p53與宮頸癌的關(guān)系探討

白 蒙，胡新榮

（1.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心，廣東廣州 510330；2.廣東醫(yī)學(xué)院病理教研室，廣東東莞 524023）

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，是引起女性癌癥相關(guān)性死亡的重要原因。宮頸癌常見的病理類型以鱗癌為主，約占90%，其余為腺癌、小細(xì)胞癌等。其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，但許多研究表明，人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸鱗癌的發(fā)病密切相關(guān)[1]，抑癌基因 p53在宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及愈后中有重要意義。本文對p53與宮頸癌作一綜述。

1 p53與宮頸癌的發(fā)生

1.1 p53、CIN、宮頸癌

p53基因是公認(rèn)的抑癌基因，位于17號染色體的P13.1位點(diǎn)含有11個外顯子和10個內(nèi)含子，編碼含393個氨基酸殘基的p53蛋白，p53蛋白是一種核內(nèi)磷酸化酶，在體內(nèi)以四聚體形式存在，半衰期為20～30 min。在細(xì)胞DNA受損傷時，p53蛋白與基因的DNA相應(yīng)部位結(jié)合，使細(xì)胞停滯于G1期，抑制解鏈酶活性，并與復(fù)制因子A相互作用，參與DNA的復(fù)制與修復(fù).以便細(xì)胞有足夠的時間修復(fù)損傷。如果修復(fù)失敗，則通過上調(diào)誘發(fā)凋亡的基因，促使細(xì)胞凋亡，從而防止細(xì)胞惡變。

但野生型p53蛋白半衰期短，難以檢測，突變型p53蛋白則較穩(wěn)定且半衰期長，易用免疫組化法檢測出。宮頸癌組織中檢測到的p53蛋白陽性表達(dá)，可能是突變型或野生型p53蛋白同其他細(xì)胞蛋白如MDM2蛋白、hsP70結(jié)合生成的穩(wěn)定復(fù)合物[2]。研究表明，宮頸癌組織中p53蛋白的陽性表達(dá)率為（40.0%～48.2%）[3-5]，而且隨著腫瘤分化程度的下降，表達(dá)呈上升趨勢。宮頸癌與宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）之間p53蛋白陽性有無差異，不同的研究方法可能得出不同的結(jié)果，但幾乎所有研究表明宮頸癌與宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）p53蛋白陽性高于宮頸炎組織[2-6]。

1.2 p53、HPV 與宮頸癌

有報道99.7%子宮頸癌活檢標(biāo)本中可以檢測到HPVDNA[1]。HPV有相當(dāng)多的亞型，根據(jù)其致病力分為高危型和低危型，高危型包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82等，主要引起宮頸癌和上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN），低 危型有 HPV6、11、42、43、44、54、61、70、72 和 81 等型，主要引起生殖器疣[7]。HPV16和HPV18型是子宮頸癌中最常見型別，尤其HPV16型占該病毒感染的50%以上[8]。國際癌癥研究協(xié)會（IARC）對已發(fā)表的85份研究，其中10058個子宮頸癌病例進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)超過2/3的子宮頸癌病例與HPV16型（51.0%）或 HPV18 型（16.2%）感染有關(guān)[8]。

研究表明，宮頸癌組織中p53突變率較低（3%～20%），但p53蛋白陽性率較高（49%左右）[9-10]。用免疫組化方法檢測p53蛋白陽性，并不等于p53基因突變只是意味著有基因突變的可能，李惠芳等[9]推測：致宮頸癌變的異常p53蛋白大多數(shù)是由于HPV感染后，通過E6/p53蛋白復(fù)合物的形成所致，少數(shù)是由于p53基因錯義突變所致。已有研究表明，HPV16通過癌基因E6編碼的E6蛋白與p53蛋白結(jié)合[11]，結(jié)合的蛋白可使p53失活，并在細(xì)胞內(nèi)堆積，參與致癌。HPV16侵入宮頸基底細(xì)胞后，還可通插入等方式整合到人染色體的某一位點(diǎn)致p53基因突變，錯義突變的p53蛋白具有很強(qiáng)的代謝穩(wěn)定性，易在細(xì)胞中沉積，致使含量增高，可用免疫組化方法測出[6]。突變的p53基因致p53蛋白異常而失活，參與致癌。

2 p53基因多態(tài)性

p53基因多態(tài)性研究較多的是第4外顯子第72位密碼子多態(tài)性。正常人體細(xì)胞中克隆出的p53 cDNA存在兩種變異形式：編碼脯氨酸（Proline，p53Pro）的CCC和編碼精氨酸（Arginine，p53Arg）的 CGC。 Koushik A 等[12]對 1998～2002 年45篇文獻(xiàn)做meta回歸得出結(jié)論，p53第72位密碼子多態(tài)性與宮頸癌早期無關(guān)（OR，1.1；95%CI=0.9～1.3），與宮頸鱗癌和宮頸腺癌有輕微增高的危險性（OR，1.7；95%CI=1.0～2.7）。 李駿等[13]對檢索到的1998～2004年39篇病例對照文獻(xiàn)的meta分析認(rèn)為，p53第72位密碼子Arg/Arg基因型可增加亞洲人群（OR=1.28，95%CI=1.05～1.55），和歐洲人群（OR=1.45；95%CI=1.08～1.95），患浸潤性宮頸鱗癌的危險性，而與宮頸癌癌前病變（OR=0.98；95%CI=0.87～1.10）無關(guān)。

抗體實(shí)驗表明，兩種基因編碼的蛋白均為野生型，但兩者的生物學(xué)行為與功能則不完全相同，表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄激活作用、抑制轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力等方面，p53Arg基因型更易于致癌。有研究表明，p53Arg蛋白通過E6誘導(dǎo)的泛素途徑被降解的程度隨HPVE6量的增加而增加，而p53Pro降解較少[14]。p53第72位密碼子的兩種基因型與特定DNA序列結(jié)合能力無差異，但是作為轉(zhuǎn)錄激活因子，p53Pro的轉(zhuǎn)錄活性比p53Arg強(qiáng)[15]。p53Pro有顯著的G1/S期阻滯作用；同等條件下，p53Arg阻滯作用不明顯[16]。p53Arg比p53Pro的蛋白產(chǎn)物更容易與抑癌基因P73的蛋白產(chǎn)物結(jié)合形成穩(wěn)定復(fù)合物，使p53和P73均喪失正常的抑癌功能[17]。

3 p53基因的突變

在許多不同類型的惡性腫瘤中均存在突變型p53基因，在結(jié)直腸癌中含p53突變率最高，占50%～80%[18]，肺癌和乳腺癌也高達(dá)40%～50%，血液和淋巴系統(tǒng)腫瘤也有較高突變率。李惠芳等[4]研究結(jié)果表明宮頸癌組織中p53突變率較低（3%～20%），宮頸癌組織中p53抑癌基因突變主要發(fā)生在第5、6、7、8外顯子，尤其第7外顯子突變較多，突變率5%～9%，其突變熱點(diǎn)是密碼子 229、247、249。

4 p53與CIN、宮頸癌的發(fā)展及預(yù)后

野生型p53功能的缺失是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵步驟。較多的研究發(fā)現(xiàn)，p53蛋白過表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)，是宮頸癌發(fā)生的早期事件[19-20]，亦有研究者認(rèn)為p53蛋白過表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生，及分化程度有較密切的關(guān)系[2，5]，與宮頸癌發(fā)展及預(yù)后有一定的關(guān)系。張彥娜等[3]認(rèn)為檢測p53功能表達(dá)，較檢測p53蛋白更能直接地反映p53基因的功能狀態(tài)。通過60例宮頸鱗癌標(biāo)本的研究發(fā)現(xiàn)，p53表達(dá)異常之宮頸鱗癌與p53表達(dá)正常之宮頸鱗癌相比較，癌的惡性程度及復(fù)發(fā)率高，患者的生存期短。同時認(rèn)為p53基因功能異常的患者，肌層浸潤較深且較易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及術(shù)后復(fù)發(fā)。而郎爽等[5]的研究表明p53的表達(dá)率與宮頸癌的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)。

5 p53與宮頸癌治療

近十年余來，歐美國家應(yīng)用Ad-p53在晚期頭頸部鱗癌的臨床試驗已經(jīng)證明該基因藥物的安全性和有效性[21-22]。重組人p53腺病毒注射液（rAd-p53）感染腫瘤細(xì)胞，外源p53基因在細(xì)胞核內(nèi)高度表達(dá)，并產(chǎn)生細(xì)胞周期G 2/M期阻滯、凋亡和細(xì)胞增殖生長抑制作用[23]。通過Ad-p53轉(zhuǎn)染的方法，可以有效地重建腫瘤細(xì)胞內(nèi)變異的p53基因，使腫瘤細(xì)胞的放射及化療敏感性明顯提高[24]。Introgen公司的INGN201（p53腺病毒注射液的商品名）已經(jīng)在美國和歐洲進(jìn)行了Ⅲ期臨床試驗，并且在世界范圍內(nèi)獲得了大量的專利（包括在中國的專利），2003年9月已通過FDA的”藥品開發(fā)快速通道計劃”，批準(zhǔn)INGN201用于治療復(fù)發(fā)和不能切除的頭頸部鱗癌，延長患者生命的、減緩病情進(jìn)展[22]。國內(nèi)李詠等[24]對13例宮頸鱗癌患者采用重組人p53腺病毒注射液（深圳賽百諾基因技術(shù)有限公司生產(chǎn)，商品名：今又生）瘤內(nèi)注射治療，在一年左右的隨訪期內(nèi)認(rèn)為安全有效，但觀察時間較短，病例數(shù)也不多。張彥娜等[3]也嘗試通過腹壁下動脈插管將以缺陷型腺病毒為載體的p53基因注入7例宮頸鱗癌患者的髂內(nèi)動脈，7 d后觀察到局部腫瘤壞死、固縮，電鏡下見腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。

6 展望

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后是個多因素的過程，野生型p53的功能缺失，HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要因素，其他如遺傳、生活方式及環(huán)境等因素也與宮頸癌密切相關(guān)。對宮頸癌患者應(yīng)用p53基因治療，目前尚處于探索階段。進(jìn)一步研究p53基因的功能，野生型p53的功能缺失的方式、影響因素，與其他因素的相互作用等，必將為宮頸癌預(yù)防、診斷和治療提供更大的幫助。

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