3至12月齡健康嬰兒對4種味覺面部表情強度評估的橫斷面調查

章 嵐 李 琴 黃 春 付桂英 王 勁

味覺是決定兒童飲食喜好的主要因素，但味覺的發育過程尚未清楚。研究表明兒童飲食偏好與飲食行為發育在嬰兒早期已經出現[1,2]，成人期飲食行為建立在嬰兒期飲食行為的基礎上[3，4]，故探究嬰兒的基礎味覺發育很有必要。新生兒味覺研究始于1970年，發現新生兒對甜和苦味覺呈兩種明顯不同的反應類型。1988年，Oster等制定嬰兒面部運動單位編碼系統(Baby FACS)以量化嬰兒反應。Baby FACS是在解剖學的基礎上將嬰兒面部表情分解為可分辨的最小運動單位，以嬰兒面部運動單位出現的頻數評價嬰兒面部表情[5]。本研究前期隊列研究[6，7]提示兩個重要結論，一是Baby FACS在中國新生兒味覺測試中有較好的驗證，二是新生兒味覺發育依次為甜、咸、酸和苦。但前期研究為小樣本(20名新生兒)同一名新生兒8個月間9次隨訪，本研究擬以更大的樣本量，進一步評估3～12月齡健康嬰兒的基礎味覺狀況，通過橫斷面調查建立中國健康嬰兒味覺發育的基本數據，以期為喂養指導提供依據。

1 方法

1.1 納入標準 ①成都市婦幼保健院兒童保健中心健康體檢的3、6、9和12月齡嬰兒；②自然分娩或縮宮素誘導陰道分娩者； ③1和5 min的Apgar評分均≥8分；④出生體重在2 500～4 000 g；④吞咽和吸吮能力正常；⑤體重、身長和頭圍均在同月齡嬰兒P3～P97。

1.2 排除標準 ①經詢問病史排除可能存在先天性遺傳代謝性疾病；②排除味覺測試當月有明顯醫學疾病者；③排除味覺測試當日測試中始終精神狀態不好者。

1.3 分組考慮 參照國外學者進行味覺研究均采用月齡分組的方法[8～13]，本研究實際對1～12月齡嬰兒均進行了味覺測試。為與國外相關研究進行對比，也鑒于分12個月齡組需要的樣本量太大，故本研究選取3、6、9和12月齡組嬰兒入組分析。月齡計算為實際月齡±3 d。

1.4 樣本量的計算 因系兩樣本率之間的比較，故采用以下公式計算樣本量：

1.5 味覺測試及判斷

1.5.1 味覺溶液配制[7]試驗材料為托盤式扭力天平TN型(上海第二天平儀器廠)；一次性1 和10 mL注射器，量杯，一次性小勺。配制25%蔗糖(甜)、5%氯化鈉(咸)、1.43%檸檬酸(酸)和0.025%鹽酸小檗堿(苦)4種味覺溶液，均以無菌蒸餾水配制，裝于無菌小瓶備用，在配制過程中保證無菌。味覺溶液溫度為37℃。每次新鮮配制的味覺溶液使用時間均為1 h，1 h后重新配制新鮮溶液。所有溶液均由本文第一作者獨立配制。

1.5.2 測試方法 在嬰兒空腹安靜清醒狀態下進行味覺測試。5 s內用小勺喂味覺溶液0.2 mL至嬰兒口腔，1 min后記錄面部表情，再以0.4 mL蒸餾水沖洗嬰兒口中，使測試液殘留量減至最小(沖洗后嬰兒無特殊面部表情)。為確保每種溶液有第1次給予的機會，3和6月齡嬰兒采用4×4拉丁方設計4種味覺溶液的測試順序。因預試驗結果顯示6月齡后嬰兒對苦味反應明顯，易出現嘔吐反應，為減少反感表情對測試的影響， 9和12月齡組采用甜、咸、酸和苦的測試順序。

1.5.3 味覺試驗結果判斷方法[7]按Baby FACS[5]將新生兒的面部表情運動分為3組基本強度不同的運動單位，在此基礎上將嬰兒面部表情強度分為10級，沒有口部運動或僅有口部吸吮動作即完全接受的面部表情1級；在1級的基礎上出現面中部表情(鼓腮或皺鼻等)為2級；在2級的基礎上出現面上部表情(低眉或皺眉等)為3級；噘嘴為4級；在4級的基礎上出現面中部表情(鼓腮或皺鼻等)為5級；在4級的基礎上出現面上部表情(低眉或皺眉等)為6級；反感地嘴張大(不吸不吞)為7級，在7級的基礎上出現面中部表情(鼓腮或皺鼻等)為8級；在7級的基礎上出現面上部表情(低眉或皺眉等)或啼哭為9級；惡心和干嘔為10級。1～3級為可接受表情，4～8級為不愉快表情，9～10級為拒絕表情。

1.6 倫理學考慮 本研究配制的味覺溶液對測試嬰兒無損害，為防止有味覺測試溶液與腹瀉偶合情況的出現，所有嬰兒監護人均知情自愿參與并簽署知情同意書。

1.7 質量控制 由本文第一作者培訓1名新的測試者，培訓后培訓者與測試者對2、6、9和12月齡各5名健康嬰兒行味覺測試，同時記錄測試結果，結果一致率達100%，確認測試者熟練掌握嬰兒面部表情強度10個等級的判斷。

1.8 盲法實施 測試者不參與科研設計、篩查嬰兒入組、配制溶液和統計分析工作。測試者只對門診醫生提供的健康嬰兒行味覺測試，并記錄測試結果在問卷上。

2 結果

2.1 納入對象基本情況 2008年9月至2009年9月480名健康嬰兒進行味覺測試，其中3月齡組122名(男70名，女52名)； 6月齡組122名(男57名，女65名)；9月齡組119名(男56名，女63名)；12月齡組117名(男60名，女57名)。不同月齡組嬰兒身長、體重和頭圍均在正常范圍(表1)。

2.2 不同月齡組嬰兒對4種味覺面部表情強度比較 表2數據表明，9月齡組對甜味的面部表情1～3級出現的百分率(100%)高于6月齡組(89.4%)，面部表情9～10級出現的百分率(0)顯著低于6月齡組(1.6%)；6月齡組對酸味的面部表情1～3級出現的百分率(45.1%)顯著高于9月齡組(33.6%)，面部表情9～10級出現的百分率(10.6%)顯著低于9月齡組(17.7%)；6月齡組對苦味的面部表情1～3級出現的百分率(41.0%)顯著高于9月齡組(30.2%)，面部表情9～10級出現的百分率(15.2%)顯著低于9月齡組(48.8%)。咸味面部表情在1～3級和9～10級無明顯變化。

表1 4個月齡組嬰兒生長發育的基本情況

表2 4個月齡組嬰兒對4種味覺面部表情強度出現的百分率(%)

Notes The differences of intensity of response to the four tastes between different age groups were compared by Wilcoxon rank-sum test. Sweet: 3 monthsvs6 months,U=-0.215,P=0.83; 6 monthsvs9 months,U=-3.402,P=0.001; 9 monthsvs12 months,U=0,P=1. Salt: 3 monthsvs6 months,U=-0.662,P=0.508; 6 monthsvs9 months,U=-0.658,P=0.511; 9 monthsvs12 months,U=-1.036,P=0.3. Soul: 3 monthsvs6 months,U=-2.964,P=0.003; 6 monthsvs9 months,U=-1.82,P=0.069; 9 monthsvs12 months,U=-3.466,P=0.001. Bitter: 3 monthsvs6 months,U=-3.996,P=0.000 1; 6 monthsvs9 months,U=-3.934,P=0.000 1; 9 monthsvs12 months,U=-0.711,P=0.477

2.3 對4種味覺面部表情強度的性別差異分析(圖1) 6月齡組對咸味的面部表情1級出現的百分率女嬰(29.2%)顯著低于男嬰(40.3%)；對酸味的面部表情1級出現的百分率女嬰(6.2%)顯著低于男嬰(10.5%)，面部表情10級出現的百分率女嬰(3.1%)顯著高于男嬰(0)。

9月齡組對甜味的面部表情1級出現的百分率男嬰(77.8%)顯著低于女嬰(95.2%)；對酸味的面部表情1和2級出現的百分率女嬰(0和7.9%)顯著低于男嬰(3.6%和26.8%),面部表情10級出現的百分率女嬰(7.9%)顯著高于男嬰(3.6%)。

12月齡組對咸味的面部表情1級出現的百分率女嬰(37.5%)顯著低于男嬰(83.3%)；男嬰對咸味的5級以上面部表情出現的百分率均為0，女嬰為35.7%；對酸味的面部表情1級出現的百分率(0)女嬰顯著低于男嬰(31.7%)，面部表情10級出現的百分率女嬰(8.9%)顯著高于男嬰(0)；對苦味的面部表情10級出現的百分率女嬰(28.6%)顯著高于男嬰(0)。

圖1 各月齡組男女嬰兒面部表情強度出現的百分率比較

Fig 1 The percentage of the intensity of the response to the four tastes in male and female infants in 4 groups

Notes m: months; Gender diffrence in 3, 6, 9 and 12 months was investigated by Wilcoxon rank-sum test. A:sweet,U=-1.073, -1.151, -3.429 and -0.072,P=0.283, 0.250, 0.001 and 0.942, respectively; B: salt,U=-0.031, -2.329, -0.787 and -6.431,P=0.975, 0.000 1, 0.000 1 and 0.000 1, respectively; C: soul,U=-0.031, -2.329, -0.787 and -6.431,P=0.975, 0.000 1, 0.000 1 and 0.000 1, respectively; D: bitter,U=-1.115, -1.227, -1.345 and -6.002,P=0.265, 0.220, 0.179 and 0.000 1, respectively

3 討論

嬰兒味覺系一發育變化過程，受諸多環境因素影響，如家庭飲食習慣、嬰兒氣質類型、嬰兒精神狀態和種族[6]等。本研究采用的面部表情強度分析方法多用于嬰兒的味覺測試，本研究組前期隊列研究[6，7]對同一名嬰兒在不同月齡進行 4種味覺測試，存在一定的缺陷，主要表現在同一嬰兒8個月間9次味覺測試，是否會造成味覺測試的記憶，對于測試觀察者而言，在評價面部表情強度時可能受到上一次評價結果的影響，還表現在納入觀察的樣本量僅20例，所得出的結論有可能會因樣本量較小而出現偏倚。本研究在充分估計了不同月齡嬰兒樣本量的前提下，采用橫斷面調查，對不同月齡嬰兒僅進行一次味覺測試和面部表情強度的評估，各月齡組實際納入的樣本量均符合設計的要求，且是目前國內外同類研究中樣本量最大的。3、6、9和12月齡的分組設計與國外相關研究具有很好的可比性。同時在正式開展本研究前進行了預試驗，對20名健康嬰兒行培訓者和測試者味覺面部表情強度評估的一致性檢驗，并在研究實施后對測試者實施了盲法，保證了研究采集的數據真實可靠。

研究發現甜味覺接受力在嬰兒6月齡前基本保持穩定[8，9]。如圖1所示，本研究各月齡組嬰兒對甜味覺多表現為可接受的表情(1～3級)，9月齡組對甜味的接受能力強于6月齡組(100%vs89.4%)，與前期隊列研究[7]顯示的6～8月齡組甜味覺接受能力顯著高于0～5月齡組的結果一致，提示嬰兒甜味覺發育在6月齡后逐漸成熟，在6月齡后更喜好甜味。這一個結果與Schwartz等[10]研究結果不一致，該研究認為甜味覺接受力在6和12月齡有輕微下降，認為這種下降會持續至青春期[14]，6月齡后甜味覺接受力下降與引入的半固體食物甜味降低有關，本研究的結果考慮可能與中國家長給嬰兒引入水果、菜泥品種多為甜味食物有關。

有研究發現對咸味的偏好出現在3和6月齡[10，11]，2～12月齡嬰兒顯示明顯的咸味覺發育與嬰兒的味覺經歷(鹽的攝入增加)有關[12]。Beauchamp等[13]發現，嬰兒對鹽的敏感性和接受能力與年齡有關，如4月齡內的嬰兒攝入水量與含鈉的溶液量相似， 4～24月齡的嬰幼兒攝入鹽溶液量多于水，31～60月齡的兒童則喜水而不喜鹽溶液。有研究[15]給3～18日齡幼鼠連續喂鹽溶液和奎寧溶液，結果發現進食該兩種溶液的量的變化呈U形曲線。一項調查顯示有約25%的母親在嬰兒食物中加入了鹽[17]。本研究前期隊列研究顯示隨月齡增加咸味覺接受能力增強[7]，本研究顯示咸味覺在3、6、9和12月齡組均無顯著的變化，在各月齡組可接受的面部表情1～3級出現的百分率均顯著高于酸味和苦味，提示嬰兒除甜味外亦喜歡咸味。考慮可能與中國嬰兒6月齡后開始添加鹽的味覺經歷有關，可能母親的飲食對胎兒期及嬰兒期的味覺亦有影響[16]。

前期隊列研究發現新生兒對酸味主要表現為4～8級不愉快接受表情[6]；嬰兒酸味覺敏感性發育呈倒U形曲線形[7]。本研究提示9月齡組較6月齡組對酸味更敏感且更不愉快接受。圖1顯示，在面部表情10個強度上均有所體現，以可接受表情、不愉快表情和拒絕表情劃分呈較均衡態勢。有研究也顯示嬰兒拒絕酸味[10]。嬰兒對酸味的接受能力與是否經常接觸含酸味的食物有關。有研究顯示嬰兒期每天飲酸味液體的兒童喜歡高濃度檸檬酸液體[18]；嬰兒期酸味覺得發育也與水果的攝食量有關[19,20]。本研究結果提示中國嬰兒9月齡后仍較拒絕酸味，考慮可能與嬰兒酸味覺的經歷較少有關。

新生兒對苦味以9～10級拒絕表情為主，3月齡后始對苦味敏感，6～8月齡時對苦味強反應頻數最高，提示6月齡后嬰兒苦味覺發育逐漸成熟[6，7]。本研究結果顯示，9月齡組較6月齡組對苦味更敏感，即9月齡嬰兒更拒絕苦味，與前期隨訪研究結果一致[7]，與國外相關研究結果較為一致[10]?？紤]對苦味覺的敏感與很少接觸苦味食物等味覺經歷有關。

新生兒味覺有性別差異，男性對甜味和苦味較女性敏感[6]。3月齡后女嬰對苦味覺較男嬰敏感[7]。國內有成人的研究顯示，男女性對苦味的味盲率分別為25.0%與6.1%，差異有統計學意義[21]。Chow等[22]研究發現在相同狀態下雌鼠平均比雄鼠多攝入3%的鹽量，并證實雄鼠分泌的睪丸激素可以減少其對鹽的需求。本研究提示6月齡后出現味覺的性別差異，分別為6月齡組對咸味和酸味，9月齡組對甜味和酸味，12月齡組對咸味，酸味和苦味有性別差異，結果均為女嬰較男嬰敏感(圖1)。Bartoshuk等[23]研究顯示成人女性比男性具有更多的菌狀味蕾和味孔，使女性對味覺更敏感，與本研究觀察結果吻合。Oakley等[24]研究發現小鼠味蕾在生后3個月內逐漸發育成熟。推測隨著味蕾逐漸發育成熟，女嬰舌上味蕾和味孔數目較男嬰增多明顯，出生至3月齡是女嬰味蕾和味孔發育高峰期。味蕾的發育成熟過程與本研究的結果亦較吻合。

本研究的不足與局限性：①盡管對嬰兒味覺的研究采用的是嬰兒面部表情強度的觀察，經過多項臨床研究證實是評估嬰兒味覺發育的有效方法，但一次性的觀察和記錄可能會產生一定的測量偏倚，如能以錄像的方式記錄面部表情強度，如全身運動質量(GMS)[26]評估新生兒神經發育結局的方式，進行多人的評估可能更客觀；②不同月齡組味覺測試面部表情10個強度的分布還顯得很分散，特別是除甜味以外的其他味覺中體現得更突出，其中的原因還相當復雜，也許是測試評估方法還有待進一步完善，也許僅以嬰兒對味覺的面部表情強度還不足以反映味覺發育的真實變化。

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