高效液相色譜法測定山楂合劑中枸櫞酸的含量

　　摘要：目的：建立高效液相色譜法測定山楂合劑中枸櫞酸的含量。方法：采用Agilent C18色譜柱(ZORBAX SB－C18 4.6mm×250mm，5μm)；流動相為0.5％NHHPO水溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8)；檢測波長為210nm，流速為1.0mL／min，柱溫為25℃。結果：枸櫞酸進樣量在0.058～29.0μg(r=0.99999)范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好，平均加樣回收率為99.29％，RSD=0.56％(n=9)。結論：本法簡便、快速、專屬性強、重現(xiàn)性好；可作為山楂合劑的質(zhì)量控制方法。
　　關鍵詞：枸櫞酸；高效液相色譜法；山楂合劑；含量測定
　　中圖分類號：R285.5　文獻標識碼：A　文章編號：1007－2349(2008)03－0043－02
　　
　　山楂合劑是由山楂、烏梅、陳皮等藥制成，具有消食健胃、理氣健脾、安蛔的功效。質(zhì)量標準中沒有規(guī)定含量測定方法。本文根據(jù)《中國藥典》2005年版一部“山楂”和“烏梅”項下選擇枸櫞酸為質(zhì)量控制指標，采用HPLC法測定山楂與烏梅的主要成分——枸櫞酸的含量。獲得滿意的結果。
　　
　　1　儀器與藥品
　　
　　高效液相色譜儀(美國Agilent 1100系列儀)。包括自動進樣裝置、VWD可變紫外檢測器、柱溫箱等；METTLERAE240型電子分析天平。除高效液相色譜檢測所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。枸櫞酸對照品(CHEMSERVICE Lot：281－76A，純度99％，含1分子的結晶水[CHO·HO]，分子量為：210)；山楂合劑由本院制劑室配制(批號070523、070718、070722)。
　　
　　2　方法與結果
　　
　　2.1　色譜條件　色譜柱：Agilent C18色譜柱(Z()RBAX SB－C18 4.6mm×250mm，5pm)；流動相：0.5％NHHPO水溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8)；流速：1.0mL／min；柱溫：25℃；檢測波長：210nm；進樣量：5μl。理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算為5000。
　　2.2　溶液的制備　精密稱取枸櫞酸對照品64.08mg(實際含量＝64.8×99％×192÷210=58.0mg)，置10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中含枸櫞酸5.8mg的溶液(貯備液)，分別精密吸取溶液(貯備液)①0.01mL、②0.05mL、③0.1mL、④0.5mL、⑤1mL、⑥5mL；分別置5mL量瓶中，加水稀釋至刻度，分別得每1mL含①0.0116mg、②0.058mg、③0.116mg、④0.58mg、⑤1.16mg、⑥5.8mg的對照品溶液。取山楂合劑5mL，置25mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
　　2.3　方法學考察
　　2.3.1　標準曲線和線性范圍 精密吸取枸櫞酸對照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各5μL，分別注入高效液相色譜儀測定。以枸櫞酸對照品含量(μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，直線幾乎通過原點，所以采用外標一點法進行含量測定。線性回歸方程為Y=87.67X+5.45，r=0.99999，線性范圍為O.058～29.0μg。
　　2.3.2　精密度試驗：取同一枸櫞酸對照品溶液④5μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測定6次，結果峰面積積分值分別為：229.7922，225.4753，227.4164，228.3199，227.5747，225.7234；積分值平均為：227.38，RSD＝0.71％。結果表明儀器精密度較好。
　　2.3.3　穩(wěn)定性試驗　取同一供試品溶液(批號為070523)各5μl，分別于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色譜儀測定，結果供試品溶液峰面積積分值的RSD＝1.2％，表明在24h內(nèi)對照品和供試品的峰面積積分值穩(wěn)定，說明測定溶液配制好后，放置24h內(nèi)測定均可。
　　2.3.4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號的山楂合劑(批號：070523)，按供試品溶液的制備方法重復操作測定6次，結果平均含量為3.26mg／mL，RSD=1.16％。
　　2.3.5 回收率試驗　采用加樣回收法，取已知含量的同一批號(070523)山楂合劑(含量為：3.26mg／mL)適量，分別精密加入枸櫞酸對照品適量，按供試品溶液的制備及測定法操作。結果見表1。
　　2.3.6　陰性干擾試驗　照上述條件測定山楂合劑空白(不含山楂、烏梅藥材制成的陰性合劑)制劑，結果在枸櫞酸色譜峰相對應的保留時間處無吸收峰，說明處方中其它藥味對山楂、烏梅中的枸櫞酸測定無干擾。見圖1。
　　2.4　樣品含量測定　按供試品溶液的制備及測定法操作，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀測定，外標一點法計算。結果見表2。
　　
　　
　　
　　
　　3　討論
　　
　　枸櫞酸是山楂與烏梅中主要的活性成分之一，也是山楂合劑治療疾病的重要成分，故選擇該物質(zhì)作為考察指標。用枸櫞酸水溶液(1mg／mL)在190～370nm波長范圍內(nèi)進行掃描測定，結果在210nm波長處，有肩峰，所以選擇210nm為檢測波長。本法簡便、快速、專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為山楂合劑的質(zhì)量控制方