用微波技術處理腎穿組織的新方法

王宏艷，王玉國，孫紅年，張淑東

（1.黑龍江省大慶油田總醫院病理科，黑龍江大慶 163000；2.黑龍江省大慶市東海醫院急診科，黑龍江大慶 163000）

腎活檢組織病理檢查在腎活檢病理診斷中具有重要價值。使用多種病理學檢查方法，如光學顯微鏡、免疫熒光檢查和電子顯微鏡下的超微結構檢查等，對病理切片制作質量要求很高。根據腎臟生理特殊的形態、結構，在常規病理技術的基礎上，吸收、保留、創新形成一套獨特的適應腎活檢病理診斷需要的技術，一般皮腎穿刺的腎臟組織標本體積很小，通過特殊染色可以顯現標本中特殊的物質，如基底膜、免疫復合物等，除了常規HE染色外，還需要多種特殊染色方法，PSA法、Masson法和過碘酸六胺銀 （periodic acid-silver methenamine，PASM）染色。大部分醫院處理腎穿組織的方法常常是將腎穿組織與常規標本放在一起，在同一臺脫水機中進行處理，病理活檢報告至少需要3 d。因此，常規的特殊染色制作比較費時，尤其是，控制不好往往失敗。我們將微波輻射技術應用于腎活檢組織的過程中，快速優質的處理只需要1 h，則可以得出病理診斷結果。臨床實踐證明，其具有快速省時，染色效果好，不易脫片等優點，現介紹如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院每天的腎穿標本。使用天津產的MS2586DTS型微波爐。4%中性福爾馬林、90%乙醇伊紅、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、2%松香石蠟。

1.2 方法

1.2.1 固定

常規方法是將送檢的腎活檢標本浸入4%中性福爾馬林溶液中固定8～10 h，用時較長。該技術是將取材后的腎穿標本放入15 ml的小玻璃標本瓶內，向標本瓶內注入10 ml 4%中性福爾馬林后放入微波爐中，同時放入一燒杯水，大約100 ml，有利于調節爐內溫度。使用中檔火力，輸出功率為60 W，恒溫75℃，3～5 min，組織由紅變白后即為固定完成。因為腎組織標本體積小，易黏附于容器壁而影響固定效果，所以置入固定液后，應適當搖晃使標本充分浸泡于固定液中。

1.2.2 脫水

腎組織固定后用乙醇作為脫水劑，為了避免脫水過程中引起組織的強烈收縮和變形，應采用由低向高梯度漸進式乙醇濃度配合微波脫水。具體如下：

1.2.2.1 標本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入90%乙醇伊紅煤染，放入微波爐中，同樣功率加熱3 min。

1.2.2.2 標本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入95%乙醇，放在微波爐中，同樣功率加熱3 min，并重復操作1次。

1.2.2.3 標本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入無水乙醇，放在微波爐中，同樣功率加熱3 min，重復操作2次。

1.2.3 透明

透明劑選用二甲苯。取出標本瓶后，倒出瓶中液體，向標本瓶中注入二甲苯進行透明，放在微波爐中用中高檔火力，輸出功率為80%，恒溫90℃，加熱3 min。此過程時間不宜過長，否則容易使組織收縮變脆。

1.2.4 浸蠟

浸蠟是組織處理中較為重要的一步，注意控制石蠟液體的溫度，應選擇熔點為58～60℃的石蠟，浸蠟溫度控制在比石蠟熔點高5～6℃，因為石蠟溫度過高會導致腎組織干脆，切片容易出現龜裂現象，浸蠟次數不應少于三缸，否則透明劑去除不干凈，影響切片質量。該技術的操作是將標本瓶取出后，倒出瓶中液體，注入2%松香石蠟浸蠟，放在微波爐中，中檔火力，輸出功率為60 W，恒溫75℃，加熱5～7 min。包埋、切片、染色、封片同常規，此方法可以一次同時處理20～30個標本。

2 結果

腎穿組織經過微波脫水、透明、浸蠟等處理后，與常規制片對照，細胞收縮無差別，微波溫度控制在90℃以下，酶不會失去活性。因此不影響免疫組化和特殊染色的結果。

3 討論

微波是一種高頻電磁波，近來已成功地應用于光鏡、電鏡及免疫學的研究，特別是在組織固定、脫水及免疫組織化學技術中的應用已日益廣泛。筆者采用微波輻射技術與常規制片技術相比較，在腎活檢組織的切片中取得了良好的效果。與常規法相比，微波制片具有較大的優勢。

腎臟組織結構致密，細胞成分多，皮腎穿刺的腎臟組織標本體積很小，常規方法制片時切片容易碎，易脫片，組織切片質量不好，影響正常診斷。尤其是在大部分醫院中，常規處理腎穿組織需要3 d，筆者采用微波快速處理腎穿組織，既縮短了時間，又避免了常規用同一臺脫水機同時處理大小標本的不理想效果。由于腎臟組織結構致密，細胞成分多，要求組織切片厚度2～3μm為宜，太厚會造成細胞成分重疊，出現假象，影響正常診斷，而常規的方法在脫水機中處理時，由于使腎穿組織脫水、透明、浸蠟等過程相對時間過長，造成組織脆硬，切片時如果過厚造成細胞成分重疊，切片過薄容易使切片破碎、易脫片等現象，而用微波處理的腎穿標本大大縮短了脫水、透明、浸蠟等過程所用的時間，克服了組織脆硬缺點，使組織結構、細胞內成分保持良好，特別是抗原得到良好保存，從而不影響切片及免疫組化和特殊染色效果。因此，微波對腎穿組織的快速處理是一種簡單、快捷、經濟、實用、理想的常規病理制片的新技術。

[1]龔志錦,詹熔洲.病理組織制片和染色技術[M].上海:上海科學技術出版社,1994:3-24.

[2]胡小安,盧靜,張潤.介紹一種肺穿刺組織的制片方法[J].診斷病理學雜志,2009,12(3):474.

[3]印志琪,王正祿,張學義,等.一種改良的肝穿刺活檢標本快速制片方法[J].診斷病理學雜志,2007,14(1):80.

[4]程國平,徐建勤,胡錦林,等.超聲及微波輻射技術在制備穿刺活檢組織切片中的應用[J].診斷病理學雜志,2007,14(6):475.

[5]孫保存,趙秀蘭,章明放,等.微波抗原修復法在免疫組織化學雙標記技術中的應用[J].中華病理學雜志,1996,25(4):249-250.

[6]熊正文,王伯,史景泉.微波修復抗原技術在免疫組織化學染色中的應用現狀[J].臨床與實驗病理學雜志,1998,14(2):177.