RP-HPLC測定蘭索拉唑制劑中主藥及有關物質的含量

劉丹花 高青

【摘要】目的 為更好地測定蘭索拉唑制劑中主藥及有關物質含量，可采用RP-HPLC法。方法 ShimpackC18（5μm，250 mm×4.6 mm）為色譜柱、甲醇-水-三乙胺-磷酸為流動相、UV 284 nm為檢測波長、1 mL·min- 1流速。結果 在16～320 μg·mL- 1（r= 0.9999）內蘭索拉唑所取得線性關系較為良好;蘭索拉唑制劑（注射劑）與蘭索拉唑腸溶片藥物的平均回收率與RSD指標參數分別為100.0%與1.08%、99.71%與1.03%。結論 RP-HPLC法的優勢主要體現在操作簡單、快速、準確、具有良好重現性，在注射用蘭索拉唑和腸溶片中有關物質與主藥含量的測定與分離中具有很高的應用價值，值得進行大力推廣與應用。

【關鍵詞】RP-HPLC測定;蘭索拉唑制劑;主藥;有關物質;含量

【中圖分類號】R917 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.5..02

蘭索拉唑是第二個質子泵抑制類抗潰瘍藥物，于1992年正式投放于法國市場，國內劑型主要有兩種，即膠囊劑、片劑，規格同樣有兩種即15、30 mg，注射用已經獲得FDA批準，但是國內市場上尚未進行銷售[1]。為確保國內臨床用藥的需求得到充分滿足，現對注射用與蘭索拉唑腸溶片進行了研究，為更好地控制其治療可使用蘭索拉唑含量測定高效液相色譜法，這種是一種操作簡單、準確、快速、重現性好的方法，能夠更好地分離、測定相關檢測對象物質組成、主藥的具體含量值。

1 儀器和試藥

儀器：本次試驗使用的設備包括高效液相色譜儀、紫外檢測器及工作站。

試藥：準備蘭索拉唑對照品與該藥物的注射劑、口服腸溶片，準備的甲醇包括色譜醇、分析醇。

2 方法與結果

2.1? 色譜條件和行為

（1）色譜柱：Shim-packC18;（2）流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸，1.0 ml/min-1;（3）檢測波長：284 nm;（4）進樣量20 uL。理論塔板數應大于1500，具體計算時需要嚴格按照蘭索拉唑峰。

2.2? 制備對照品、供試品溶液

（1）在棕色量瓶50ml放置精密稱取的40 mg對照品，溶解時可以加入甲醇，稀釋至刻度，充分搖勻后備用[2]。

（2）取5瓶注射用蘭索拉唑、10片去腸溶衣的蘭索拉唑腸溶片，將內容物傾出以后研細，進行準確的稱量，在25 mL棕色量瓶中放置，溶解時加入流動相并稀釋到刻度，充分搖勻后取精密量2 mL，同樣在25 mL棕色量瓶中放置，組委供試品1、2溶液備用;另外，關于不含主藥空白輔料的制備可分別根據注射用與腸溶片處方比例、制備工藝進行制備，關于空白供試品1、2溶液的制作可嚴格按照“供試品”項下方法。

2.3? 考察線性關系

對照品溶液分別精密程度0.5 mL、2.0 mL、、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、10.0 mL，在25 mL棕色量瓶中分別放置，稀釋到刻度，搖勻后便可得到相應系列溶度;然后分別注入液相色譜儀20 uL，以此將色譜圖詳細記錄下來，關于標準曲線地繪制分別取濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標。經結果可知，濃度與色譜峰面積在16～320 ug·mL-1內的線性關系滿足相關要求

2.4? 精密度試驗

從蘭索拉唑對照品中，取出一部分溶液進行進樣處理（重復），溶液取出量控制為20 uL，之后進行峰面積積分制測定時，要求嚴格根據上述色譜條件，精密度較好的條件為RSD=0.90%（n=6）[3]。

2.5? 重復性試驗

在同一批注射用、腸溶片中進行精密的稱取，關于溶液的制備需要嚴格按照供試品1、2方法，按照對照品同樣的方法進行操作，20 uL進樣，認真記錄色譜圖，其含量的計算需采用外標法，注射用藥物、口服用腸溶片兩種藥物的RSD分別為0.83%、0.90%，結合該結果說明該試驗效果好。

2.6? 輔料干擾試驗

待試驗條件最終確定以后，各取20 uL空白供試品1、2溶液，為記錄色譜圖可將液相色譜儀注入。研究發現，對于蘭索拉唑峰輔料不會產生干擾作用，主峰和雜之峰之間具有良好的分離度。

2.7? 最低檢測限

試驗條件確定后，在測定最低檢測限進時可根據信噪比（S/N=3）進行，結果可知：在50 ng·mL-1濃度、20ul進樣條件下，其峰信號是噪音的3倍，即最低檢測限=1 ng。

2.8? 回收率試驗

稱取10瓶處方量輔料，在研體缽中放置、搖勻后研細，然后取10瓶處方量的80%、100%、120%，加入，制作濃度不同的模擬樣品，即低、中、高，上述細粉取適量，放置在25 mL棕色量瓶中，通過加入適量甲醇并振蕩的方式來溶解主藥，稀釋到刻度后搖勻，作為供試品溶液;另外，在研缽中放置腸溶片10片處方量輔料，以下同注射用回收率試驗制備。取上述兩種溶液進樣各20 uL，關于項下條件的測定需嚴格根據含量進行，對回收率進行計算，以此注射用的平均回收率為100.0%、RSD為1.08%，腸溶片尾99.63%、1.03%[4]。

2.9? 測定樣品含量

對照溶液和供試品1、2溶液各取20 uL，注入液相色譜儀，將色譜圖記錄下來，關于其含量的計算可采用外標法，結果如下表1。

2.10? 檢測相關物質

精密稱取適量的注射用、腸溶片，在25 mL棕色量瓶中放置，稀釋溶解到刻度、溶解，當作供應品溶液;分別取1 mL，在100 mL棕色量瓶中放置參照量瓶刻度值進行溶液稀釋處理，待該項工作結束后可輕輕搖勻量瓶，于對照溶液中取出適量溶液，取出量控制為20 uL，使用液相色譜儀對這些溶液作以處理，在設備靈敏度符合檢查要求的情況下進行相關物質檢查，要求主成分峰峰高參考滿量程標準，為其20%、不超過25%，然后各稱取20 uL在液相色譜儀中注入，將色譜圖到保留主成分峰的3倍記錄下來。如果色譜圖中存在雜質峰，則需要對各雜質峰面積進行科學的量取，對有關物質量進行科學的計算，如上表1。

3 討 論

為有效分離蘭索拉唑和輔料，可通過HPLC建立的方式，二者之間的分離度不得小于1.5，具有較高的色譜柱效[5]。本品與色譜峰面積具有良好線性關系的濃度范圍為16～320 ug·mL-1，經含量測定所取得回收率較高，且重現性良好，輔料和有關物質均不會對其產生干擾，在臨床上所具有的可靠性、準確性與靈敏度較高，有助于提高相關制劑質量。

參考文獻

[1] 李嬌娜，李? ?丹，趙春杰.RP-HPLC法測定人血漿中蘭索拉唑腸溶片血藥濃度[J].藥物分析雜志，2009，29（03）：395-398.

[2] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].2017version.London：The Stationery Office，2017：1-968.

[3] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].2017 version.London：The Stationery Office，2017：1-968.

[4] 劉小均，羅軍波，李培海，等.RP-HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸多奈哌齊口腔崩解片中有關物質的含量[J].中國藥房，2015，26（12）：1702-1706.

[5] 余永華，馬敏康，楊仲杰，等.加校正因子的主成分自身對照法測定培哚普利片中有關物質的含量[J].中國現代應用藥學，2017，34（10）：1427-1431.