奶牛口蹄疫疫苗后海穴注射免疫效果試驗(yàn)

摘要：通過(guò)奶牛口蹄疫疫苗經(jīng)后海穴注射與其他免疫方式比較研究其免疫效果、應(yīng)激反應(yīng)，結(jié)果表明：后海穴注射組的抗體合格率均顯著高于肌肉注射組（P<0.05），說(shuō)明穴位注射免疫方式比常規(guī)肌肉注射方式更容易激發(fā)動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫保護(hù)力。后海穴注射的安全性高于肌肉注射，沒(méi)有發(fā)生嚴(yán)重應(yīng)激反應(yīng)病例，免疫前后每頭奶牛平均損失產(chǎn)奶量?jī)H1.5kg、1.7kg，顯著低于肌肉注射每頭奶牛平均損失奶量5.0kg的水平。由此可見(jiàn)，奶牛口蹄疫疫苗的后海穴注射的免疫效果好，應(yīng)激反應(yīng)低，明顯優(yōu)于肌肉注射方式。通過(guò)2次加強(qiáng)免疫的抗體合格率顯著高于1次注射（P<0.05），且2次加強(qiáng)免疫的抗體持續(xù)期在3個(gè)月以上，而1次注射僅能維持1~2個(gè)月的高抗體水平。建議奶牛口蹄疫免疫采用后海穴注射疫苗2mL，15d后加強(qiáng)免疫1次的方式進(jìn)行。

關(guān)鍵詞：后海穴；免疫預(yù)防；奶牛；口蹄疫

中圖分類號(hào)：S858.235.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007－273Ｘ（2008）11-0008-03

1材料方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物宜昌市夷陵區(qū)水府廟奶牛小區(qū)健康成年荷斯坦產(chǎn)奶牛65頭。

1.1.2試驗(yàn)疫苗牛口蹄疫O型滅活疫苗100mL/瓶（濃縮苗），中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)：5232021。

1.1.3試驗(yàn)試劑純化滅活口蹄疫診斷抗原，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性、陰性血清，稀釋液（PBS），由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)分組與疫苗接種①試驗(yàn)分組：選擇未接種口蹄疫疫苗的健康產(chǎn)奶牛65頭，分成4組：第1組（肌注，單次免疫）：產(chǎn)奶牛17頭，2005年9月22日單獨(dú)頸部肌肉注射口蹄疫疫苗3mL/頭。第2組（肌注，加強(qiáng)免疫）：產(chǎn)奶牛19頭，2005年9月22日單獨(dú)頸部肌肉注射口蹄疫疫苗3mL/頭，10月7日同樣部位注射口蹄疫疫苗3mL/頭。第3組（后海穴注射，單次免疫）：產(chǎn)奶牛14頭，2005年9月22日后海穴注射口蹄疫疫苗2mL/頭。第4組（后海穴注射，加強(qiáng)免疫）：產(chǎn)奶牛15頭，2005年9月22日后海穴注射口蹄疫疫苗2mL/頭，10月7日同樣部位注射口蹄疫疫苗2mL/頭（見(jiàn)表1）。②接種操作規(guī)范與注意事項(xiàng)：a.頸部肌肉注射：牛接種口蹄疫疫苗時(shí)使用4cm長(zhǎng)16號(hào)針頭，頸部三角區(qū)深層肌肉注射，用量為成牛每頭3mL。b.后海穴注射：注射時(shí)將尾巴拉起，找準(zhǔn)后海穴，用碘酊和酒精消毒，將4cm長(zhǎng)的16號(hào)針頭向前向上緩緩刺入3～5cm后注入疫苗。

注射疫苗注意事項(xiàng)：注射器和針頭應(yīng)嚴(yán)格消毒，盡量保證一畜一針頭；入針深度適中，確實(shí)注入肌肉內(nèi)。

1.2.2免疫反應(yīng)觀測(cè)①試驗(yàn)期間，安排專業(yè)獸醫(yī)人員記錄疫苗注射后過(guò)敏反應(yīng)癥狀、治療方案、轉(zhuǎn)歸、劃分應(yīng)激反應(yīng)類型，對(duì)嚴(yán)重應(yīng)激反應(yīng)用腎上腺素及時(shí)救治。輕度應(yīng)激反應(yīng)：奶牛食欲減退，產(chǎn)奶量下降，逐漸恢復(fù)。中度應(yīng)激反應(yīng)：注射疫苗后奶牛出現(xiàn)高熱、呼吸困難、流涎甚至突然倒地等癥狀。②稱量、記錄免疫注射前后1周即2005年9月15日至9月28日每日每組的產(chǎn)奶量，并計(jì)算出頭均日單產(chǎn)。

1.2.3血清采集將試驗(yàn)牛分別于9月22日、10月13日（第21天）、10月28日（第36天）、11月28日（第66天）、12月28日（第96天）頸靜脈采血2mL/頭，靜置分離血清0.5mL/頭待用。

1.3試驗(yàn)牛抗體效價(jià)測(cè)定

測(cè)定方法：本次試驗(yàn)牛口蹄疫抗體監(jiān)測(cè)均采用正向間接血凝試驗(yàn)[1]。

2結(jié)果與分析

2.1試驗(yàn)結(jié)果

抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

從表2可見(jiàn)：①用口蹄疫疫苗1次后海穴注射免疫（3組）與1次肌肉注射（1組）后21d抗體檢測(cè)顯示牛群抗體合格率分別為79%、35%，后海穴1次免疫后第36、66、96天抗體分別為93%、64%、36%，而肌肉注射疫苗后第36、66、96天試驗(yàn)組牛群抗體合格率分別為53%、24%、0。②從第2組、第4組的加強(qiáng)免疫后第21天的抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，后海穴加強(qiáng)免疫注射組（第4組）抗體合格率達(dá)到73%，而肌肉2次注射組（第2組）為32%。在加強(qiáng)免疫后第36、66、96天的抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，后海穴加強(qiáng)免疫注射組的抗體合格率分別100%、93%、73%，均高于肌肉2次注射組的63%、84%、58%，后海穴加強(qiáng)注射免疫方式比常規(guī)肌肉2次注射免疫方式的抗體合格率高，見(jiàn)圖1。

2.2后海穴免疫與常規(guī)肌肉免疫抗體消漲規(guī)律

口蹄疫疫苗1次后海穴注射免疫（第3組）與1次肌肉注射（第1組）的抗體合格率和免疫持續(xù)期顯著低于后海穴免疫組，經(jīng)差異顯著性檢驗(yàn)，差異顯著（P<0.05）。后海穴加強(qiáng)免疫注射組顯著高于肌肉2次注射組的抗體合格率，經(jīng)差異顯著性檢驗(yàn)，差異顯著（P<0.05）。奶牛口蹄疫疫苗無(wú)論是后海穴注射還是常規(guī)肌肉注射，進(jìn)行2次免疫3個(gè)月后仍能維持較高的抗體水平，即使是后海穴1次注射在免疫后3個(gè)月內(nèi)抗體水平高于常規(guī)肌肉2次注射，但3個(gè)月后，2次注射的抗體水平逐漸高于后海穴1次注射。試驗(yàn)表明：1次肌肉注射僅能維持1個(gè)月左右的高抗體水平，1次后海穴注射能維持3個(gè)月左右的高抗體水平，而后海穴和肌肉2次注射均能維持3個(gè)月以上的高抗體水平（見(jiàn)圖1）。

2.3后海穴免疫與常規(guī)肌肉免疫發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)分析

在疫苗注射過(guò)程中，幾乎所有牛在注射口蹄疫疫苗后出現(xiàn)產(chǎn)奶量下降、食欲減退等應(yīng)激反應(yīng)，在肌肉注射組（1組、2組）出現(xiàn)的中度應(yīng)激反應(yīng)數(shù)（3/36=8%），遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于后海穴注射組（0/29=0%），后海穴注射組都只出現(xiàn)了輕微應(yīng)激反應(yīng)，從免疫前后1周奶量損失比較，肌肉注射組7d損失奶量頭均5kg（1組）、5.1kg（2組），后海穴注射組注射后7d損失奶量頭均1.7kg（3組）、1.5kg（4組），比肌肉注射組少損失3.3~3.6kg/頭（見(jiàn)表3）。

從圖2可以看出，后海穴注射組的奶量減少在注射疫苗后1～2d，從第3天基本恢復(fù)正常，而肌肉注射組產(chǎn)量恢復(fù)要緩慢很多，差不多要7d左右才可恢復(fù)正常，可見(jiàn)后海穴注射優(yōu)于肌肉注射，免疫應(yīng)激反應(yīng)小。

2.4加強(qiáng)免疫與常規(guī)單次免疫抗體免疫效果分析

在初免后15d用相同劑量通過(guò)同一途徑加強(qiáng)免疫1次（試驗(yàn)中2、4組為加強(qiáng)免疫組），與常規(guī)單次免疫方式相比，在2免后21d能達(dá)到較高的抗體合格率（2組達(dá)到63%，4組達(dá)到100%），并且維持的時(shí)間長(zhǎng)，在加強(qiáng)免疫后96d時(shí)，2次注射的抗體合格率（2組為58%，4組為73%）明顯高于1次免疫（1組為0，3組僅為36%）的抗體合格率，后海穴1次免疫與常規(guī)肌肉2次免疫相比，在免疫后21d到常規(guī)肌肉加強(qiáng)免疫第51天這段時(shí)間，后海穴1次免疫的抗體合格率高于常規(guī)肌肉2次免疫，但在加強(qiáng)免疫51d后，后海穴免疫的抗體合格率迅速下降，到加強(qiáng)免疫96d時(shí)，已明顯低于常規(guī)肌肉2次免疫，可見(jiàn)2次加強(qiáng)免疫可以有效延長(zhǎng)有效抗體時(shí)間（1次免疫僅能維持1~2個(gè)月的有效抗體），2次免疫可使有效抗體延長(zhǎng)到3個(gè)月以上。

3小結(jié)與討論

3.1口蹄疫疫苗后海穴免疫注射與肌肉注射比較

口蹄疫疫苗后海穴注射免疫的抗體效價(jià)合格率顯著高于肌肉注射的抗體效價(jià)合格率，穴位注射更夠產(chǎn)生更好的免疫效果。而且后海穴注射后21d就能達(dá)到較高的抗體合格率，顯著早于肌肉注射，抗體持續(xù)期也較長(zhǎng)。驗(yàn)證了孟憲松的后海穴注苗有免疫增強(qiáng)作用的理論。后海穴注射免疫時(shí)，一是疫苗本身啟動(dòng)了免疫系統(tǒng)，二是穴位刺激亦激活了神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)[2]。當(dāng)神經(jīng)系統(tǒng)接受到穴位刺激傳來(lái)的信息時(shí)，通過(guò)神經(jīng)末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì)直接作用于免疫細(xì)胞膜表面的相應(yīng)受體而直接參與免疫調(diào)節(jié)作用。由于神經(jīng)系統(tǒng)參與了免疫調(diào)節(jié)，縮短了免疫系統(tǒng)對(duì)抗原的應(yīng)答時(shí)間，因而縮短穴位免疫時(shí)抗體產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)免疫的時(shí)間，后海穴免疫不僅可降低疫苗的免疫劑量（比常規(guī)肌肉少1mL），而且還可使機(jī)體提前產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)免疫力和增強(qiáng)弱抗原的免疫原性[3]，為奶牛口蹄疫疫苗注射提供了一種新的有效免疫方式，也為奶牛口蹄疫免疫降低了成本。

3.2穴位免疫與常規(guī)免疫應(yīng)激反應(yīng)比較

后海穴注射能顯著減輕奶牛口蹄疫疫苗免疫的應(yīng)激反應(yīng)，主要表現(xiàn)為后海穴免疫注射的安全性好，本試驗(yàn)中后海穴免疫注射組應(yīng)激反應(yīng)臨床癥狀顯著比肌肉注射組輕，沒(méi)有發(fā)生中度應(yīng)激反應(yīng)病例。而且后海穴免疫注射組應(yīng)激反應(yīng)引起的奶產(chǎn)量損失顯著比肌肉注射組少。這種應(yīng)激反應(yīng)主要是變態(tài)反應(yīng)和炎性反應(yīng)，反應(yīng)程度的輕重可能與后海穴注射降低疫苗劑量有關(guān)[4]，具體機(jī)理還需要進(jìn)一步深入研究。總之，后海穴免疫比肌肉注射安全性好，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

3.3加強(qiáng)免疫與常規(guī)單次免疫效果的比較

加強(qiáng)免疫優(yōu)于常規(guī)單次免疫效果。奶牛口蹄疫疫苗無(wú)論是后海穴注射還是常規(guī)肌肉注射，進(jìn)行2次免疫3個(gè)月后仍能維持較高的抗體水平，即使是后海穴1次注射在免疫后3個(gè)月內(nèi)抗體水平高于常規(guī)肌肉2次注射，但3個(gè)月后，2次注射的抗體水平逐漸高于后海穴1次注射[5]。試驗(yàn)表明：1次肌肉注射僅能維持1個(gè)月左右的高抗體水平，1次后海穴注射能維持3個(gè)月左右的高抗體水平，而后海穴和肌肉2次注射均能維持3個(gè)月以上的高抗體水平。

參考文獻(xiàn)：

［１］沈秋站，鄒勇．影響口蹄疫正向間接血凝試驗(yàn)因素的研究［Ｊ］．江西畜牧獸醫(yī)雜志，１９９８（６）：１２－１３．

［２］孟憲松．后海穴的臨床應(yīng)用與研究進(jìn)展［Ｃ］．全國(guó)獸醫(yī)針刺免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集，１９９３.１－７．

［３］蔣圣嬌，劉俊，朱亞萍．豬后海穴注射口蹄疫濃縮滅活苗的試驗(yàn)報(bào)告［Ｊ］．當(dāng)代畜牧，２００２（２）：８－９．

［４］曹海康，梁利雅．大面積注射口蹄疫滅活疫苗注意事項(xiàng)［Ｊ］．畜牧獸醫(yī)雜志，２００２，２１（４）：４５－４６．

［５］張?jiān)拭跫t軍．奶牛口蹄疫注苗免疫后的發(fā)病原因淺析［Ｊ］．中國(guó)奶牛，1999（6）:41-42.