鹽提法提取波紋巴非蛤全臟器中糖蛋白的工藝條件研究

周國杰 黃曉玲 范秀萍

摘要對波紋巴非蛤全臟器中的糖蛋白的分離提取條件進行研究,結果表明:以0.5moL/L的NaCl溶液為浸提液,料液比為1∶12,75℃水浴浸提90min,提取液經透析濃縮,再以60%乙醇終濃度沉淀,得到糖蛋白粗品,其得率為1.64%,總糖與可溶性蛋白含量分別為38.3%和17.1%。

關鍵詞波紋巴非蛤;糖蛋白;分離提取;工藝條件

中圖分類號TS254.1;TQ936.22+3文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)21-0260-02

糖蛋白(glycoprotein)是一類由糖類與多肽或蛋白質以共價鍵連接而形成的結合蛋白,是生物體內重要的一類大分子,種類繁多,分布廣泛,具有多種重要功能。目前已有報道證實從海洋軟體動物海兔、蝦夷扇貝、管角螺中提取的糖蛋白有明顯的抗腫瘤、增強免疫活性。自由基是人體生命活動中生物化學反應的中間產物,許多疾病的發生、發展與自由基對組織的損傷有密切關系,自由基可加快機體的衰老過程,可誘發癌癥、心血管疾病等。該研究采用鹽提法提取波紋巴非蛤(Paphia undulata)全臟器中的糖蛋白,對其工藝條件進行初步探討,以供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

波紋巴非蛤采自湛江市東風市場,去殼后,于-18℃冷凍備用。

1.2試驗方法

1.2.1糖蛋白分離提取方法。原料→勻漿→加浸提液→浸提→冷卻→紗布過濾→濾液濃縮至體積的1/4→醇沉→離心→沉淀物用乙醇、丙酮交替洗滌3次→恒溫干燥→糖蛋白粗品。

1.2.2檢測方法。總糖含量測定采用苯酚-硫酸法;蛋白含量測定采用考馬斯亮藍法。

2結果與分析

2.1不同浸提液濃度對糖蛋白提取效果的影響

分別以蒸餾水(0moL/L NaCl)、0.5moL/L NaCl、1.0moL/L NaCl、1.5 moL/L NaCl等4種溶液作為浸提劑,料液比為1∶10,80℃下浸提60min。檢測浸提液中的總糖含量與總蛋白含量,結果如圖1所示。4種浸提劑提取液中總糖含量明顯高于蛋白含量,蛋白含量為0moL/L NaCl>0.5moL/L NaCl>1.0moL/L NaCl>1.5moL/L NaCl,總糖含量為0.5moL/L NaCl>0moL/L NaCl>1.5 moL/L NaCl >1.0moL/L NaCl,其中以0.5moL/L NaCl溶液的浸提液中總糖與蛋白含量均為最高,分別可達到2.63%和0.94%。

2.2不同料液比對糖蛋白提取效果的影響

采用0.5moL/L NaCl溶液為浸提劑,比較不同的料液比對其提取效果的影響,結果見圖2。隨著料液比的增大,浸提液中總糖含量與可溶性蛋白含量均先上升后下降,在1∶10料液比中達到最大,分別達到3.92%和0.62%。

2.3不同溫度對糖蛋白提取效果的影響

以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,分別在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃條件下浸提,比較不同溫度對糖蛋白提取的影響,結果見圖3。隨著溫度的升高浸提液中的蛋白含量呈上升趨勢;而總糖含量呈先上升后下降趨勢,在70℃時含量最高。考慮到在高溫條件下浸提液中變性蛋白的含量增多,因此選擇浸液中總糖含量最高時的溫度70℃作為提取溫度。

2.4不同浸提時間對糖蛋白提取效果的影響

以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,在70℃條件下分別浸提30min、60min、90min、120min,比較不同浸提時間對糖蛋白提取效果的影響,結果見圖4。隨著浸提時間的延長,浸提液中總糖含量明顯高于蛋白含量,在90min時分別為1.71%和1.12%。

2.5正交試驗設計與結果

在單因素試驗結果的基礎上,以鹽濃度、料液比、浸提溫度與時間為4因素,設計正交試驗表(見表1);以浸提液中總糖與總蛋白含量為指標檢測糖蛋白的提取效果,結果見表2。

通過R可知4個因素中對波紋巴非蛤中糖蛋白的提取率影響大小次序為:C>A>B>D,最佳的提取條件的水平組合為A2B3C3D2,即:采用0.5moL/L NaCl溶液為浸提劑,料液比1∶12, 75℃浸提90min。

2.6乙醇沉淀分離

將95%乙醇在攪拌下緩慢加入濃縮液中,使乙醇終濃度分別至50%、60%、70%、80%,結果見圖5。當乙醇終濃度為60%時得到的糖蛋白中的總糖含量、蛋白含量和得率均達到最大,分別為38.3%、17.1%和1.64%。

3結論

波紋巴非蛤糖蛋白的分離提取工藝條件為:采用0.5 moL/L NaCl溶液為浸提劑,料液比1∶12,75℃浸提90min。浸提液經透析脫鹽,60%的乙醇終濃度沉淀得波紋巴非蛤糖蛋白,得率為1.64%,總糖與可溶性蛋白含量分別為38.3%和17.1%。

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