白菜類蔬菜轉基因研究進展

高 麗 崔崇士 屈淑平

（東北農業(yè)大學園藝學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

白菜類蔬菜是十字花科蕓薹屬中最重要的蔬菜作物，全國各地普遍栽培。長期以來，我國大白菜〔Brassica campestris L.ssp.pekinensis（Lour）Olsson〕主要是通過常規(guī)育種進行品種改良，隨著組織培養(yǎng)和DNA重組技術的建立和不斷完善，現(xiàn)代生物技術在許多作物的種質創(chuàng)新和新品種選育中日益得到廣泛應用。自Ooms等（1985）利用農桿菌介導法在甘藍型油菜上獲得了第1株蕓薹屬的轉基因作物以來，蕓薹屬作物的遺傳轉化獲得了很大成功。白菜類蔬菜由于攜帶不易再生的 AA基因組型（Palmer，1992），因此是蕓薹屬作物中最難轉化的種，但是隨著轉化技術的發(fā)展，白菜類蔬菜的遺傳轉化也獲得了較大進步。筆者主要對大白菜、普通白菜（Brassica campestris L.var.communis Tsen et Lee）和菜薹（Brassica campestris L.var.utilis Tsen et Lee）3個種的轉基因研究進展進行了概述。

1 導入的外源基因和轉基因植株的獲得

目前，在白菜類蔬菜上轉化的目的基因種類越來越多，導入白菜類蔬菜的基因按功能來分主要有抗蟲基因、抗病基因、抗逆基因、抗除草劑基因、雄性不育基因、篩選基因和品質改良基因等。

1.1 抗蟲基因

白菜類蔬菜的害蟲主要有鱗翅目的菜青蟲、小菜蛾。目前，對抗蟲基因的克隆和轉化的研究最多。已用于和正用于抗蟲白菜類蔬菜培育的基因主要有外源凝集素基因（Leetin，Lee）、蛋白酶抑制劑基因（Proteinase inhibitor，Pin）和外源毒素基因。

外源凝集素存在于植物中，它是能夠與多糖類復合物上的糖基結合的蛋白質。其抗蟲原理是與昆蟲消化道中腸道周圍細胞膜上的糖蛋白結合，從而影響營養(yǎng)的吸收，達到殺蟲目的。楊廣東等（2003）將雪花蓮凝集素基因gna轉入大白菜，抗蚜性試驗表明，與對照相比，轉基因植株表現(xiàn)出明顯的對蚜蟲生長的抑制作用，平均能抑制蚜蟲密度達 20%。張揚勇等（2003）將gna基因轉入菜薹45天油青菜心，經檢測表明外源基因已經整合到菜薹基因組中。鄧智年等（2007）將帶有核基質結合區(qū)（Matrix Attachment Region，MAR）序列的野莧菜凝集素（Amaranthus viridis L.agglutinin，AVA）基因轉入大白菜豐順，結果表明轉基因大白菜對桃蚜的平均抑制率達到55.8 %。

蛋白酶抑制劑是一類廣泛存在于植物中的天然抗蟲蛋白質。最常用的蛋白酶抑制劑有豇豆胰蛋白酶抑制劑（Cowpea trypsin inhibitor，CpTI）、馬鈴薯蛋白酶抑制劑（Potato inhitor，Pin）和慈姑蛋白酶抑制劑（Arrowhead Proteinase inhibitor，API）。

豇豆胰蛋白酶抑制劑是一類由80個左右的氨基酸殘基構成的小分子多肽，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑類。它的抗蟲譜廣泛，對包括鱗翅目、鞘翅目以及直翅目的許多昆蟲都有毒性。佘健明等（2000）將cpti基因轉入普通白菜中腳黑葉和矮腳黑葉，通過分子檢測證實抗蟲基因已被整合到轉化植株的基因組，并能在自交后代植株中遺傳傳遞。為了提高CpTI蛋白的含量，楊廣東等（2002）在 cpti基因上添加內質網(wǎng)滯留信號 KEDL編碼序列，構成了修飾的 cpti基因（Signal-CpTI-KEDL，即sck）并將其轉入大白菜自交系GP-11和一代雜種中白4號。抗蟲性鑒定證明，轉基因植株對菜青蟲具有一定抗性。

馬鈴薯蛋白酶抑制劑屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑類，抗蟲譜與CpTI相似。Pin可以分為2種：PinⅠ和 PinⅡ。PinⅠ的成熟肽只能抑制胰凝乳蛋白酶；PinⅡ成熟肽可分別抑制胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶，PinⅡ基因是一類損傷誘導表達型基因，可以利用它來調控其他外源基因，達到定時表達的目的（張軍杰，2002）。所以 PinⅡ比 PinⅠ更有應用價值。張軍杰（2002）將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑（PinⅡ）基因分別轉入大白菜北京80號、福山大包頭、97-9（2）、小雜66號、小雜3號、小雜5號、小雜8號、小雜12號、小雜13號和菜薹49菜心，最終獲得了5株轉基因大白菜和41株抗性菜薹，大白菜表現(xiàn)出抑蟲效應。

慈姑蛋白酶抑制劑是一種可抑制多種蛋白酶的抑制劑，具有比活力高、穩(wěn)定、抗蟲譜廣泛的特點，也是抗蟲基因工程中常用的材料。張智奇等（1999）首次將慈姑蛋白酶抑制劑基因轉入普通白菜浦東矮箕菜和矮抗青，獲得了轉基因植株。飼蟲試驗表明，轉基因植株對鱗翅目害蟲菜青蟲的生長發(fā)育有一定的抑制作用。

蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringicnsis）的毒蛋白基因是目前植物基因工程應用最為廣泛的抗蟲基因。因為與其他抗蟲基因相比，在同等表達量之下，Bt類基因產物的抗蟲能力最強。Cho等（2001）將人工合成的蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白基因 cry1C轉入大白菜，結果表明轉基因植株對小菜蛾的抗性增強。

蜘蛛殺蟲肽（SIP）屬于一種昆蟲毒素，具有專一性和毒性大的特點。自 1995年開始，陳章良先生領導的研究人員人工合成了能編碼具有37個氨基酸殘基的蜘蛛殺蟲肽的基因，并將其成功導入煙草（蔣紅 等，1995），獲得的3株轉基因煙草對棉鈴蟲的殺蟲率可達30%～45 %，并能顯著抑制昆蟲蛻皮和生長發(fā)育，表現(xiàn)出明顯的抗蟲作用（蔣紅 等，1996）。

有研究表明，以轉抗蟲基因植物為食的害蟲有可能逐步對抗蟲蛋白產生抗性（李洪山，2007；丁如賢，2007）。由此，研究者提出了通過導入2種以上具不同抗性機制基因來延緩害蟲產生抗性的策略，其效果在棉花（郭三堆和崔洪志，1998）及煙草（王志斌和郭三堆，1999）轉基因作物上已得到驗證。曹傳增（2003）、徐恒戩（2004）分別將蜘蛛殺蟲蛋白SIP和馬鈴薯蛋白酶抑制劑PinⅡ基因同時轉入菜薹49菜心，經檢測證實，2種基因已全部整合到了轉基因白菜的基因組中。

1.2 抗病基因

在植物抗病毒基因工程中，外殼蛋白（CP）基因策略是最早獲得成功，也是至今應用最為廣泛的一種策略。這一策略已在10個屬逾30種病毒上獲得成功（朱常香 等，2001）。白菜類蔬菜最早見報道的轉入基因就是此類基因。Jun等（1995）將番茄花葉病毒 L基因衣殼蛋白（TMV-L-CP）基因轉入Brassica campestris ssp.ekinensis cv.Spring Flavor，獲得了6株轉基因植株，該基因得到了表達并在后代中穩(wěn)定遺傳。蕪菁花葉病毒（Turnip mosaic virus，TuMV）是馬鈴薯Y病毒組的一個成員，是引起白菜病毒病的主要病原。朱常香等（2001）將蕪菁花葉病毒的 CP（TuMV-CP）基因導入大白菜福山包頭，獲得轉化植株，抗病性測定結果顯示，轉基因植株具有明顯的抗病毒侵染能力。馬偉（2002）將 TuMV-CP基因轉入大白菜二牛心，經病毒接種試驗表明：轉基因Tl植株發(fā)病率和病情指數(shù)明顯低于對照品種，但各個單株病情指數(shù)差別較大，且隨著時間的增加，抗病性有所減弱。萵苣花葉病毒（Lettuce mosaic potyvirus，LMV）也屬于馬鈴薯Y病毒組的一個種，研究表明，LMV-CP基因具有廣譜抗性，且異源抗性比同源抗性更有效。成細華（2000）將 LMV-CP基因轉入到結球白菜中，獲得了 3株轉基因植株。此外，張廣輝等（1998）將花椰菜花葉病毒（CaMV）基因轉入大白菜豐抗70，經抗病性鑒定表明：48.08 %的轉基因植株對CaMV強株系Cabb B-JI具有較強的抗性，51.92 %的轉基因植株表現(xiàn)為敏感（鞏振輝等，2001）。

在植物抗病毒基因工程路線上，利用植物病毒復制酶基因也是一個很有前途的方法。于占東等（2006）將蕪菁花葉病毒復制酶（TuMV-Nib）反義基因轉入大白菜福山包頭，經檢測表明，TuMV-Nib反義基因不僅整合到大白菜基因組中，而且獲得表達，轉基因植株的接種測試結果表明，轉基因植株具有明顯的抗病特性。

Wang等（2002）將抗菌肽基因導入大白菜，獲得轉基因植株，抗病性測試表明轉基因植株對軟腐病表現(xiàn)出明顯的抗性。

為了獲得廣譜抗性，也有研究者將多價基因轉到白菜類蔬菜中。陳敏敏（2007）將融合基因InBING（由AFP2、TAP、Metch和BuforinⅡ 4個基因構成）轉入普通白菜蘇州青。其中AFP2是蘿卜的抗真菌基因，TAP亦為抗真菌基因，Metch為來自果蠅的富含Pro的小肽基因，它同時抗真菌和細菌，BuforinⅡ為歐洲蟾蜍的抗菌肽基因。經檢測該融合基因已經整合到植物基因組中。

此外，Zhao等（2006）將抗蟲的豇豆胰蛋白酶抑制劑基因和抗病的抗菌肽基因構成雙價基因轉入大白菜，從而獲得同時具有抗病性和抗蟲性的轉基因大白菜。

1.3 抗逆基因

白菜類蔬菜生長經常面臨低溫、高鹽和缺水等環(huán)境脅迫，因此逆境也成為影響白菜類蔬菜產量的一大因素。近年來，一些研究者開始考慮將抗脅迫基因轉入白菜類蔬菜。有研究表明，植物在受到環(huán)境脅迫時，晚期胚胎發(fā)生富集（LEA）基因，會表達并增強植株的抗逆性。Park等（2005）將 LEA基因轉入大白菜，增強了大白菜對鹽和干旱的抗性。Tseng等（2007）將玉米Cu/Zn超氧化物歧化酶基因和過氧化氫酶基因轉入大白菜Tropical Pride的葉綠體，結果顯示轉基因植株的抗鹽和抗SO2脅迫的能力增強。

1.4 雄性不育基因

雄性不育系是雜種優(yōu)勢利用的最理想方式，雄性不育系的選育一直深受重視。而雄性不育與花粉發(fā)育相關。余沛濤等（2000）將雄性不育基因Barnase（一種嵌合的細胞核編碼RNA酶基因）與 TA29啟動子連鎖，轉入大白菜，獲得轉基因植株。對轉化苗進行解剖鏡觀察發(fā)現(xiàn)花的發(fā)育較正常，但弱小，有時不能展開，雄蕊個別發(fā)育較差，花藥中花粉發(fā)育不完全，有些花藥中沒有花粉。劉樂承（2006）將花粉發(fā)育相關基因轉入菜薹油青45菜心，獲得了148株轉基因植株株系，利用RNA干涉基因沉默技術可導致轉基因植株的部分花粉敗育。范愛麗等（2008）將胞質雄性不育系相關線粒體基因CMS7311-orf 224導入大白菜，獲得2株大白菜轉基因植株。

1.5 抗除草劑基因

bar基因編碼草丁膦（phosphinotricin，PPT）乙酰基轉移酶的基因，它能將PPT轉化為無毒的乙酰化形式，從而解除PPT的毒害。目前，已有很多成功獲得轉bar基因的例子。例如，劉凡等（1998）將 bar基因轉入大白菜小孢子胚狀體，獲得 4株抗除草劑植株；張軍杰（2002）將 bar基因轉入菜薹49菜心，獲得了9株轉基因植株；曹傳增（2003）將bar基因轉入菜薹49菜心，獲得5株轉基因植株。

1.6 篩選基因

篩選基因的表達產物容易檢測，便于追蹤基因的表達過程和篩選被轉化細胞。從一定意義上來講，bar基因也屬于一種篩選基因。目前在植物表達載體中使用最多的篩選基因除了bar基因外，還有抗生素抗性基因和 GUS基因。Christey等（1997）將新霉素磷酸轉移酶（neomycin phosphotransferase Ⅱ，NOS-NPTⅡ-NOS）基因轉入大白菜，獲得了卡那抗性的大白菜植株。GUS基因編碼β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase，GUS），該酶是一種水解酶，能催化許多編碼β-葡萄糖苷酯類物質的水解。當?shù)孜?X-Gluc進入被測組織，若該組織發(fā)生了 GUS基因轉化，表達生成GUS酶，在適宜條件下，該酶可將X-Gluc水解成藍色物質，后經氧化形成一種肉眼可見的靛藍色物質，沉積在葉片具有GUS活性的部位或位點。Zhang等（2000）用根癌農桿菌EHA101介導GUS基因轉入大白菜。方斌（2001）將GUS基因轉入大白菜浙江早熟和50天快菜，分別獲得5株和4株轉基因植株，并通過鑒定。王火旭等（2001）將gusA基因轉入大白菜自交系AB-81，獲得了轉基因植株。

另外，Min等（2007）將編碼磷酸甘露糖異構酶的 pmi基因轉入大白菜作為篩選基因，從而為大白菜轉基因提供了一條新的篩選方法。

1.7 改良品質

轉化改良白菜類蔬菜品質的基因報道得很少。目前，轉入白菜類蔬菜的品質改良基因有葉球發(fā)育相關基因（BcpLH）。薛萬新（2001）將BcpLH正義基因和BcpLH反義基因分別轉入普通白菜上海黑葉四月慢和大白菜Da508，有4株被確定有外源基因的導入。轉BcpLH反義基因大白菜出現(xiàn)先期抽薹變異，轉BcpLH正義基因普通白菜無明顯表型變化。

2 轉化方法

2.1 借助組織培養(yǎng)的農桿菌轉化法

農桿菌轉化法是最成熟、最理想的雙子葉植株轉基因方法，目前已獲得成功的轉化植物中有80%是采用這種方法。利用農桿菌轉化白菜類蔬菜的例子已有很多，利用得最多的是章魚堿型根癌農桿菌 LBA4404，但是農桿菌侵染外植體后，會大大降低外植體的分化能力，從而影響轉化頻率。

2.2 其他轉化方法

針對白菜類蔬菜難分化這一特點，人們開始將研究轉向那些不借助組織培養(yǎng)的轉化方法。近年來，許多非組織培養(yǎng)途徑的遺傳轉化方法在白菜類蔬菜上進行了嘗試并取得了成功。薛萬新（2001）分別采用原位真空抽濾法、子房注射法、種子共培養(yǎng)法、花粉管通道法、蘸花法、噴花法、種子抽濾法、滴涂法將目的基因轉入大白菜和普通白菜。其中，在普通白菜的轉化中，只有原位真空抽濾法和子房注射法得到了抗性苗，比率分別為0.77 %和1.8 %；而在大白菜的轉化中，只有原位真空抽濾法和花粉管通道法得到了抗性苗，兩者的比率分別為0.63 %和0.067 %，從而可以看出真空抽濾法是對大白菜和普通白菜都有效的方法。而真空滲入法是迄今為止所用得最多的不依賴于組織培養(yǎng)的轉化方法。劉凡（2004）用真空滲入法將目的基因轉入菜薹49菜心，不同處理得到的種子轉化率為0.032 %～0.267 %，植株轉化率為3.45 %～80.00%，明顯高于種子轉化率，影響這些轉化率的因素主要是處理的季節(jié)和農桿菌的類型。徐恒戩（2004）用真空滲入法轉化大白菜，得到的種子轉化率為0～0.0065 %，植株轉化率為0～4.6 %，而其影響轉化率的因素為大白菜的品種和植株的生長狀態(tài)。曹傳增（2003）采用真空滲入和花序浸漬兩種方法轉化菜薹49菜心，其中真空滲入法的種子轉化率為0～0.236 %，植株轉化率為0～13.64 %。花序浸漬法得到的種子轉化率為0.179 %，植株轉化率為3.45 %。目前，這些非組織培養(yǎng)途徑的遺傳轉化方法的轉化條件尚不成熟，還沒有得到大規(guī)模的應用。

3 存在問題

3.1 轉基因技術問題

白菜類蔬菜的遺傳轉化雖取得了一些進展，但還存在著很多問題。由于白菜類蔬菜再生率低，受基因型影響大，使得白菜類蔬菜的轉化效率很低。因此建立高頻再生體系一直是研究者探索的重要課題。

3.2 轉基因檢測問題

轉基因白菜類蔬菜目的基因的檢測系統(tǒng)不健全且檢測內容不完全。目前所做的檢測基本上都停留在基因整合階段，絕大多數(shù)都進行了 PCR檢測，PCR-Southern和 Southern檢測比率分別為37.93 %和55.17 %。PCR檢測的假陽性率較高，不能有效說明目的基因已整合到植物基因組中，相應的PCR-Southern檢測也只能作為一個佐證，不能像核基因組DNA的Southern雜交那樣成為直接證據(jù)。由于在轉基因研究中，基因沉默是一個重要問題，因此對基因進行轉錄和翻譯水平的檢測是至關重要的。但是使用了檢測基因轉錄水平的RT-PCR和Northern的比率只有20.69 %和27.59 %，國內研究基本使用RT-PCR檢測，而絕大多數(shù)國外發(fā)表的文獻中均采用Northern方法。對基因翻譯的檢測就更少了，其中Western雜交僅見一例（Jun et al.，1995），采用ELISA的有兩篇（朱常香 等，2001；于占東 等，2006）。由此可見轉基因白菜類蔬菜的檢測還存在著很多問題，相當一部分轉基因白菜類蔬菜還需進一步確定。

3.3 轉基因白菜類蔬菜安全性問題

隨著轉基因白菜類蔬菜研究的進一步深入發(fā)展，轉基因白菜類蔬菜的安全性問題也日益得到人們的關注。轉基因的安全性包含了食用安全性和環(huán)境安全性。

3.3.1 食用安全性 大多數(shù)轉基因白菜類蔬菜轉入的都是抗蟲和抗病等有毒基因，這些轉基因白菜類蔬菜中會包含有毒物質。這些物質會不會通過長時間量的積累對人體的健康造成影響，目前還無法判斷。但是，目前在轉基因油菜籽中已發(fā)現(xiàn)對人體有害的成分（Witt et al.，1991）。轉基因白菜類蔬菜的毒性雖未見報導，但其食用安全性還有待進一步研究。

3.3.2 環(huán)境安全性 植物容易與它的近緣種甚至其他種之間發(fā)生基因漂移現(xiàn)象。如果所轉入的抗病蟲或抗除草劑基因向其他的近緣種雜草或者是其他物種發(fā)生漂移，將會產生超級雜草、超級病菌。因此研究轉基因白菜類蔬菜的基因漂移現(xiàn)象是非常必要的。劉凡（2004）將轉 bar基因大白菜分別與諸葛菜、芝麻菜、野芥菜、黑芥、埃塞俄比亞芥等9種十字花科常見雜草及大白菜、蕪菁、白菜型油菜、芥菜、甘藍型油菜、蘿卜、結球甘藍等7個栽培種進行人工授粉雜交試驗，結果表明，bar基因只侵入了雜草的黑芥，對于蕓薹屬中的幾種蔬菜，如白菜型油菜、大白菜、蕪菁，入侵率達100%；甘藍型油菜和芥菜入侵率分別為9 %和0.03 %～6.70%；bar基因向結球甘藍和蘿卜中的入侵率為0。由此可見，轉基因大白菜還是有向其他近緣種間發(fā)生基因漂移的可能。

4 展望

綜上所述，轉基因白菜類蔬菜的研究近十年來雖取得一定成就，但目前尚不成熟。再生困難是制約轉基因白菜類蔬菜發(fā)展的重要因素，相信未來一段時間對白菜類蔬菜轉基因的研究重點仍會停留在建立高頻再生體系和摸索其他有效方法上。此外，轉基因白菜類蔬菜的基因漂移和對其他非靶生物的影響以及對人類健康有無影響也會是熱點研究問題。而這些問題將會成為轉基因白菜類蔬菜研究的動力，推動其向更成熟更完善的方向發(fā)展。

曹傳增.2003.抗蟲基因載體的構建及白菜轉基因研究〔碩士論文〕.北京：首都師范大學.

陳敏敏.2007.不結球白菜離體培養(yǎng)再生體系的優(yōu)化及抗病轉基因研究〔碩士論文〕.南京：南京農業(yè)大學.

成細華.2000.結球白菜離體轉化體系的建立及轉LMV-CP基因植株的獲得〔碩士論文〕.北京：首都師范大學.

鄧智年，魏源文，呂維莉，李楊瑞.2007.MAR序列介導野莧菜凝集素基因在白菜中的表達.園藝學報，34（2）：381-386.

丁如賢.2007.Bt和CpTI雙價抗蟲基因共轉化菘藍提高對害蟲抗性的研究〔博士論文〕.上海：第二軍醫(yī)大學.

范愛麗，張魯剛，惠麥俠，張明科，張戰(zhàn)鳳.2008.大白菜orf224基因植物表達載體的構建及遺傳轉化.西北植物學報，28（7）：1296-1302.

方斌.2001.大白菜組織培養(yǎng)和遺傳轉化體系的建立的研究〔碩士論文〕.南寧：廣西大學.

鞏振輝，何玉科，宋獻軍，張廣輝，張桂華.2001.轉化CaMV基因Ⅵ蕓薹屬蔬菜植株抗病性鑒定及其遺傳分析.園藝學報，28（5）：67-69.

郭三堆，崔洪志.1998.中國轉基因抗蟲棉研究又取得新進展.中國農業(yè)科學，31（6）：1-5.

蔣紅，朱玉賢，王雅平，王澤平，陳章良.1995.蜘蛛殺蟲肽基因的合成及其在植物中表達質粒的構建.植物學報，37（4）：321-325.

蔣紅，朱玉賢，陳章良.1996.導入蜘蛛殺蟲肽基因的煙草具有抗蟲性.植物學報，38（2）：95-99.

李洪山.2007.植物—小菜蛾—殺蟲劑相互作用機制的研究〔博士論文〕.南京：南京農業(yè)大學.

劉凡，姚磊，李巖，曹明慶，劉公社.1998.利用大白菜小孢子胚狀體獲得抗除草劑轉基因植株.華北農學報，13（4）：93-98.

劉凡.2004.白菜抗蟲基因工程及bar基因的遺傳飄移研究〔博士論文〕.北京：中國農業(yè)大學.

劉樂承.2006.白菜花粉發(fā)育相關基因BcMF3和BcMF4的轉基因功能驗證〔博士論文〕.杭州：浙江大學.

馬偉.2002.大白菜轉蕪菁花葉病毒外殼蛋白基因的研究〔博士論文〕.哈爾濱：東北農業(yè)大學.

佘建明，蔡小寧，朱禎，朱衛(wèi)民，張初賢，袁希漢.2000.普通不結球白菜抗蟲轉基因植株的獲得.江蘇農業(yè)學報，16（2）：79-82.

王火旭，王關林，王曉巖，方宏筠，賈士榮，唐益雄，魏毓棠.2001.大白菜 AB-81高頻再生系統(tǒng)的建立及 gusA基因瞬時表達的研究.園藝學報，28（1）：74-76.

王志斌，郭三堆.1999.雙價抗蟲基因植物表達載體的構建及其在煙草中的表達.高技術通訊，（11）：1-6.

徐恒戩.2004.利用真空滲入法獲得轉基因抗蟲白菜及其轉化機理的研究〔博士論文〕.泰安：山東農業(yè)大學.

薛萬新.2001.白菜類蔬菜葉球發(fā)育相關基因的分子克隆及其轉基因植物研究〔博士論文〕.西安：西北農林科技大學.

楊廣東，朱禎，李燕娥，朱祝軍，肖桂芳，魏曉麗.2002.大白菜轉修飾豇豆胰蛋白酶抑制劑基因獲得抗蟲植株.園藝學報，29（3）：224-228.

楊廣東，朱禎，李燕娥，朱祝軍，上官曉霞，吳霞.2003.雪花蓮外源凝集素基因在大白菜中的表達和抗蚜性遺傳分析.園藝學報，30（3）：341-342.

于占東，趙雙宜，何啟偉，王翠花，牟晉華，劉春香，康靜.2006.TuMV-Nib反義基因對大白菜的遺傳轉化研究.園藝學報，33（5）：1093-1095.

余沛濤，王煒，何玉科，沈瑞娟.2000.大白菜（Brassica chinensis）的雄性不育基因轉化.上海農業(yè)學報，16（1）：17-19.

張廣輝，鞏振輝，薛萬新，陳啟林.1998.大白菜和油菜真空滲入遺傳轉化法初報.西北農業(yè)大學學報，26（4）：1-4.

張軍杰.2002.白菜抗蟲轉基因研究〔碩士論文〕.雅安：四川農業(yè)大學.

張揚勇，李漢霞，葉志彪，盧永恩，陸芽春.2003.農桿菌介導GNA基因轉化菜薹.園藝學報，30（4）：473-475.

張智奇，周音，鐘維瑾，張建軍，殷麗青，陳全慶.1999.慈姑蛋白酶抑制劑基因轉化小白菜獲抗蟲轉基因植株.上海農業(yè)學報，15（4）：4-9.

朱常香，宋云枝，張松，郭興啟，溫孚江.2001.抗蕪菁花葉病毒轉基因大白菜的培育.植物病理學報，31（3）：257-264.

Cho H S，Cao J，Ren J P，Earle E D.2001.Control of Lepidopteran insect pests in transgenic Chinese cabbage（Brassica rapa ssp.pekinensis）transformed with a synthetic Bacillus thuringiensis cry1C gene.Plant Cell Reports，20：1-7.

Christey M C，Sinclair B K，Braun R H，Wyke L.1997.Regeneration of transgenic vegetable brassicas（Brassica oleracea and B.campestris）via Ri-mediated transformation.Plant Cell Reports，16：587-593.

Jun S I，Kwon S Y，Paek K Y，Paek K H.1995.Agrobacterium-mediated transformation and regeneration of fertile transgenic plants of Chinese cabbage（Brassica campestris ssp.pekinensis cv.‘Spring Flavor’）.Plant Cell Reports，14：620-625.

Min B W，Cho Y N，Song M J，Noh T K，Kim B K，Chae W K，Park Y S，Choi Y D，Harn C H.2007.Successful genetic transformation of Chinese cabbage using phosphomannose isomerase as a selection marker.Plant Cell Reports，26（3）：337-344.

Ooms G，Bains A，Burrell M，Karp A，Twell D，Wilcox E.1985.Geneticmanipulation in cultivars of oilseed rape（Brassica napus）using Agrobacterium.Theor Appl Genet，71：325-329.

Palmer L E.1992.Enhaneed shoot regeneration from Brassica campestris by silver nitrate.Plant Cell Reports，11：541-545.

Park B J，Liu Z C，Kanno A，Kameya T.2005.Genetic improvement of Chinese cabbage for salt and drought tolerance by constitutive expression of a B.napus LEA gene.Plant Science，169：553-558.

Tseng M J，Liu C W，Yiu J C.2007.Enhanced tolerance to sulfur dioxide and salt stress of transgenic Chinese cabbage plants expressing both superoxide dismutase and catalase in chloroplasts.Plant Physiology and Biochemistry，45：822-833.

Wang G L，F(xiàn)ang H J，Wang H X.2002.Pathogen resistant transgenic plant of Brassica pekinensis by transfering antibacterial peptide gene and its genetic stability.Acta Botanica Sinica，44（8）：951-955.

Witt U，Hansen S，Albaum M，Abel W O.1991.Molecular analyses of the CMS-inducing‘Polima’cytoplasm in Brassica napus L.Current Genetics，19：323-327.

Zhang F L，Takahata Y，Watanabe M，Xu J B.2000.Agrobacterium-mediated transformation of cotyledonary explants of Chinese cabbage（Brassica campestris L.ssp.pekinensis）.Plant Cell Reports，19：569-575.

Zhao J L，Liang A H，Zhen Z，Tang Y X.2006.Regeneration of Chinese cabbage transgenic plants expressing antibacterial peptide gene and cowpea trypsin inhibitor gene.Euphytica，150（3）：397-406.