二色補血草組織培養快速繁殖技術研究

摘要:對二色補血草組培快繁技術進行研究，結果表明，以MS培養基中加入6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L的激素組合處理后的葉叢增殖倍數最大，達2.94。生根培養時以采用不含IBA的培養基為宜，生根率可達80%。經強光直射煉苗的二色補血草試管苗的移栽成活率達到82.5%，顯著高于未經強光煉苗的試管苗移栽成活率。

關鍵詞:二色補血草;組織培養;快速繁殖

中圖分類號:S567.9文獻標識碼:A DOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2010.02.008

Studies on Tissue Culture and Rapid Propagation of Limonium bicolor

CHAI Ci-jiang， SHI Yan-shan， LUO Jian-xia， WANG Dan， YAN Mo-lin

(Department of Horticulture，Tianjin Agricultural College，Tianjin 300384，China)

Abstract:The technology of tissue culture and propagation of Limonium bicolor was studied. The results showed that the leaf bunch increased 2.94 times that was the biggest one among the treatment in the MS medium with1.0 mg/L 6-BA and 0.2 mg/L NAA added. The rooting rate of the leaf bunch of Limonium bicolor in vitro could arrive 80.0% in the MS medium without IBA. With acclimating by sunlight irradiating， 82.5% of the Limonium bicolor plantlets survived after transplanted. This survival rate was higher obviously than that with no acclimation by sunlight irradiating.

Key words: Limonium bicolor; tissue culture; rapid propagation

二色補血草(Limonium bicolor)是藍雪科補血草屬植物，枝干挺拔，花色艷麗，被人稱為“干枝梅”，是理想的天然干花材料，同時又是藥用植物，并且是鹽堿化較為嚴重地區的理想綠化植物。但近年來，由于旅游熱和草原環境的不斷惡化，加之人們的過度采折使其資源面臨瀕危。二色補血草以種子繁殖為主，但繁殖率低，且后代易發生變異。采用組織培養方法進行二色補血草無性系快速繁殖，對于保護和開發二色補血草資源具有重要意義，但國內關于這方面的研究僅見到少量報道[1-3]。本研究對二色補血草的組織培養快繁技術進行了探討，以便為完善該項技術提供依據。

1材料和方法

在5月份二色補血草花莖伸長后，剪取花莖為外植體，自來水洗凈浮土，在無菌環境中先用70%的酒精浸泡20～30 s，再放入0.1%升汞中浸泡6 min，后用無菌水沖洗3～4次，放入帶濾紙的培養皿中，剪取約1 cm長的帶分叉的花莖莖段為外植體，接入培養基進行初代培養，培養3～4周后在花莖莖段的分叉處可形成葉叢，取葉叢進行繼代培養。初代培養基和繼代培養基均為MS培養基附加蔗糖3%、6-BA 1.0 mg/L和NAA 0.1 mg/L。繼代4代后取葉叢作為試材，進行以下試驗。

1.1 BA與NAA激素配比對二色補血草葉叢分化增殖影響的研究

基本培養基為MS培養基，附加3%的蔗糖，在基本培養基中分別加入不同濃度配比的6-BA和NAA，激素配比共設6-BA1.0 mg/L與NAA0 mg/L、6-BA1.0 mg/L與NAA0.1mg/L、6-BA1.0 mg/L與NAA0.2 mg/L、6-BA1.0 mg/L與NAA0.3 mg/L 4個處理。上述每處理每瓶接種4個葉叢(每葉叢具有3～5個葉，下同)，每處理接種10瓶，接種后于培養室培養，培養溫度20～28 ℃，光照1 500～3 000 lx，培養30 d后調查葉叢增殖數量，并作統計分析。

1.2不同IBA濃度對二色補血草葉叢生根影響的研究

基本培養基為MS培養基，附加1.5%蔗糖。在基本培養基中分別加入0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mg/L的IBA，以不加IBA的培養基作對照。上述處理每瓶接種4個葉叢，每處理10瓶，培養條件同1.1。接種30 d后調查葉叢生根情況并作統計分析。

1.3強光煉苗對二色補血草移栽成活的影響

6月初，將生根的二色補血草試管苗在向陽房間的窗臺上放置5 d，讓試管苗經直射的陽光照射，再在遮蔭條件下開瓶煉苗4 d，然后將試管苗洗去根上瓊脂后移入營養缽內。以未經陽光直射煉苗的試管苗做移栽對照。移栽基質為蛭石∶沙∶園土∶草炭為2∶1∶1∶0.5的混和基質，移栽后遮蔭，避免直射光照射，空氣濕度為70%～90%，溫度為20～30 ℃。移栽4周后調查成活率。

2結果與分析

2.16-BA與NAA濃度配比對二色補血草葉叢分化增殖的影響

由表1可見，在培養基中含有6-BA1.0 mg/L不變的條件下，附加NAA0.2 mg/L的處理的葉叢增殖倍數最高，并顯著的高于附加NAA0 mg/L和0.1 mg/L的處理，附加NAA0.3 mg/L處理的葉叢增殖倍數與NAA0.2 mg/L處理差異不明顯，該處理與NAA0 mg/L和0.1 mg/L兩處理差異也不明顯。這一結果表明，在本試驗所采用的激素配比中，以6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L的激素配比最有利于二色補血草葉叢增殖，并且其增殖倍數達到2.94，按這樣的增殖倍數，從理論上計算在1 a內可以由1個葉叢增殖到12萬個以上，已基本符合快速繁殖的技術要求。

2.2不同IBA濃度對二色補血草葉叢生根的影響

由表2可見，在IBA濃度為0～3.0 mg/L范圍內，隨IBA濃度的增高生根率有降低的趨勢，但并不規律。IBA為0～0.5 mg/L時，生根率均為80%，以后隨IBA濃度增高生根率有所下降，但到IBA為2.0 mg/L時，生根率又升高至82.5%，濃度隨IBA濃度進一步增至2.5～3.0 mg/L時，生根率又明顯降低。上述結果表明，高濃度的IBA對二色補血草葉叢生根有抑制作用，在二色補血草試管苗生根培養中，以采用不添加IBA的培養基為好。

2.3強光煉苗對二色補血草試管苗移栽成活的影響

由表3可見，經強光煉苗的二色補血草試管苗移栽成活率達到82.5%，顯著高于未經煉苗的試管苗移栽成活率(40%)。強光煉苗是蘋果和葡萄等試管苗移栽前煉苗馴化的重要環節，可增強試管苗對移栽后環境的適應能力，提高試管苗的移栽成活率[4，5]。本試驗結果表明，強光煉苗也是提高二色補血草試管苗移栽成活率的有效措施。

試驗中觀察到，二色補血草經一段時間的煉苗后，至移栽前，其葉叢的基部形成一較粗的根干，根干的下部著生一團須根，須根雖較細，但量較大，這對其移栽成活十分有利。

移栽成活的試管苗經煉苗后移入溫室土壤中，成活的植株第2年在開花時期、花序高度及花形等方面均表現整齊一致，顯示出無性繁殖的優勢。

3小結

本試驗初步得出以下幾點結論。

(1)二色補血草初代培養可以剪取帶分叉的花柄作外植體進行滅菌接種，接種后經一段時間培養，可在分叉處形成葉叢，然后可取葉叢進行繼代培養。

(2)在繼代培養中，不同濃度的6-BA與NAA組合對二色補血草葉叢增殖分化有明顯的影響，以附加6-BA1.0 mg/L和NAA0.2 mg/L的MS培養基對其葉叢分化較為有利，葉叢增殖倍數可以達到2.94，能基本滿足快速繁殖的需要。

(3)高濃度的IBA對二色補血草生根有抑制作用，在二色補血草試管苗生根培養中，以采用不含IBA的培養基為宜，生根率可達80%。

(4)移栽前對試管苗進行強光直射煉苗可明顯提高試管苗的移栽成活率，試管苗經煉苗馴化后，葉叢基部可形成一較粗的根干，且須根發達，對移栽成活十分有利。

參考文獻:

[1] 王文，孫志峰.二色補血草的組織培養[J].植物生理學通訊，1990(5):42.

[2] 張小蘋，馬雙馬，那淑芝，等.二色補血草葉片組織培養及無性系的建立[J].沈陽農業大學學報，1998，29(1):96-97.

[3] 陳銀鳳，陳蒿.二色補血草試管苗生根及移栽基質研究[J].亞熱帶植物科學，2001，30(3):37-39.

[4] 馬寶焜，孫建設.蘋果試管苗移栽技術研究[J].中國果樹，1991(1):4-7.

[5] 曹孜義，齊與樞.葡萄組織培養及應用[M].北京:高等教育出版社，1990:93-106.