高效液相色譜法測定新止咳合劑中甘草苷的含量

　　摘要；目的：建立高效液相色譜法測定新止咳合劑中甘草苷的含量。方法：采用Dikma鉆石C色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為乙睛-0.5％冰醋酸溶液(20：80)；檢測波長為276nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。結(jié)果：甘草苷進(jìn)樣量在0.02～1.0μg(r=O.99990)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.27％，RSD=0.67％(n=9)。結(jié)論：本法簡便、快速、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好；可作為新止咳合劑的質(zhì)量控制方法。
　　關(guān)鍵詞：甘草苷；高效液相色譜法；新止咳合劑；含量測定
　　中圖分類號(hào)：R927.2
　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349(2008)02-0035-02
　　
　　新止咳合劑由桔梗、陳皮、兒茶、甘草、法半夏等藥制成，具有止咳、祛痰的功效。為本院的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定含量測定方法。本文參考《中國藥典》2005年版，采用HPLC法測定甘草的主要成分——甘草苷的含量，作為質(zhì)量控制指標(biāo)，獲得滿意的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。
　　
　　1、儀器與藥品
　　
　　高效液相色譜儀(美國Agilent 1100系列儀)，包括自動(dòng)進(jìn)樣裝置、VWD可變紫外檢測器、柱溫箱等；METTLERAE240型電子分析天平。除高效液相色譜檢測所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。甘草苷對照品(批號(hào)為111610-200604，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)；新止咳合劑(由本院制劑室配制，批號(hào)：20070206、20070403、20070428)。
　　
　　2、方法與結(jié)果
　　
　　2、1色譜條件
　　色譜柱：Dikma鉆石C柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙睛-0.5％冰醋酸(20：80)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：276nm；進(jìn)樣量：10μl。理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算為7000。
　　
　　2、2溶液的制備
　　精密稱取甘草苷對照品(置五氧化二磷為干燥劑的干燥器中，減壓干燥36h)10.08mg，置于20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每lml中含甘草苷0.504mg的溶液(貯備液)，分別精密吸取溶液(貯備液)①0.1ml、②0.3ml、③0.5ml、④1ml、⑤3ml、⑥5ml；分別置于25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別得每1ml含①2.016μg，②6.048μg，③10.08μg，④20.16μg，⑤60.48μg，⑥100.8μg的對照品溶液。
　　取新止咳合劑10ml，用乙酸乙酯提取5次(20、20、10、10、10ml)，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
　　
　　2、3方法學(xué)考察
　　2、3、1標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍　 精密吸取甘草苷對照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各10μl，分別注入高效液相色譜儀測定。以甘草苷對照品含量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直線幾乎通過原點(diǎn)，所以采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測定。線性回歸方程為y=1541.84x+13.19737，r=0.99990，線性范圍為0.02～1.0μg。
　　2、3、2精密度試驗(yàn)
　　取同一甘草苷對照品溶液④10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，結(jié)果峰面積積分值分別為：324.6