內生多粘類芽胞桿菌纖溶酶基因PPFE-I在大腸桿菌中融合表達及活性分析

呂鳳霞，陸兆新，別小妹，林謙，張充，曹林，郭瑤，湯彥翀

南京農業(yè)大學食品科技學院 酶工程研究室，南京 210095

血栓栓塞性疾病嚴重危害人類健康和生命，溶栓療法是治療血栓栓塞性疾病最為有效并且可靠的手段。溶栓療法主要是通過藥物溶解血栓中的主要基質血纖維蛋白，或激活血液中無活性的血漿纖溶酶原，形成有活性的纖溶酶來催化血纖維蛋白的水解，使血栓溶解，血管再通。目前臨床應用的溶栓藥物有較好的療效，明顯降低了患者的死亡率和致殘率，但還存在特異性不高、半衰期短、易出血及再栓塞等缺點。因此迫切需要研制開發(fā)高效、特異、安全、副作用小、價廉的新型溶栓藥物。已有研究表明，許多中藥具有抗血小板聚集、抗血栓形成的作用，包括生物堿類、黃酮類以及皂甙等化合物[1]，尤其是活血化瘀中草藥具有不同程度的抗凝血、血小板聚集及溶解血栓的作用[2-5]。生活在植物組織內的內生菌，由于內生菌與宿主植物長期協同進化過程中，彼此構成了穩(wěn)定的生態(tài)關系，使內生菌具有產生某些與植物相同或相似化合物的能力[6]。因此，從植物內生菌的代謝產物中尋找新型溶栓劑具有深遠理論意義和潛在的應用價值。目前，關于內生菌來源纖溶酶的研究報道尚不多見。

本研究室首次從中藥植物組織中篩選分離到一株纖溶活性較高和良好體外溶栓效果的多粘類芽胞桿菌EJS-3[7]。由于從天然產酶菌株中分離纖溶酶不僅產量低而且酶的分離純化過程操作繁瑣，可采用基因工程技術在大腸桿菌表達系統(tǒng)中高效表達纖溶酶，進一步提高酶的產量，簡化純化過程。……