草莓組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)

摘 要:介紹了草莓脫毒與快繁的技術(shù)措施，篩選出了草莓組織培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，并介紹了脫毒草莓苗圃繁殖要點(diǎn)，為草莓無毒苗快繁體系的建立提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞:草莓;組織培養(yǎng);脫毒;快繁

中圖分類號:S668.4 文獻(xiàn)標(biāo)識號:A 文章編號:1001-4942(2010)03-0109-02

草莓是一種營養(yǎng)豐富的高檔水果，通常采用匍匐莖繁殖，由于繁殖系數(shù)小和新莖分枝繁殖苗苗質(zhì)差，影響產(chǎn)量和品質(zhì);采用種子繁殖，由于草莓屬異花授粉作物，實(shí)生苗之間個(gè)體變異較大，很難保持原品種的優(yōu)良性狀。目前無病毒苗繁殖體系建立尚不完善，農(nóng)民自繁自育，反復(fù)留種，致使種苗退化，病害滋生蔓延。盲目引種又會造成品種雜亂。采用草莓脫毒、快繁技術(shù)，提高草莓的繁殖系數(shù)，建立無病毒苗快繁體系，是提高草莓產(chǎn)量和品質(zhì)，促進(jìn)草莓產(chǎn)業(yè)化的有效途徑。草莓脫毒苗既可確保原品種的種質(zhì)純度，又可提高品種的抗逆性，脫毒苗生長速度快，長勢強(qiáng)，產(chǎn)量可增加30%以上。

1 脫毒的理論依據(jù)

病毒是一種純寄生的無胞型微生物，它寄生在植物體內(nèi)引發(fā)病害，直接影響植物體的生長和代謝。莖尖是植物頂端的原生分生組織，細(xì)胞分裂旺盛，生命力強(qiáng)。莖尖分生組織培養(yǎng)之所以能除去病毒，是由于病毒在感染植物體內(nèi)不均勻分布，老葉及成熟的組織和器官中病毒含量較高，而幼嫩及未成熟的組織和器官中病毒含量較低，生長點(diǎn)(0.1～1.0 mm區(qū)域)則幾乎不含或含病毒很少，是因?yàn)椴《痉敝尺\(yùn)轉(zhuǎn)速度與莖尖分化區(qū)細(xì)胞生長速度不同，病毒向上運(yùn)輸速度慢，而分生組織細(xì)胞增殖快，這就使莖尖分生組織區(qū)域的細(xì)胞不含病毒。經(jīng)離體培養(yǎng)的再生無病毒植株就是脫毒苗。

2 組織快繁

即通過植物體的莖、葉等組織進(jìn)行增殖擴(kuò)繁，其生長周期短，一般為25～28 d，繁殖系數(shù)大，一年內(nèi)一個(gè)生長點(diǎn)頂端細(xì)胞可培養(yǎng)出600～800萬與母體生理特征完全一致，且不帶病毒、類病毒、細(xì)菌、真菌的植株，同時(shí)苗木生長速度快，產(chǎn)量高。

2.1 無菌材料的獲得

從正在生長的植株中，選擇生長健壯﹑無病蟲﹑長勢強(qiáng)﹑具有本品種特征的匍匐莖尖或單株心莖，去掉可見葉，用10%洗潔凈泡8～10 min，在流動的自來水中沖洗20～30 min，吸干水分。在無菌室內(nèi)的超凈工作臺上，用75%酒精處理20～30 s，0.1%升汞和吐溫1～2滴滅菌8～12 min，再用無菌水沖洗5～7次，然后借助于 80～100倍雙目解剖鏡剝?nèi)∩L點(diǎn) 0.1～0.3 mm，含有1～2個(gè)葉原基，快速接種到誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)基中，封口后轉(zhuǎn)到培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。同時(shí)做好標(biāo)記(品種、接種時(shí)間、接種次數(shù))，以便觀察與記載。

2.2 組織培養(yǎng)條件

基本培養(yǎng)基為MS;①誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L +2，4-D 0.05～0.2 mg/L + GA3 0.5～1.5 mg/L;② 繼代與增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 1.5～2.5 mg/L+IAA 0.5～1.0 mg/L+IBA 0.5～1.0 mg/L+GA3 1.0～1.5 mg/L;③壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0～2.0 mg/L+IAA 0.1～1.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+GA3 1.0～1.5 mg/L;④生根培養(yǎng)基1/2MS+6-BA 0.1～0.5 mg/L或1/2MS(15～20 g/L蔗糖)，附加蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，pH 5.6～5.8。培養(yǎng)溫度(24±2)℃，相對濕度為65%～70%，光照強(qiáng)度1 800～2 200 lx，光照時(shí)間12～14 h/d。

2.3 分化與增殖培養(yǎng)

快速接種到誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)基中的生長點(diǎn)， 30～40 d后有芽萌動， 50～60 d即可分化出叢生芽，待芽高3～5 cm時(shí)，可將叢生芽分開或單芽轉(zhuǎn)入繼代與增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。10～15 d有叢生芽長出，35 d左右叢生芽生長高度達(dá)3～5 cm，當(dāng)每個(gè)生長點(diǎn)分化出20～30株小苗時(shí)即可進(jìn)行生物學(xué)病毒檢測，經(jīng)檢測后，不符合標(biāo)準(zhǔn)的全部淘汰，無毒苗在繼代與增殖培養(yǎng)基中加速繁殖，繼代周期為25～28 d。循環(huán)往復(fù)，增殖倍數(shù)一般為8倍，最高可達(dá)15倍以上。

2.4 壯苗與生根選取生長勢好的芽苗轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，經(jīng)過25 d左右培養(yǎng)的小苗生長健壯，可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)，15 d后，芽的基部有白色隆起，25 d左右，有95%以上的植株長出3～5條2～3 cm長的根，待植株生長28～35 d時(shí)，有3～5片展開葉，苗高2～3 cm即可備苗移栽。

2.5 煉苗與移栽

煉苗前揭開培養(yǎng)瓶的封口膜，練苗5～7 d，然后小心取出，用自來水沖去苗基部的培養(yǎng)基，移栽到滅菌的腐殖質(zhì)與碎爐渣(3∶2)的混合基質(zhì)中，前期適當(dāng)遮蔭并保持相對濕度85%～95%，逐步降至70%，定期噴灑40%多菌靈800倍液殺菌，每7～10 d一次，15 d后生長加快。

移栽前應(yīng)設(shè)隔離空間，用80目的防蟲網(wǎng)，嚴(yán)防傳毒昆蟲進(jìn)入;揭開培養(yǎng)瓶的封口膜煉苗5～7 d，使其適應(yīng)自然環(huán)境生長，用鑷子小心把草莓苗取出，再用自來水洗去基部的培養(yǎng)基，以防感染，然后用多菌靈800倍液浸5～10 min備用;將脫毒苗移栽至滅菌的腐殖質(zhì)和草木灰與珍珠巖(2∶1∶1)混配的基質(zhì)中;加塑料罩保水，半月后去掉，前5～7 d適當(dāng)遮蔭并保持85%～90%的相對濕度，以后相對濕度保持65%左右，溫度15～25℃，定期(5～7 d)噴灑多菌靈800倍液殺菌2～3次，成活率可達(dá)90%以上。

3 脫毒草莓苗圃繁殖要點(diǎn)

3.1 加強(qiáng)田間管理，合理運(yùn)籌肥水

脫毒草莓苗定植后澆透水，苗期保持土壤濕潤，保持田間持水量在75%左右。小苗生長15~20 d后每666.7m2追施氮磷鉀復(fù)合肥15～20 kg，8月份停施氮肥，只施磷鉀肥。生長發(fā)育期間要結(jié)合中耕除草保持土壤疏松，嚴(yán)防板結(jié)。

3.2 認(rèn)真進(jìn)行除蕾、摘心

脫毒草莓苗現(xiàn)蕾后及時(shí)摘去花序。匍匐莖發(fā)生后應(yīng)在母株四周均勻擺布，并在著生苗節(jié)位前3～4 cm處壓蔓，促進(jìn)子苗生根。定植起苗前1個(gè)月對匍匐莖摘心，并摘除過密的弱小幼苗，以保證子苗健壯生長，提高育苗質(zhì)量。

3.3 草莓的壯苗標(biāo)準(zhǔn)

無公害脫毒草莓苗生長健壯、長勢強(qiáng)，展開葉5～6片，根莖粗1.0 cm以上，苗全株重30～35 g，根重占其1/3，花芽分化早，發(fā)育充實(shí)飽滿。