蟬擬青霉對蠶豆蚜蟲致病性的初步研究

譚艾娟　歐　翔　劉愛英

摘要:研究了8株蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)對蠶豆蚜蟲的致病性。結果表明,8株蟬擬青霉分生孢子懸液、菌絲懸液對蠶豆蚜蟲的致病性有一定差異,孢子懸液的致病性強于菌絲懸液,其中GZDXIFR4611菌的感染致死效果最好,其孢子懸液的致死率可達到86.7%,菌絲懸液的致死率可達到66.7%,這將為蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供參考數據。

關鍵詞:蟬擬青霉;蠶豆蚜蟲;致病性

中圖分類號:S476.12文獻標識碼:A DOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.03.016

Study on Pathogenicity of Paecilomyces cicadae to Aphis Medicnginis Koch

TAN Ai-juan,OU Xiang,LIU Ai-ying

(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang 550025,China)

Abstract:To investigate the effect of pathogenicity of Paecilomyces cicadae (PC) to aphis medicnginis koch, the insecticidal mortality of the 8 strains of PC were tested. The result indicated that the 8 strains of PC showed the different insecticidal effect. The pathogenicity of spore suspension was stronger than that of hyphae suspension. The highest insecticidal mortality of the 8 strains of PC was GZDXIFR4611, which mortality in spore suspension was 86.7% and in hyphae suspension was 66.7%.

Key words:Paecilomyces cicadae;aphis medicnginis koch;pathogenicity

蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)又名蟬花,是由子囊菌類麥角菌科真菌大蟬草(Cordyceps cicadae)的子實體及其寄主山蟬(Cicadeflammata)幼蟲的蟲體部構成[1]。擬青霉屬真菌作為一類重要的生防真菌可以侵染多種害蟲,產生多種具有生物活性的代謝產物,在害蟲生物防治上有著廣泛的應用[2]。蟬擬青霉既是名貴中藥,又有較高的致病性,可以寄生鱗翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)中的很多昆蟲[3]。隨著化學農藥弊端的日益凸現,生物防治成為當今研究的熱點,筆者報道了8株蟬擬青霉對蠶豆蚜蟲的致病性,為將蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供參考數據,有一定的應用價值。

1材料和方法

1.1材 料

1.1.1供試菌株蟬擬青霉共8株:GZDXIFR3618采自貴州省荔波縣;GZDXIFR4611、GZDXIFR4614、GZDXIFR4615、GZDXIFR1615均采自貴州省貴陽市森林公園;GZDXIFR 4718采自貴州省梵凈山;GZDXIFR3716采自四川省成都市青城山;GZDXIFR4606采自云南省墨江,以上菌株均由貴州大學真菌資源研究所分離、鑒定、保存。

1.1.2供試昆蟲供試蠶豆蚜蟲由貴州大學昆蟲研究所提供。

1.1.3培養基PDA培養基:馬鈴薯200 g切塊,用水煮沸30 min,加蔗糖20 g、瓊脂20 g、水補足1 000 mL,pH自然。液體培養基[4]:葡萄糖20 g,酵母膏5 g,K2HPO4 1 g,水補足1 000 mL,pH6.5。

1.2方 法

1.2.1菌培養斜面培養:將8株菌分別接種到PDA試管斜面上,25 ℃恒溫培養7 d,備用。平板培養:將活化的斜面菌種接種于PDA平板,25 ℃恒溫培養15 d,備用。液體種子培養:用接種環將已活化的試管斜面菌種接種到裝有50 mL液體培養基的250 mL的三角瓶中,25℃,150 r/min,搖床振蕩培養18～20 h。

液體發酵培養:將種子培養液按5%的接種量接種到裝有50 mL液體培養基的250 mL的三角瓶中,25 ℃,150 r/min,搖床振蕩培養72～96 h。

1.2.2殺蟲制劑準備孢子懸液:在培養好的平板菌落上倒入適量的0.05%土溫-80溶液,用接種環輕輕刮下孢子,充分震蕩后用4層紗布濾入無菌三角瓶中,調整孢子濃度為1×107個/mL,2×107個/mL,3×107個/mL,備用。菌絲懸液:將搖瓶培養好的菌絲用無菌水洗滌除去發酵液,用玻璃勻漿器破碎細胞,無菌水稀釋備用,稀釋倍數(w∶v)為1倍、2倍、3倍。

1.2.3致病性測定參照安建梅[5]、陳祝安[6]的方法,將直徑為12 cm的培養皿內放入圓形濾紙,滅菌,冷卻后把新鮮、無蟲、潔凈的蠶豆葉放入培養皿內,用濕潤的棉球包裹葉柄,從長有兩齡蚜蟲的蠶豆葉上接入個體大小相近的蚜蟲30頭,用噴霧器均勻地往蠶豆葉上噴灑適量的孢子或菌絲懸液,空白對照為無菌水。25 ℃恒溫保濕培養,每日光照10 h,每2 d給棉球加一次無菌水。觀察蚜蟲感染情況,計數。致死率=試驗組死亡率-空白組死亡率。

2結果與分析

2.1感染癥狀

在試驗過程中,蠶豆蚜蟲感染了蟬擬青霉后,保濕培養3～4 d,蟲體表面被白色菌絲覆蓋,無孢梗束形成。對感染的蚜蟲進行粘片顯微觀察,可見蟬擬青霉菌絲形成的產孢結構和分生孢子。

2.28株蟬擬青霉菌絲懸液對蠶豆蚜蟲的致病性差異

從表1可看出,不同濃度的8株蟬擬青霉菌絲懸液對蠶豆蚜蟲都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR4611的致病性最強,致死率可達到66.7%。

2.38株蟬擬青霉孢子懸液對蠶豆蚜蟲的致病性差異

從表2可看出,不同濃度的8株蟬擬青霉孢子懸液對蠶豆蚜蟲都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR4611的致病性最強,致死率可達到86.7%。

3討 論

(1)對蠶豆蚜蟲的致病性測定結果顯示,8株蟬擬青霉菌株對蠶豆蚜蟲都有致病作用,濃度越高,致病性越強。通過對蟬擬青霉孢子懸液、菌絲懸液致病性測定表明,孢子懸液的致病能力高于菌絲懸液,并且8株蟬擬青霉菌中GZDXIFR4611致病性最強。

(2)對感染的蠶豆蚜蟲進行粘片顯微觀察,結果顯示芽孢結構是蟬擬青霉;孢子懸液致病的原因可能在于孢子萌發時芽管侵入蟲的體表使蟲致死。本試驗中采自不同地區的蟬擬青霉菌株對蠶豆蚜蟲致病能力有一定差異,但與其地理

來源無明顯相關性。

(3)目前對蟬擬青霉的研究主要集中在藥用方面,在其生物防治方面的研究不多,本研究表明,蟬擬青霉可能含有對蚜蟲的致死因子,作為生防試劑有良好的開發應用前景,有待進一步研究。

參考文獻:

[1] 陳祝安,劉廣玉,胡菽英.蟬花的人工培養及其藥理作用研究[J].真菌學報,1993,12(2):138-144.

[2] 陳祝安.蟲生真菌蟬擬青霉的研究[J].真菌學報,1991,10(4):280-287.

[3] 鄒曉,劉愛英,梁宗琦.紫外線誘變蟬擬青霉對白粉虱治病性的影響[J].菌物研究,2004,2 (4) :35-39.

[4] 譚艾娟,梁宗琦,劉愛英.蟬擬青霉最適液體培養基的正交試驗研究[J].華中農業大學學報,2004, 23(1):33-35.

[5] 安建梅.蟲生真菌粉質擬青霉對黃刺蛾幼蟲的致病性研究[J].山西農業大學學報,2000(2):105-107.

[6] 陳祝安,黃基榮,許益偉,等.蟬擬青霉防治菜粉蝶幼蟲試驗[J].生物防治通報,1990,6(3):131-133.