安祖花試管苗工廠化生產(chǎn)技術的研究

郝硯英 袁愛民

摘要:以進口安祖花“火焰“的芽為外植體進行了安祖花試管苗工廠化生產(chǎn)技術的研究。結果表明:安祖花芽誘導的最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L,啟動快,而且愈傷組織的質量好。誘導培養(yǎng)基中加入2,4-D比單一采用NAA效果好。最適的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,增值系數(shù)達4倍以上,且芽分化率高,生長健壯。使用經(jīng)消毒的進口基質且移栽后噴施0.1%多菌靈,可以有效防止安祖花試管苗假植期病菌的侵染,使移栽成活率達到95%以上。

關鍵詞:安祖花;組織培養(yǎng);工廠化生產(chǎn)

中圖分類號:S682.1+4文獻標識碼:ADOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.04.005

Study on the Technology Of Anthrium andraeanum Lind Test-tube Plantlet Commercial Process

HAO Yan-ying1, YUAN Ai-min2

(1.Tianjin Park of Municipal Garden Bureau, Tianjin 300112, China; 2.Tianjin Honggang Horticulture Company, Tianjin 300402, China)

Abstract: Study on the technology of imported Anthrium andraeanum Lind “Dakota”factory producing with its bud as explant has been carried out. The results indicated that the optimal medium for bud induction was MS+6-BA1.0 mg/L +NAA0.1 mg/L +2,4-D 0.1 mg/L.Combined with 2,4-D was much better than NAA. The favorable proliferation medium was MS+6-BA1.0 mg/L +NAA0.1 mg/L which its proliferation rate was more than 4. It could prevent pathogen invasion during anthrium test-tube plantlet temporary planting by using disinfectant imported medium and spraying 0.1% carbendazol, and the transplanted survival rate was more than 95%.

Key words: Anthrium andraeanum Lind; tissue culture;commercial process

安祖花(Anthurium andraeanum Lind)是天南星科花燭屬多年生常綠植物,葉革質光亮,單花頂生,佛焰苞直立開展,肉穗花序,花期長達1個半月左右,為國內外著名的觀賞花卉。利用常規(guī)的播種、分株法繁殖火鶴,繁殖率極低,播種繁殖所需時間長,且易產(chǎn)生變異。采用組織培養(yǎng)方法可以大大提高繁殖系數(shù),短時間內就可以生產(chǎn)出大量的種苗,滿足市場需求。自1974年Pierik首次離體培養(yǎng)紅掌取得成功以來[1],國內外對紅掌進行組培快繁的報道已有不少[2-6],但由于所采用的外植體和培養(yǎng)方法不同,所得結果很不一致,種苗質量也很不穩(wěn)定。筆者以安祖花品種的莖尖為外植體進行了安祖花試管苗工廠化生產(chǎn)技術的研究,獲得了大量質量穩(wěn)定的種苗。

1材料和方法

1.1材料

以天津花卉示范中心引進的進口安祖花品種“火焰”的莖尖為試材。

1.2方法

取安祖花“火焰”的莖尖,用自來水沖洗干凈,在無菌超凈臺用75%的酒精表面處理30 s,0.1%的升汞消毒10 min,無菌水沖洗3~4次,接種于不同誘導培養(yǎng)基上(表1)誘導愈傷組織,愈傷組織在不同繼代培養(yǎng)基上(表2)進行增殖培養(yǎng)及芽分化,當芽長到1~2 cm時切下,用自來水沖洗干凈后,在溫室內根據(jù)試管苗的大小分別栽于200穴的育苗穴盤內,使用經(jīng)消毒的進口基質,移栽后噴施0.1%的廣譜性殺菌劑多菌靈。待試管苗移栽成活后,進行正常養(yǎng)護。

2結果與分析

2.1安祖花組織培養(yǎng)技術的研究

2.1.1誘導培養(yǎng)基的篩選“火焰”的莖尖在無菌超凈臺上用0.1%升汞消毒后,切取小于0.2 cm的生長點接種于不同的誘導培養(yǎng)基上進行誘導培養(yǎng)。

從1表中可以看出,以MS+NAA0.1～0.2 mg/L為基本培養(yǎng)基,添加2,4-D 0.1～0.2 mg/L能較好地促進安祖花莖尖愈傷組織的形成,比不添加2,4-D的組合提早14~19 d。表明適當加入低濃度的2,4-D有利于提高愈傷組織誘導率。

2.1.2繼代培養(yǎng)基的篩選將誘導出的愈傷組織接種在不同的繼代培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng),結果見表2。

從表2中可以看出,安祖花愈傷組織在MS+6BA0.5~2 mg/L +NAA0.1~0.2 mg/L各組合的培養(yǎng)基中均能獲得較好的增殖率,增殖率在2~6倍之間;芽分化率也能達到3.6%~5.8%,但綜合愈傷組織增殖和芽分化的速度和小苗的質量效果來看,安祖花品種“火焰”的繼代增殖培養(yǎng)基以MS+6-BA1.0 mg/L +NAA0.1 mg/L為最好。

2.2安祖花試管苗移栽技術的研究

安祖花試管苗在培養(yǎng)瓶內完全處于異養(yǎng)、無菌狀態(tài)。當它們移出培養(yǎng)瓶種植時,不僅失去了營養(yǎng)的支持,而且生長環(huán)境也發(fā)生了不利于其生長的巨大變化。如果管理不當,很容易造成試管苗的大量死亡,使組培苗的生產(chǎn)功虧一簣。

2.2.1栽培基質的處理為了提高安祖花試管苗移栽成活率,移栽基質在使用前應進行徹底的消毒處理。移栽基質的消毒一般可以采用蒸汽消毒、密閉熏蒸和其他如藥劑噴灑等方法,消毒徹底,試管苗成活率高。但是,蒸汽消毒易受設備等條件的限制且成本高。因此,我們采用不同殺菌劑和殺蟲劑對基質進行了消毒,并對不同消毒方法對基質消毒的效果進行了比較。

從表3可以看出,3種消毒方法都可以對移栽基質進行徹底地消毒,有效地殺滅土壤中的各種病蟲害。第1種消毒方法對基質消毒時,工作量大,周期較長,而且如通風不好,易產(chǎn)生藥害。第2、3種消毒方法工作量較小,周期較短,消毒效果好,使用方便。比較而言,第3種消毒方法,即用500倍多菌靈配合500倍敵敵畏對移栽基質進行消毒效果好,更經(jīng)濟環(huán)保。

2.2.2試管苗移栽環(huán)境條件的控制由于培養(yǎng)瓶中相對濕度大,試管苗莖葉表面幾乎無防止水分蒸發(fā)的角質層等,移栽后植株葉面蒸騰很大,難以保持植株的水分平衡。因此,移栽前期必須提高空氣的相對濕度,以減少葉面蒸騰,使試管苗逐漸適應外界的環(huán)境條件。我們針對安祖花試管苗移栽的環(huán)境條件進行的試驗結果可出看出,安祖花試管苗移栽后只有保持環(huán)境空氣相對濕度在80%以上,并加強管理,試管苗的移栽成活率才可以達到95%以上。安祖花試管苗移栽后要由異養(yǎng)過渡到自養(yǎng),出瓶后需靠光合作用制造的營養(yǎng)來維持試管苗的生長。如果光線太弱,試管苗出瓶后會由于不能進行光合作用制造養(yǎng)分而難以維持生長,必然會影響到試管苗的移栽成活率;但光線也不能太強,否則會使葉綠素受到破壞,而且過強的光線會加大蒸騰度,使試管苗水分平衡的矛盾更加尖銳。經(jīng)反復試驗得出安祖花試管苗移栽適宜的光照強度以6 000~10 000 lx為宜。

2.2.3噴施殺菌劑對試管苗移栽成活率的影響 在超凈工作臺上切取高1~2 cm,具有3~4片展開葉的安祖花試管苗,用20~30 ℃的自來水洗凈附在植株上的培養(yǎng)基。根據(jù)試管苗的大小分別移栽到不同的200穴的穴盤中。栽后噴施1 000倍的50%的多菌靈藥液,結果見表4。

試管苗出瓶移栽是實現(xiàn)從無菌環(huán)境到自然環(huán)境的過渡。此時由于葉片氣孔張開、莖葉表面缺少角質層保護,抵抗能力弱,極容易受到病菌的侵染。由表4可以看出,試管苗移栽后噴施廣譜性殺菌劑可以有效地保護試管苗,防止病菌的侵染,大幅度地提高試管苗的移栽成活率。

2.2.4肥水管理試管苗移栽1個月后,不斷生出新根,此時可以開始澆施0.1%的NPK復合液肥。在18~30 ℃,相對濕度70%以上的溫室內,經(jīng)6~7個月的栽培,移栽苗可以達到株高8~10 cm,8~10片葉,根系長滿穴盤。此時可開始定植或種苗銷售。

2.3試管苗繼代周期的研究

從2004—2007年,經(jīng)近4年的觀察總結,我們發(fā)現(xiàn),安祖花外植體誘導成功,經(jīng)繼代培養(yǎng)15次以上,由于外源植物激素累積等因素的影響,愈傷組織逐漸衰老,導致增殖率、芽苗分化率都明顯降低。另外,由于內生菌的原因,試管苗的細菌污染率也明顯增加。據(jù)調查,愈傷組織繼代15次以上的內生菌污染率可達近30%。工廠化生產(chǎn)時,需逐漸淘汰分化弱、生長勢差和被細菌污染的愈傷組織,否則繼續(xù)進行繼代培養(yǎng)會增加試管苗的畸變,降低試管苗的質量。因此,要實現(xiàn)工廠化周年生產(chǎn)安祖花組培苗,必須不斷進行外植體的誘導,外植體的誘導量可以根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模而定。

3結論

本試驗的結果表明,安祖花芽愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1 mg/L+NAA0.1 mg/L+2,4-D0.1 mg/L;最適的增殖與分化培養(yǎng)基為MS+6-BA1 mg/L+NAA0.1 mg/L。使用經(jīng)消毒的進口基質,且移栽后噴施0.1%的多菌靈,移栽成活率達到95%以上。天津園林花圃采用本試驗的方法已經(jīng)實現(xiàn)了安祖花組培苗工廠化生產(chǎn),每年生產(chǎn)近百萬株。

參考文獻:

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