子癇前期患者胎盤組織中 PDGF-A的表達及意義

高學印 薛瑞敏 鄭秀玲 郭影 吉增良

妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorder comp licating pregnancy,HDCP)是妊娠期一種嚴重的并發癥,國內發病率約為7%～12%[1]。HDCP是圍產期母嬰死亡的重要原因之一。有研究認為：子宮螺旋動脈的重鑄不良導致胎盤缺血,釋放某些因子入血引起母體廣泛的內皮細胞損傷和功能紊亂是 HDCP發病的、中心環節[2]。血小板源性生長因子-A(platelet-derived growth factor,PDGF-A)是一種結締組織源性細胞的重要促有絲分裂劑,具有強烈的血管收縮作用,能進一步誘導血小板聚集、激活,繼而巨噬細胞移行并活化,導致妊娠患者的胎盤蛻膜螺旋動脈發生急性粥樣硬化。HDCP患者體內釋放過多的白介素-6(B cell differentiation factor-6,IL-6),刺激 PDGF-A產生,使動脈壁對低密度脂蛋白(low density lipop rotein,LDL)反應性增高及血管收縮,從而引起血管損傷及血壓升高。LDL對增殖活躍期的血管內皮細胞毒性作用很強,促進其老化,導致細胞功能失調[3]。本研究通過HE染色觀察胎盤組織學特征并檢測正常晚孕女性與妊娠期高血壓疾病患者胎盤PDGF-A的變化,旨在探討 PDGF-A與妊娠期高血壓疾病發生、發展的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇 2006年 3月至 2007年 10月在河北醫科大學第三醫院婦產科剖宮產分娩的產婦 59例,其中正常妊娠組 20例,年齡 22～30歲,平均年齡 26歲;孕周 36～41周,平均38周;為同期住院的無妊娠合并癥及并發癥的正常孕婦,均因胎位、產道異常或社會因素等行剖宮產分娩。輕度子癇前期組21例年齡 22～33歲,平均年齡 28歲;孕周 35～41周,平均 37周;重度子癇前期組 18例,年齡 22～35歲,平均年齡 29歲;孕周 37～40周,平均 37周;無產科其它并發癥及妊娠合并癥,無高血壓及妊娠期高血壓疾病家族史。按參考文獻[4]診斷及分類。3組孕婦年齡、孕周差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 試劑：兔抗 PDHF-A多克隆抗體、DAB顯色劑等均購自北京奧博森生物技術有限公司。

1.2.2 胎盤標本采集與制備：3組孕婦在剖宮產術中胎盤娩出后,從胎盤母體面中央(避開明顯纖維化、鈣化區)切取胎盤組織 1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm,充分漂洗,置 10%甲醛溶液中固定 24 h以上,石蠟包埋,連續切片,厚度 2μm,HE染色觀察胎盤組織學特征,再進行免疫組化染色。PDGF-A工作濃度均為1∶400。

1.2.3 免疫組化判定標準：以細胞胞漿有棕褐色顆粒沉著為陽性細胞,計數每個視野所含細胞數,計數其中陽性細胞數及著色強度。根據陽性細胞所占比例及著色強度綜合制定免疫組化半定量記分標準：①陽性細胞記分：無陽性細胞為 0分;＜25%為 1分;25%～50%為 2分;＞50%為 3分。②著色強度記分：細胞內無染色或染色與背景一致為 0分;細胞漿內可見少量淡黃色顆粒,明顯高于背景為 1分;細胞漿內可見較多深棕色顆粒為 2分;細胞漿內可見大量深棕色或褐色顆粒為 3分。兩個分值相加為最終判定結果：0～2分(-),3～4分(+),5～6分(++)。

1.3 統計學分析 應用 SPSS 12.0統計軟件,計量資料以±s表示,采用單因素方差分析,等級資料采用秩和檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HE染色觀察胎盤組織學特征 正常孕足月胎盤絨毛和輕度子癇前期胎盤絨毛中滋養細胞以合體滋養細胞為主,細胞滋養細胞比較少見,胎盤蛻膜纖維化不明顯(圖 1、2),而重度子癇前期胎盤絨毛中,細胞滋養細胞明顯增生,滋養細胞下基底膜增厚,絨毛間質纖維蛋白沉積,合體細胞結節增多,合體細胞出芽,發生纖維素樣壞死的絨毛增多,絨毛血管增多,絨毛大部分不成熟,胎盤蛻膜間質細胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內皮細胞纖維化,蛻膜纖維素性壞死也明顯增多(圖 3)。2.2 胎盤組織中 PDGF-A的定位及表達 PDGF-A表達主要定位于細胞漿,陽性細胞著色呈棕色、褐色,主要分布于胎盤細胞滋養細胞,在蛻膜間質細胞和血管內皮細胞也有少量表達。正常妊娠組 PDGF-A表達為弱陽性(圖 4、5);輕度子癇前期組PDGF-A表達為陽性(圖 6、7);重度子癇前期組 PDGF-A表達為強陽性(圖 8、9)。正常妊娠組PDGF-A表達水平低于輕度子癇前期組,但差異無統計學意義(P＞0.05);輕度子癇前期組和重度子癇前期組中 PDGF-A表達水平比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表 1。本研究發現,HDCP患者胎盤蛻膜間質細胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內皮細胞纖維化,且在該處組織中 PDGF-A呈陽性表達。

表 1 3組 PDGF-A不同程度陽性表達情況比較 例

3 討論

HDCP是妊娠期特有的疾病,妊娠終止后多數病理變化可以逆轉,說明胎盤這一器官可能在 HDCP發病中起到重要的作用。近年來研究表明,重度子癇前期患者在胎盤形成過程中存在著螺旋小動脈血管重鑄異常的現象,其滋養細胞侵蝕能力下降,侵蝕范圍縮小,浸潤僅達蛻膜段,子宮螺旋動脈未經歷正常妊娠時的變化卻保持著相對狹窄的管徑和對縮血管物質的反應,從而造成胎盤缺血[5]。本研究顯示：重度子癇前期胎盤絨毛中,細胞滋養細胞明顯增生,滋養細胞下基底膜增厚,絨毛間質纖維蛋白沉積,合體細胞結節增多,合體細胞出芽,發生纖維素樣壞死的絨毛增多,絨毛血管增多,絨毛大部分不成熟,胎盤蛻膜間質細胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內皮細胞纖維化,蛻膜纖維素性壞死也明顯增多。與胎盤缺血血氧所致的一系列病理變化相一致。

研究表明,胎盤的胎兒面血管內皮層及滋養層均有 PDGF及其受體表達,且在重度子癇前期患者組織的閉塞性動脈炎處陽性細胞染色更深[6]。HDCP患者血循環中 TNF-α、血栓素等升高,刺激內皮細胞、單核細胞、巨噬細胞、血小板,使之活化,血小板 α-顆粒中的PDGF-A釋放增多,從而使胎盤病變血管局部,產生PDGF-A等血管活性物質增多[7]。胎盤淺著床,局部缺血缺氧,缺氧激活原癌基因 sis促進PDGF-A過量表達,致使螺旋動脈在多種生長因子共同作用下呈現粥樣硬化改變[6]。本研究表明,重度子癇前期胎盤細胞滋養細胞、蛻膜間質細胞和血管內皮細胞表達 PDGF-A的強度明顯高于對照組,并且隨著 HDCP的病情加重,PDGF-A表達增高,提示胎盤中 PDGF-A表達增高,可能阻礙了 HDCP胎盤母體面螺旋動脈血管重塑,導致病變血管強烈收縮,局部缺血缺氧,細胞毒性因子釋放增多,形成惡性循環。

圖1 正常妊娠組胎盤絨毛滋養細胞(HE×400)

圖 2 輕度子癇前期組絨毛滋養細胞(HE×400)

圖 3 重度子癇前期組絨毛滋養細胞(HE×400)

圖 4 正常妊娠組胎盤絨毛PDGF-A的弱陽性表達(×400)

圖9 重度子癇前期組胎盤蛻膜滋養細胞PDGF-A的強陽性表達(×400)

圖5正常妊娠組胎盤蛻膜PDGF-A的弱陽性表達(×400)

圖 6輕度子癇前期組胎盤絨毛滋養細胞 PDGFA的陽性表達(×400)

圖 7輕度子癇前期組胎盤蛻膜滋養細胞 PDGF-A的陽性表達(×400)

圖 8重度子癇前期組胎盤絨毛滋養細胞 PDGF-A的強陽性表達(×400)

PDGF-A對蛻膜間質細胞、成纖維細胞具有強大趨化作用。Kimatrai等[8]研究發現,蛻膜的主要成分蛻膜間質細胞在結構及功能上都與具有收縮活性的成纖維細胞相似,PDGF-A不但能誘導成纖維細胞收縮也能誘導蛻膜間質細胞收縮。本研究發現,重度子癇前期胎盤絨毛中,細胞滋養細胞明顯增生,滋養細胞下基底膜增厚,絨毛間質纖維蛋白沉積,合體細胞結節增多,胎盤蛻膜間質細胞呈大小不等塊狀、桿狀,蛻膜血管內皮細胞纖維化,且在該處組織中 PDGF-A呈陽性表達,提示胎盤有不規則的纖維化,表明HDCP患者胎盤蛻膜PDGF-A表達的增高加速了蛻膜纖維化,促進蛻膜間質細胞收縮,從另一個方面加重了胎盤缺血缺氧。Mendoza等[9]研究表明,PDGF-A功能的表達具有劑量依賴性,低劑量能促進血管新生,高劑量促使毛細血管豐富的組織纖維化。胎盤是毛細血管豐富的組織,對PDGF-1的表達敏感。本研究結果顯示正常晚孕組 PDGF-A表達水平低于輕度子癇前期組,但兩者比較無顯著差異,重度子癇前期組和輕度子癇前期組中 PDGF-A表達水平比較明顯升高,提示隨著PDGF-A水平升高,胎盤纖維化逐漸加重。

綜上所述,PDGF-A在 HDCP的發生發展中的影響是多方面的,隨著研究的不斷深入,將對其作用機制有進一步的了解,為臨床防治 HDCP提供更多的理論依據。

1 李淑賢.MP妊娠高血壓綜合征監測系統對妊娠期高血壓綜合征的預測價值.河北醫藥,2009,31：1138.

2 Robers JM,Lina KY.Recent insights into the pathogenesis of preeclampsin.Placenta,2002,23：359-372.

3 Floege J,Eitner F,Alpers CE.A new look at platelet-derived growth factor in renal disease.JAm Soc Nephrol,2008,19：12-23.

4 樂杰主編.婦產科學.第 6版.北京：人民衛生出版社,2004.97-106.

5 劉棣臨.全國妊高征及其并發癥的診斷及處理學術研討會紀要.中華婦產科雜志,1993,28：262-267.

6 Gurski Gurski MR,Gonzalez E,Brown EG,et al.Immunochem ical localization of platelet-derived growth factor in placenta and its possible role in pre-ec lampsia.J Investig Med,1999,47：128-133.

7 Parker SB,Dobrian AD,Wade SS,et al.AT(1)receptor inhibition does not reduce arterial wall hypertrophy or PDGF-A expression in renal hypertension.Am JPhysiol Heart Circ Physiol,2000,278：613-622.

8 Kimatrai M,Oliver C,Abadia-Molina AC,et al.Contractile activity of human decidual stromal cells.J Clin Endocrinol Metab,2003,88：844-849.

9 Mendoza AE,Young R,Orkin SH.Increased platelet-derived growth factor A-chain expression in human uterine smooth muscle cells during the physiologic hypertrophy of pregnancy.Proc Natl Acad Sci USA,1990,87：2177-2181.