰 李星 李亞軍

復方消經痛膠囊對痛經模型大鼠血清及子宮組織中 MDA、NO、SOD、GSH-PX的影響

李蘭芳 解麗君 李國風 郝娜 張勤增 盧樹杰 李星 李亞軍

目的 探討復方消經痛膠囊對縮宮素所致大鼠痛經模型的保護作用。方法 SD大鼠 60只,隨機分為空白組、模型組、復方消經痛膠囊高、中、低(2.0、1.0、0.5 g/kg)和陽性藥對照組(田七痛經膠囊,2.0 g/kg)。除正常對照組外,其余各組大鼠連續皮下注射己烯雌酚 10 d,從注射己烯雌酚的第 4天開始,各組灌胃給藥,模型組灌胃等體積的蒸餾水,連續 7 d。末次給藥 40min,每只大鼠腹腔注射縮宮素0.2 U,1h后,麻醉大鼠,取血 3ml,分離血清,迅速剝取子宮制備勻漿,分別測定血清和子宮勻漿中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)與谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活性。結果

復方消經痛膠囊能明顯提高血清和子宮組織勻漿中 SOD、GSH-PX的活性,降低MDA含量;并能提高血清和子宮勻漿中 NO的含量。結論 復方消經痛膠囊通過增加大鼠血清和子宮組織中 SOD、GSH-PX的活性;提高NO含量,降低MDA含量,調節體內生物信息失衡,進而緩解痛經,對大鼠原發性痛經有保護作用。

復方消經痛膠囊;催產素;NO;SOD;MDA;GSH-PX;大鼠;痛經

復方消經痛膠囊由黃芪、白芍、人參、熟地、川芎等中藥組成。主要用于治療原發性和部分原因引起的繼發性痛經。前期研究表明,該膠囊對催產素誘發的大鼠和小鼠痛經模型具有很好的鎮痛作用[1];可明顯抑制大鼠正常離體子宮的收縮頻率、幅度、活動力;能降低由于縮宮素引起的大鼠離體子宮收縮增強作用;能降低在體家兔子宮的收縮頻率、幅度、活動力;同時能對抗縮宮素引起的家兔在體子宮收縮增強作用[2]。為了探討了該藥治療原發性痛經的作用機制,進行了如下實驗研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雌性 SD大鼠 60只,體重 150～180g,由河北醫科大學動物中心提供,許可證號：SCXK(冀)2003-1-003,合格證編號：706017。

1.2 藥品 復方消經痛膠囊,由河北省醫學科學院藥物研究室研制(批號：200207102)。內容物為棕黑色粉末,每克相當于原生藥 5.74 g。田七痛經膠囊,廣州敬修堂(藥業)股份有限公司生產(批號：01220619)。縮宮素針劑,上海子能制藥有限公司生產(批號：010708)。己烯雌酚,天津金耀氨基酸有限公司生產。

1.3 試劑 一氧化氮試劑盒(批號：20070203),由南京建成生物工程研究所提供。谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒(批號：20070612);考馬亮斯蘭蛋白測定試劑盒(批號：20070613);SOD試劑盒(批號：20070321);MDA試劑盒(批號：20070611),均由南京建成生物工程研究所第一分所提供。

1.4 儀器 722分光光度計,上海第二分析儀器廠生產;METTLER AE240型電子天平,梅特勒儀器上海有限公司;TDL-5-A型臺式離心機,上海安亭科學儀器廠;CS-6R型低溫離心機,美國貝克曼公司;電動勻漿器,Silont crusher M,德國Heidelph公司。

1.5 實驗方法 將體重 150～180 g雌性 SD大鼠 60只隨機分為 6組,即對照組、模型組、田七痛經膠囊組(2.0g/kg)、復方消經痛膠囊高、中、低劑量組(2.0 g/kg、1.0 g/kg、0.5g/kg),每組10只。除對照組外,其余各組大鼠連續皮下注射己烯雌酚10天(第 1天、第 10天 2天皮下給予 0.8mg/只,第 2天到第 9天給予 0.4mg/只)。在注射己烯雌酚的第 4天開始給藥,各組均灌胃給藥,1次/d,連續 7 d。模型組和對照組給于等體積的蒸餾水。實驗過程中,所有大鼠自由飲水攝食,實驗開始和結束各稱量體重 1次。最后 1次灌胃 40min后,每只大鼠腹腔注射縮宮素 0.2U,1 h后,大鼠腹腔注射20%烏拉坦(3.0ml/kg)麻醉后,腹主動脈取血 3m l,制備血清,測定血清中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量;超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶的活性。迅速剝離子宮,用電子天平精密稱取0.5 g左右,加 0.9%氯化鈉溶液制備成 10%子宮組織勻漿,離心后按試劑盒說明書要求分別測定NO和 MDA含量以及SOD和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的活性。

2 結果

2.1 對大鼠血清及子宮組織中SOD活性的影響 與對照組比較,模型組血清和子宮組織勻漿中的 SOD活性降低(P＜0.01),與模型組比較,復方消經痛膠囊高、中、低劑量組均使血清中 SOD的活性顯著升高(P＜0.05),同時使子宮勻漿中SOD的活性明顯升高(P＜0.05),田七痛經膠囊能使血清中SOD的活性明顯升高(P＜0.05),也能升高子宮勻漿中 SOD的活性,但差異無統計學意義(P＞0.05)。見表 1。

表1 對大鼠血清及子宮勻漿中 SOD活性的影響n=10,±s

表1 對大鼠血清及子宮勻漿中 SOD活性的影響n=10,±s

注：與模型組比較,＊P＜0.05;與對照組比較,#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血清SOD(U/ml)子宮勻漿 SOD(U/mgprot)對照組 - 100±59 74±19模型組 - 157±65# 44±24#田七痛經膠囊組 2.0 111±64＊ 62±30高劑量組 0.5 128±56＊ 73±29＊中劑量組 1.0 124±54＊ 72±24＊低級量組 2.0 133±70＊ 73±30＊

2.2 對大鼠血清及子宮組織中 GSH-PX酶活性的影響 與對照組比較,模型組血清和子宮組織中 GSH-PX酶活性降低(P＜0.05或 ＜0.01),與模型組比較,復方消經痛膠囊高、中、低劑量均使大鼠血清中 GSH-PX酶活性顯著升高(P＜0.05),同時使子宮組織中GSH-PX酶活性顯著升高(P＜0.01或＜0.05)。田七痛經膠囊亦能使大鼠血清和子宮勻漿中 GSH-PX酶活性顯著升高(P＜0.05或 ＜0.01)。見表 2。

表2 對大鼠血清及子宮勻漿中 GSH-PX活性的影響n=10,±s

表2 對大鼠血清及子宮勻漿中 GSH-PX活性的影響n=10,±s

注：與對照組比較,＊P＜0.01,#P＜0.05;與模型組比較,△P＜0.05,☆P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血清GSH-PX(酶活力單位)子宮勻漿 GSH-PX(酶活力單位)對照組 - 874±164 70±16模型組 - 364±120# 55±18＊田七痛經膠囊組 2.0 794±221△ 103±42☆高劑量組 0.5 716±302△ 81±21☆中劑量組 1.0 582±110△ 73±10△低級量組 2.0 597±144△ 65±14△

2.3 對痛經大鼠血清及子宮組織中 MDA含量的影響 與正常組比較,模型組血清和子宮組織中MDA含量顯著增高(P＜0.05或 ＜0.01),與模型組比較,復方消經痛膠囊高、中、低劑量均使大鼠血清 MDA的含量顯著降低(P＜0.05),同時使子宮組織中 MDA的含量顯著降低(P＜0.05或 ＜0.01)。田七痛經膠囊亦能使大鼠血清和子宮勻漿中 MDA的含量顯著升高(P＜0.05或 ＜0.01)。見表 3。

表3 對大鼠血清及子宮勻漿中 MDA含量的影響n=10,±s

表3 對大鼠血清及子宮勻漿中 MDA含量的影響n=10,±s

注：與對照組比較,＊P＜0.01;與模型組比較,#P＜0.05,△P＜0.01

組別 劑量(/g/kg)血清MDA(nmol/m l)子宮勻漿MDA(nmol/mgprot)對照組 - 3.8±1.6 9.6±5.4模型組 - 7.8±1.0＊ 18.5±10.6＊田七痛經膠囊組 2.0 5.9±1.5△ 10.6±2.8#高劑量組 2.0 5.9±2.0△ 7.9±2.1#中劑量組 1.0 5.8±1.3△ 7.7±1.4#低劑量組 0.5 5.6±1.7△ 9.7±5.0#

2.4 對痛經大鼠血清及子宮組織中 NO含量的影響 與對照組比較,模型組血清和子宮組織中 NO含量顯著降低(P＜0.05),與模型組比較,復方消經痛膠囊高、中、低劑量組血清中NO的含量顯著升高(P＜0.01),高、中劑量組子宮組織中NO的含量明顯升高。田七痛經膠囊亦能使大鼠子宮勻漿中NO含量顯著升高(P＜0.05)。見表 4。

表4 對大鼠血清及子宮勻漿中 NO含量的影響n=10,±s

表4 對大鼠血清及子宮勻漿中 NO含量的影響n=10,±s

注：與對照組比較,＊P＜0.05;與模型組比較,#P＜0.05,△P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血清NO(μmol/L)子宮勻漿 NO(μmol/gprot)對照組 - 53±20 5.0±3.1模型組 - 33±12＊ 2.5±2.5#田七痛經膠囊組 2.0 53±10 3.2±1.2#高劑量組 2.0 132±28△ 5.0±1.2△中劑量組 1.0 76±23△ 5.0±3.8#低劑量組 0.5 62±14△ 3.2±2.8

3 討論

在本實驗中觀察到,由縮宮素造成的痛經模型大鼠血清和子宮勻漿中抗氧化酶的活性下降,MDA的含量升高。同時血清和子宮勻漿中 NO的含量均下降。對于這種影響的解釋已有眾多的報道[3-5]。月經期間,子宮平滑肌陣發性的收縮導致肌間血管受壓而出現子宮肌層及內膜的暫時缺血,從而形成較多的活性氧(OFR)。正常情況下,細胞內有自由基清除劑,使氧自由基轉化為過氧化氫,后者通過GSH-PX酶的作用還原為水分子。痛經時各種抗氧化酶活性相應降低,由此激起自由基的連鎖、增生反應,形成一系列的脂質自由基及其降解產物,從而進一步引起細胞膜的流動性降低,通透性增高,線粒體腫脹,溶酶體破壞及溶酶體酶的釋放,更進一步加重了子宮內膜的損傷,使痛經發生并加劇。本實驗結果表明復方消經痛膠囊可以明顯增強血清中 SOD和GSH-PX酶活性,減少自由基及其降解產物—MDA的含量,消除了機體內的過氧化氫及脂質過氧化物,阻斷活性氧自由基對機體的進一步損傷,調節子宮內膜缺血時細胞內的氧化應激狀態,保護生物膜,包括細胞膜、細胞器膜上多烯脂肪酸、細胞骨架及其他蛋白質免受自由基攻擊。從而達到治療或緩解痛經的作用。

NO是一種具有多種生物功能的氣體分子,參與痛經的發生過程[6]。NO可通過作用于子宮中左旋精氨酸-NO-環磷鳥苷(CGMP)系統,調節子宮收縮性。NO參與外周及中樞水平的痛覺調制[7],在外周作用于不同的靶細胞,通過NO-CGMP途徑表現為致痛和鎮痛雙重作用,這種雙重作用決定于局部NO的生成量,NO生成減少時可促進傷害性信息傳遞產生疼痛,生成量增多時,則起抑制作用而鎮痛。本研究結果表明,痛經模型大鼠子宮勻漿和外周血液中 NO含量降低,提示痛經模型大鼠內源性 NO合成和釋放減少,使 NO介導的生物信息傳遞異常,血管活性物質調節失調,導致內皮功能失常,引起疼痛[7]。復方消經痛膠囊使大鼠血液和子宮組織中 NO含量升高,調節了內皮細胞功能,同時擴張子宮血管平滑肌,擴張血管、改善微循環的作用,有助于恢復缺血組織的血液供應,減輕疼痛癥狀。這可能是復方消經痛膠囊治療痛經的機制之一。

1 李國風,李蘭芳,郝娜,等.復方消經痛膠囊鎮痛抗炎作用研究.時針國醫國藥,2007,18：13-14.

2 李蘭芳,張建新,郝娜,等.復方消經痛膠囊對動物子宮活動的影響.中國中藥雜志,2007,32：843-846.

3 裴培田,姚凝.舒經玫瑰膠囊對小鼠原發性痛經血清中谷胱甘肽過氧化物酶及一氧化氮的影響.中國藥物與臨床,2005,5：24-25.

4 徐小娟,金沈銳.不同比例芍藥甘草湯對痛經大鼠子宮組織內皮素和一氧化氮的影響.中國中醫藥信息雜志,2004,11：973-974.

5 裴培田,王昕,趙一梅,等.舒經玫瑰膠囊對小鼠原發性痛經 MDA、Ca2+的影響.中國中醫藥信息雜志,2003,10：31-32

6 彭芝配,騰久祥,黨海珍,等.九氣拈痛膠囊對催產素所致痛經大鼠鎮痛作用機制的研究.湖南中醫學院學報,2005,25：7-10

7 田令華,王曉民,韓濟生.一氧化氮與痛覺調制.生理科學進展,1996,27：161-164.

Effects of compound Xiaojingtong capsuleon M DA,NO,SOD,GSH-PX in b lood serum and uterus tissue of rats with dysmenorrhea induced by oxytocin

LILanfang,XIE Lijun,LIGuofeng,etal.Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China

Ob jective To investigate the protective effectof com pound Xiaojingtong capsule(CXJTC)on oxytocin-induced dysmenorrhea in rats.M ethods Sixty rats were random ly divided into control group,dysmenorrhea model group,high-dose(2.0g/kg),m idd le-dose(1.0g/kg)and low-dose(0.5g/kg)CXJTC groups,and Tianqi Tongjing capsule(TQTJC)group(2.0g/kg).Diethylstilbestrol was continuously administrated by subcutaneous injection,once a day for 10 days in rats ofallgroups except for the rats in control group.CXJTCwas adm inistrated by intragastric mode for 7 days in rats of all CXJTC groups and distillated water was instead for the rats inmodel group.The administration of oxytocin(0.2U)was carried on in every rat at 40 m in after lastadministration.The ratswere anesthetized atonehourafter administration of oxytocin.The blood was taken and the uterus was dissected and homogenated formeasurement of concentration of NO and MDA,and the activities of SOD and GSH-PX in serum and homogenate of uterus were detected.Results As compared with those inmodel group,the activities of SOD and GSH-PX were obviously increased,and the concentration of NO was increased too,however,the concentration of MDAwas decreased in serum and homogenate of uterus in CXJTC group.Conclusion CXJTC has a protective effecton rats with dysmenorrhea induced by oxytocin,and the effects may be caused by increasing the concentration of NO,and the activities of SOD and GSH-PX,and by decreasing the concentration ofMDA.

compound Xiaojingtong capsule;oxytocin;NO;SOD;MDA;GSH-PX;rats;dysmenorrhea

R 984

A

1002-7386(2010)05-0530-03

項目來源：河北省科學技術研究與發展攻關計劃項目(編號：04276101D-50)

050021 石家莊市,河北省醫學科學院(李蘭芳、解麗君、李國風、郝娜、張勤增);河北省中藥注射劑工程技術研究中心(盧樹杰);河北醫科大學藥學院實習生(李星、李亞軍)

2010-01-13)