四物膠囊水提工藝優(yōu)化研究

(安徽中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，安徽 蕪湖 241000)

四物膠囊是由熟地黃、當(dāng)歸、白芍藥、川芎4味中藥組成，具有調(diào)經(jīng)養(yǎng)血功能，用于營(yíng)血虛弱，月經(jīng)不調(diào)。早在《仙授理傷續(xù)斷秘方》中就將其方稱為“補(bǔ)血之專方，調(diào)經(jīng)之良劑”。方中白芍味苦、酸，性涼，入肝脾二經(jīng)，有養(yǎng)血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗之功效[1-3]。傳統(tǒng)提取工藝參照“四物合劑”的提取方法，制備較為繁瑣，因此，我們?cè)趨⒄赵に嚨幕A(chǔ)上對(duì)水提取工藝中加水倍數(shù)和煎煮時(shí)間進(jìn)行了正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以干膏重量和芍藥苷作為指標(biāo)綜合考慮來(lái)選擇處方的最佳提取工藝，報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

儀器：LC-10AD高效液相色譜儀，SPD-10A(SHIMADZU)紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器，LC-10AD(SHIMADZU) LIOUID CHROMATOGRAPH，HW-2000色譜工作站(SHIMADZU)；HT-230A柱溫箱(COLUMN HEATER)；C-21色譜數(shù)據(jù)采集單位；島津UV-2401紫外掃描儀；ELECTRONIC BABANCE(AY220，SHIMADZU CORPORATION)；Mettler M3電子天平(精度為0.001 mg)；Mettler AE100電子天平(精度為0.0001 g)；DZF-6050型真空干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)。藥材：所用藥材均購(gòu)于安徽亳州藥材市場(chǎng)；芍藥苷對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)：110736-200526)；乙腈為色譜純，水為二次重蒸水處方：熟地黃250 g，當(dāng)歸250 g，白芍藥250 g，川芎250 g。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 工藝條件的選擇 分別稱取處方量藥材，共9份。分別加入8、10、12倍水煎煮2次，每次分別為1、2、3 h，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮，減壓(溫度60℃±2℃，壓力0.07～0.095 mPa)干燥得干浸膏，稱重，結(jié)果見(jiàn)表1、表2、表3。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品各約0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超聲提取20 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液。

表1 因素水平表

表2 L9(34)試驗(yàn)設(shè)計(jì)和計(jì)算表

表3 方差分析表

2.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 根據(jù)芍藥苷對(duì)照品的紫外掃描圖譜，并結(jié)合所查閱的相關(guān)文獻(xiàn)，選擇芍藥苷的檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm[4-5]。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Hypersil-C18(200 mm×4.6 mm)，流動(dòng)相：乙腈∶0.1%磷酸(14∶86)，流速：1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品1.67 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取2、5、10、12、15 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果，回歸方程為Y=786.25X+7.498,r=0.9999(n=5)，且在進(jìn)樣量為0.134～1.002 μg范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述芍藥苷對(duì)照品溶液10 μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，依法測(cè)定芍藥苷峰面積，RSD為0.68%(n=5)，表明儀器的精密度符合要求。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取上述對(duì)照品溶液和供試品液，置于室溫下，分別于第0，2，6，8，12 h吸取10 μL測(cè)定。結(jié)果表明，對(duì)照品和供試品測(cè)定溶液在12 h內(nèi)峰面積值基本一致，對(duì)照品溶液的RSD為0.37%(n=5)，供試品溶液的RSD為0.85%(n=5)，說(shuō)明對(duì)照品和供試品測(cè)定溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 測(cè)定方法 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，按照上述色譜條件注入液相色譜儀中，記錄峰面積，數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

3 討論

3.1 原“四物合劑”的制備工藝中只明確了白芍、熟地黃與川芎、當(dāng)歸的水蒸氣蒸餾后的殘?jiān)逯蟮奶崛〈螖?shù)為3次，甚為費(fèi)時(shí)且不經(jīng)濟(jì)。初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示提取2次即能達(dá)到最好的提取效果。因此，我們?cè)诒３衷泄に嚐o(wú)質(zhì)量改變的基礎(chǔ)上，對(duì)原提取工藝進(jìn)行了細(xì)化研究，正交實(shí)驗(yàn)考察了藥材提取的時(shí)間，水的不同用量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。并且在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了芍藥苷的HPLC檢測(cè)作為定性指標(biāo)，使其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較四物合劑有了較大提高，滿足了安全有效，質(zhì)量可控的要求。

3.2 方差分析結(jié)果可以看出，提取時(shí)間(A因素)對(duì)正交試驗(yàn)的結(jié)果影響較大，而水的用量影響不是很顯著。且使用10倍量的水，煎煮2 h芍藥苷得量及干膏得量均較大，所以，選擇最佳提取工藝為A2B2。即提取工藝最終是煎煮提取2次，每次用10倍量的水，煎煮2 h為最佳提取工藝。

3.3 芍藥苷的含量測(cè)定方法，我們?cè)趨⒄账幍湟?guī)定的基礎(chǔ)上，優(yōu)化出符合本提取工藝的高效液相色譜條件[6-7]。

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