豬繁殖與呼吸綜合征病毒ＯＲＦ５基因的克隆與原核表達(dá)
2009-01-01 00:00:00梁望旺伍銳楊克禮劉澤熊忠良段正贏鄧均華唐文娟余愛冬徐滌平
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2009年5期
摘要：采用RT—PCR方法擴(kuò)增了豬繁殖與呼吸綜合征病毒臨床分離株(HBKM2)的ORF5全基因，并進(jìn)行了測(cè)序分析，根據(jù)ORF5的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，進(jìn)一步擴(kuò)增了截去N端信號(hào)肽序列的ORF5(nsORF5)．并將其克隆到pGEX—KG原核表達(dá)載體，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pKG-ns5，經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定后，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，經(jīng)SDS—PAGE和Westem-blot分析表明。克隆的nsORF5基因與谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GsT)基因獲得了高效融合表達(dá)，表達(dá)的融合蛋白GST-nsGP5分子量約為43kD．并具有反應(yīng)活性，這為進(jìn)一步研究PRRSV GP5蛋白的功能反新型疫苗、血清學(xué)診斷方法的研制奠定了基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRsV)；囊膜糖蛋白(GP5)；克隆；原核表達(dá)
