絨毛膜促性腺激素對大鼠睪丸間質(zhì)祖細胞移植的影響

邵莉進 張紅娟 陳新磊 米梅艷

睪丸間質(zhì)祖細胞(PLC)是一種較幼稚的細胞，類似于睪丸間質(zhì)中未分化的間質(zhì)干細胞，能增殖分化為成熟的睪丸間質(zhì)細胞。而Leydig細胞的主要功能是合成和分泌睪酮并受黃體生成素(LH)調(diào)控。在體內(nèi)，睪丸受下丘腦-垂體-睪丸軸的調(diào)節(jié)，

LH直接作用于Leydig細胞刺激睪酮的合成。有研究認為，發(fā)育的睪丸間質(zhì)細胞中需要LH引發(fā)類固醇合成反應，在研究大鼠睪丸內(nèi)黃體生成素受體(LHR)表達和功能再現(xiàn)的分子機制中發(fā)現(xiàn):在未發(fā)育成熟的睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)，LHR的出現(xiàn)以及低水平表達不依賴LH;但是，睪丸間質(zhì)細胞后續(xù)的成熟過程，包括類固醇合成的起始和LHR表達的增加是依賴LH的［1］。研究顯示，絨毛膜促性腺激素(HCG)與LH有相同的受體，可替代體內(nèi)LH的作用刺激Leydig細胞合成睪酮［2］。本研究制作去勢大鼠模型，進行PLC移植，觀察HCG對移植后睪酮分泌濃度的影響，探討PLC生長分化機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 經(jīng)分離、鑒定的17～18 d齡SD雄性乳大鼠PLC;健康成年SD雄性大鼠20只，體重250 g，均屬于河北醫(yī)科大學實驗動物中心。

1.2 主要試劑及材料 RPMI-1640培養(yǎng)基，胎牛血清，二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱，HCG，瑞士SerozymeⅠ型內(nèi)分泌定量測定儀。

1.3 方法 20只SD雄性大鼠，手術切除雙側(cè)睪丸及附睪(去勢)。去勢3周后，用1 ml注射器向大鼠腎包膜下各個方向依次均勻注射預先抽取好的移植細胞懸液0.1 ml［(4～5)×107個細胞］，移植細胞為本實驗室預先培養(yǎng)5 d的PLC，活性達98%，經(jīng)鑒定純度達90%左右。

1.4 HCG激發(fā)試驗 將移植后的大鼠隨機分為實驗組和對照組，每組10只。實驗組每隔2周肌內(nèi)注射HCG 20 U，對照組則肌注相同體積的0.9%氯化鈉溶液。分別于去勢前、去勢后、移植后2、4、8周從鼠尾取血，離心收集血清，通過磁酶免方法測定睪酮含量。

1.5 統(tǒng)計學分析應用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，計量資料以±s表示，組內(nèi)比較采用方差分析，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2組在移植后睪酮分泌量均較去勢后3周明顯增高(P＜0.01)，但較去勢前比較睪酮值明顯降低(P＜0.01)。經(jīng)HCG刺激后實驗組睪酮濃度與對照組相比無明顯增高(P＞0.05)。見表1。

表1 去勢SD大鼠進行PLC移植后對hCG刺激分泌睪酮情況n=10，ng/ml，±s

表1 去勢SD大鼠進行PLC移植后對hCG刺激分泌睪酮情況n=10，ng/ml，±s

注:與對照組比較，*P＞0.05;與去勢后3周比較，#P＜0.01

組別 去勢前 去勢后3周 移植后2周 4周 8周對照組 3.5±0.5 0.10±0.0 0.48±0.08# 1.30±0.21# 2.30±0.38#實驗組 3.5±0.5 0.10±0.0 0.51±0.03*# 1.31±0.25*# 2.18±0.56*#

3 討論

睪丸間質(zhì)細胞的主要功能是分泌睪酮，其分泌活動受丘腦下部、垂體以及自身的調(diào)節(jié)。下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素作用于腦垂體前葉，該部位以脈沖形式分泌具有高生物活性的LH。LH可刺激睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)睪酮的合成。另有研究認為，發(fā)育的睪丸間質(zhì)細胞中需要LH引發(fā)類固醇合成反應，在研究大鼠睪丸內(nèi)LHR表達和功能再現(xiàn)的分子機制中發(fā)現(xiàn):在未發(fā)育成熟的睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)，LHR的出現(xiàn)以及低水平表達不依賴LH;但是，睪丸間質(zhì)細胞后續(xù)的成熟過程，包括類固醇合成的起始和LHR表達的增加是依賴LH的［1］。在去勢大鼠體內(nèi)雄激素水平很低甚至測不到，由雄激素引起的下丘腦-垂體軸的抑制作用降低，大鼠體內(nèi)LH水平較高，有利于移植PLC的增殖分化及促進LHR表達增高。而本實驗結(jié)果證明在不用任何外源性促性腺激素條件下，移植的PLC可以存活，且逐漸生長分化成熟，具有一定分泌睪酮的能力，可以在一定程度彌補生殖功能不足。

HCG是胎盤滋養(yǎng)層細胞分泌的一種促性腺激素，HCG與LH有相同的受體，可替代體內(nèi)LH的作用刺激Leydig細胞合成睪酮［2］。本實驗中應用HCG刺激移植大鼠后睪酮分泌量無明顯增高(P＞0.05)。考慮可能與重復多次應用hCG刺激有關。有研究認為，LH或HCG對LH/HCG受體的調(diào)節(jié)是雙向的，生理水平的LH或HCG能維持或升調(diào)節(jié)其自身受體水平;但超生理水平、特別是長期的作用，導致受體降調(diào)節(jié)，同時影響受體后信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)。同時調(diào)節(jié)也是多元的:同源性調(diào)節(jié)和非同源性調(diào)節(jié)。前者是指循環(huán)中LH或hCG水平影響其自身受體水平;后者是指其他的內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌因子發(fā)揮對受體的調(diào)節(jié)作用。該調(diào)節(jié)作用可以是刺激作用，也可能是抑制作用，可以直接影響細胞表面受體數(shù)量和受體基因表達和或影響受體后信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)［3］。故而影響睪丸間質(zhì)細胞合成和分泌睪酮。其具體機制有待于進一步研究。

1 Tena-Sempere M，Rannikko A，Kero J，etal.Molecularmechanismsof reappearance of luteinizing hormone receptor expression and function in rat testis after selective leydig cell destruction by ethylene dimethane sulfonate.Endocrin-ology，1997，138:3340-3348.

2 王鮮忠，潘紅梅，吳建云，等.FSH對體外培養(yǎng)間質(zhì)細胞睪酮生物合成的影響.中國農(nóng)學通報，2005，21:13.

3 張才田，戴曉華編譯.黃體生成激素/人絨毛膜促性腺激素受體研究進展.國外醫(yī)學計劃生育生殖健康分冊，2007，26:169.