ERK通路影響惡性黑色素瘤細胞周期的機制

李厚勇 周 梁 田 潔

[摘要] 目的 研究ERK信號通路對惡性黑色素瘤細胞周期的影響及其機制。方法 選用持續活化的ERK細胞株A-375,用MEK抑制劑PD98059阻斷ERK信號通路,觀察細胞生長曲線并用MTT法觀察細胞增殖,用Western蛋白印跡法檢測活化的ERK和細胞周期蛋白Cycline D1的表達,用流式細胞儀檢測細胞周期。結果ERK信號通路阻斷后,細胞周期蛋白Cyclin D1無表達,G0-1期細胞所占比例明顯增加(P<0.01),S期細胞所占比例明顯降低(P<0.01)。結論 ERK信號通路阻斷后,細胞阻滯于G0-1期。其機制與細胞周期蛋白Cyclin D1的合成抑制有關。

[關鍵詞] 惡性黑色素瘤;ERK;細胞周期;細胞周期素D1

[中圖分類號] R364.7[文獻標識碼] A[文章編號] 1004-8650(2009)12-033-04

目前研究發現皮膚惡性黑色瘤中存在細胞外調節蛋白激酶(extra cellular regulated protein kinase ERK)的持續活化,其所占比率為78.5%(8),而ERK信號通路是信號從細胞表面傳導到細胞核內部的重要傳遞者,參與了正常細胞的增殖、轉化、分化、死亡過程,其在不同細胞中的作用有所不同。在正常細胞中,其活化與細胞外信號刺激有關。那么ERK的持續活化在惡性黑色素瘤細胞起何作用,其作用機制又如何呢?本實驗用ERK信號通路阻斷劑PD98059阻斷惡性黑色素瘤細胞株A-375中ERK的活化,觀察黑色素瘤細胞增殖和細胞周期的變化,擬對上述問題進行初步研究。

1材料與方法

1.1惡性黑色素瘤細胞株A-375來源于中國科學院上海分院細胞所。

1.2試劑與儀器

1.2.1主要試劑:PD98059(Cayman 公司),以DMSO溶解,PBS稀釋,兔抗人Cycline D1抗體(Cell Signaling technology 公司),DMEM培養液、胎牛血清(fetal bovine serumFBS)、胰蛋白酶(均為GIBCO公司)。Propidium iodide (PI),噻唑藍(MTT)。

1.2.2主要儀器:COULTER Epics XL 流式細胞儀(COULTER公司),相差顯微鏡(Leica 公司),BIO-RAD model 680 microplate READER 酶標儀(BIO-RAD公司)。

1.2方法

細胞生長曲線:用惡性黑色素瘤細胞株A-375以6X104個細胞/孔的密度接種于24孔板,培養液為含10%FBS、青鏈霉素雙抗的DMEM,24小時后實驗組培養液換成10%FBS、50μMPD98059、青鏈霉素雙抗的DMEM,對照組培養液不變?！?br>