丁香酚乳液和醇溶液對鯉魚麻醉作用的對比研究

呂世明　蔡洪能　譚艾娟　張富林　尹澤東

摘要:以吐溫80、司盤80、無水乙醇和水為原料制成丁香酚乳液,對鯉魚進行麻醉,對比測定丁香酚乳液和丁香酚醇溶液對鯉魚的麻醉開始時間、麻醉持續時間和LD50。結果表明:在相同濃度下,丁香酚乳液對鯉魚的麻醉開始時間比丁香酚醇溶液慢,作用較平緩,但麻醉持續時間長5倍。丁香酚乳液的半數致死量比丁香酚醇溶液大2.15倍。因此,丁香酚乳液對鯉魚的麻醉作用較緩和,麻醉維持時間長,安全性更高,更適合用于生產實踐。

關鍵詞:丁香酚;乳化;麻醉

中圖分類號:S965.116文獻標識碼:A DOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.03.001

Contrast Study of Anesthetic Effect of Emulsified Eugenol and Alcoholic Eugenol on Cyprinus carpio Linnaeus

LV Shi-ming1,CAI Hong-neng2,TAN Ai-juan2,ZHANG Fu-lin1,YIN Ze-dong1

(1.College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang,Guizhou 550025,China;2. College of Life Science,Guizhou University,Guiyang,Guizhou 550025,China)

Abstract:To test the anesthetic effect of emulsified eugenol to Cyprinus carpio Linnaeus, eugenol was emulsified with Tween 80, Span 80, ethanol and water. Then the start time, time length of anesthesia and LD50 of emulsified eugenol to Cyprinus carpio Linnaeus was determined contrastively with alcoholic eugenol. Results showed that the start time of anesthesia of emulsified eugenol was longer than these of alcoholic eugenol under the same concentration of eugenol. The time length and LD50 of anesthesia of emulsified eugenol were five times longer and 2.15 times large respectively than that of alcoholic eugenol. So, the anesthetic effect of emulsified eugenol on Cyprinus carpio Linnaeus was slower, gentler, longer and safer than alcoholic eugenol. It was more proper to be applied for fish farming than alcoholic eugenol as a fish anesthetic agent.

Key words:eugenol;emulsion;anesthesia

丁香酚(Eugenol)是一種油狀的有香味的化合物,是很多中草藥如丁香、肉桂、肉豆蔻中的有效化學成分[1]。作為臨床常用藥,丁香酚具有廣泛的藥理活性,尤其是在抗菌消炎、殺蟲驅蟲、抗氧化和抗衰老等方面的生理活性具有較大的利用價值[2,3]。但由于其揮發性強、與水不相混溶的特性,大大限制了其作為水產品麻醉劑的應用。為改善丁香酚對魚類的麻醉效果,對丁香酚進行乳化,并就其麻醉效果與丁香酚醇溶液[4]進行了比較研究,以期為丁香酚在生產中的應用提供試驗依據和理論參考。

1材料和方法

1.1材 料

藥品:丁香酚、吐溫80、司盤80、無水乙醇、自來水;動物:體長15～20 cm鯉魚若干;器具:15 L塑料盆若干,增氧泵1個;水溫:供試水溫為10～15 ℃。

1.2方 法

1.2.1丁香酚乳液的配制按吐溫80∶司盤80∶無水乙醇∶丁香酚 = 4∶2∶1∶2的比例配制乳液,首先將吐溫80與司盤80混合,然后再加入乙醇和丁香酚,最后緩慢加入水。

1.2.2丁香酚乳液和丁香酚醇溶液對鯉魚麻醉開始時間的測定將配好的丁香酚乳液和丁香酚醇溶液依次稀釋成1×10-5,2×10-5,4×10-5,8×10-5,16×10-5 g/mL 5個梯度。隨機抽取10條鯉魚分別放入每個濃度梯度中藥浴,測定其麻醉的開始時間(麻醉的開始時間為魚放入麻醉劑溶液到魚體失去平衡的時間)。

1.2.3丁香酚乳液和丁香酚醇溶液麻醉鯉魚蘇醒時間的測定將配好的丁香酚乳液和丁香酚醇溶液依次稀釋成2×10-5,4×10-5,8×10-5,16×10-5g/mL 4個梯度。隨機抽取10條鯉魚分別放入每個濃度梯度中藥浴10 min后測定其蘇醒時間[5](蘇醒時間為魚放入清水到魚體翻正反射恢復的時間)。

1.2.4丁香酚乳液和丁香酚醇溶液對鯉魚半數致死量的測定藥浴10 min,用序貫法[6]測定丁香酚乳液和醇溶液對鯉魚的半數致死量LD50。

2結果與分析

2.1丁香酚乳液和丁香酚醇溶液對鯉魚麻醉開始時間的測定

結果表明(表1),隨著丁香酚濃度的增加,丁香酚乳液和丁香酚醇溶液對鯉魚的麻醉開始時間均逐漸縮短。但在相同濃度下,丁香酚醇溶液麻醉開始時間明顯短于丁香酚乳液,并且醇溶液在丁香酚濃度為1×10-5 g/mL時對鯉魚具有麻醉作用而乳化液卻沒有。說明醇溶液的麻醉起效時間快于乳化液。

2.2丁香酚乳液和丁香酚醇溶液麻醉鯉魚蘇醒時間的測定

在相同濃度下,隨著藥浴時間的增加,麻醉的鯉魚蘇醒時間均不斷延長,其趨勢差別不大;而在相同藥浴時間的情況下,隨著麻醉濃度的增加,乳化液麻醉的鯉魚蘇醒時間比醇溶液有明顯延長,說明乳化后的丁香酚對鯉魚的麻醉維持時間延長(表2)。

2.3丁香酚乳液和丁香酚醇溶液對鯉魚半數致死量的測定

如表3所示,在藥浴10 min條件下,丁香酚乳液的半數致死量為398.11 mg/L,而丁香酚醇溶液則為181.97 mg/L,丁香酚乳液的安全性比丁香酚醇溶液提高了約2.15倍。因此,乳化后的丁香酚在麻醉鯉魚的生產中具有較高的安全性,減少麻醉死亡的發生。

3討 論

(1)丁香酚是一種植物香料,性質穩定,且其代謝物能夠快速地從血液和組織中排出,不會誘發機體產生有毒和突變物質,并且不必擔心它對人類和環境造成危害。與FDA推薦的首選魚用麻醉劑MS222相比,MS222麻醉濃度高且價格昂貴,使用后不會從魚體中完全消失,FDA要求經MS222麻醉的食用魚休藥期為21 d[7]。因此,丁香酚毒性更小,且價廉易得,從人類健康與食品安全出發,丁香酚具有更大的應用前景。

(2)丁香酚可溶于低極性或非極性的溶劑,難溶于水,在應用乙醇將其溶解后對魚進行麻醉時,其醇溶液在水中不穩定,隨時間推移有部分丁香酚又重新聚集成油滴沉于水的底部,使麻醉的濃度不易較準確的控制,對麻醉效果產生一定的影響。而10%丁香酚乳液50 h內不會看見明顯分層;因此,在使用中麻醉的濃度易于控制,提高了麻醉效果,減少了麻醉事故的發生。

(3)丁香酚穿透性強,易于透過生物膜(魚鰓的血管壁)進入血管,到達魚的大腦發揮麻醉作用,試驗結果顯示:丁香酚乳液的麻醉開始時間比相同濃度的丁香酚醇溶液明顯延長(表1),其原因可能是丁香酚分散于乳化劑中,再分散于水中,形成的乳滴直徑較大,同時,乳滴外部的親水性增高,使乳液中的丁香酚透過質膜到達血液的能力下降所致。

(4)丁香酚乳液不僅改善了其在水中分散性、穩定性,并且極顯著的延長了對魚的麻醉維持時間(表2),使其在清水中蘇醒的時間明顯延長。使生產中獲得較長的離水操作的時間,完成更復雜的處理,減少對魚的傷害。如果用于魚類的麻醉運輸,可更加延長運輸時間和路程,提高運輸成活率和魚的經濟價值。同時,試驗結果還表明:丁香酚乳液對鯉魚的半數致死量比丁香酚醇溶液高出約2.15倍(表3),擴大了丁香酚麻醉的安全性。但延長麻醉時間和提高半數致死量的機制未見相關報道,還有待進一步研究。

因此,對丁香酚進行乳化處理,不僅改善了丁香酚的水溶性、水中分布的均勻性和水中的穩定性,還延長了麻醉的維持時間,增強麻醉效果,擴大了麻醉的安全范圍,丁香酚乳液用于魚類麻醉有較好的應用前景,值得進一步研究并在生產中推廣使用。

參考文獻:

[1] 中國藥科大學.中藥辭海(第一卷)[M].北京:中國醫藥科技出版社,1999:665.

[2] 邱電,張魁華,方炳虎.丁香酚的藥理作用[J].動物醫學進展,2007,28(10):101-103.

[3] 彭宅彪,張瓊光,代虹健,等.丁香酚的藥理學研究進展[J].時珍國醫國藥,2006,27(10):2079-2081.

[4] 張富林,呂世明,韓俊偉.丁香酚對鯉的麻醉作用[J].山地農業生物學報,2007,26(6):504-507.

[5] 趙艷麗,楊先樂,黃艷平,等.丁香酚對大黃魚類麻醉效果的研究[J].水產科技情報,2002,29(4):163-165.

[6] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學(第2版)[M].北京:人民衛生出版社,1991:400.

[7] 劉長琳,李繼強,陳四清,等.丁香酚麻醉半滑舌鰨成魚的試驗研究[J].海洋水產研究,2007,28(3):50-56.