他克林對急性胰腺炎大鼠血清細胞因子的影響研究

【摘要】 目的 探討靜脈注射他克林對急性胰腺炎大鼠細胞因子的影響。方法 健康Wistar大鼠108只，隨機分為假手術組、對照組、他克林組各36只，分別測定三組動物模型建立成功后1 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h血清中TNF-α、 IL-6、IL-10的含量變化。結果 假手術組各細胞因子均處于較低水平，對照組較假手術組各個時段細胞因子水平都明顯升高（P＜0.05），而他克林組大鼠細胞因子TNF-α、IL-6在1 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h時也明顯較假手術組升高（P＜0.05），但是其升高幅度與對照組相比明顯降低(P＜0.05)。他克林組保護性細胞因子IL-10在發病初1小時有升高，與對照組相比P=0.933；而在12～72 h，IL-10升高明顯，并逐步達到一定高度，與對照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。結論 靜脈注射他克林能夠降低胰腺炎大鼠血清損傷性細胞因子TNF-α、IL-6的釋放，升高保護性細胞因子IL-10水平。

【關鍵詞】 膽堿能抗炎通路；細胞因子；急性胰腺炎

文章編號：1003-1383(2008)05-0523-03中圖分類號：R 392.12 文獻標識碼：A

The research on how tacrine affect the cytokine levelin laboratory rats with acute pancreatitis

WANG Jianchu1，PU Jian1，PAN Xiaoyan2，WEI Zhongheng1，LU Tao1，MA Yanfei1，WEI Bangning1，MA Rihai1

(1.Hepatobiliary Surgery Department，2.Digestive System Department，the Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities，Baise，Guangxi 533000，China)

【Abstract】 Objective To investigate how the cholinergic anti-inflammatory pathway influncing the cytokine level in laboratory rats with pancreatitis.

Methods 108 Wistar rats were randomly divided into sham group (SG)，control group (CG) and tacrine injection group(TG)，serum cytokines content variation ofTNF-α，IL-6，IL-10 in different period were determined.Results Serum concentrate of cytokines in SG keep a low level，but what in CG were higher than that in SG， which is signifficant statistically(P＜0.05).The concentrate of TNF-α，IL-6 in TG were higher than that in SG，in each period（P＜0.05）.But much lower than thatin CG (P＜0.05). Serum level of IL-10 in TG start rising in 1 hour，but it has no signifficance comparing to control group（P=0.933）.At 12~72h，the IL-10 level rised to a high level in TG，which was higher than in CG (P＜0.05).Con

clusion Tacrine intravenous injection could increased serum protective cytokine IL-10 level， but decreased injury cytokines TNF-α，IL-6 content in laboratory rats with pancreatitis.

【Key words】 cholingeric anti-inflammatory pathway；cytokine；acute pancreatitis

細胞因子在重癥急性胰腺炎（SAP）發病中起著重要的作用，抗細胞因子是治療SAP一個重要的方向。新近研究發現，神經系統和免疫系統之間存在著一定的關系，即膽堿能抗炎系統，神經系統通過膽堿能系統對機體的炎癥反應起著調控作用。本研究通過制作急性胰腺炎動物模型，靜脈注射膽堿酯酶抑制劑他克林（tacrine），從而觀察興奮膽堿能通路對急性胰腺炎大鼠血清中細胞因子水平影響。

材料和方法

1.實驗分組 Wistar大鼠108只，由右江民族醫學院動物中心提供，重300～350 g，根據實驗方法分為假手術組、對照組、他克林組各36只。假手術組行開腹髂內靜脈插管術，對照組制作胰腺炎動物模型并行髂內靜脈插管，他克林組行胰腺炎模型制作及髂內靜脈分離插管并經髂內靜脈注射他克林（1.5 mg#8226;kg-1#8226;次-1，每6小時注射一次）。

2.試劑和議器 大鼠TNF-α、IL-6、IL-10酶聯免疫吸附試劑盒由深圳精美公司提供；牛黃膽酸鈉由美國SIGMA公司提供；配超低溫冰箱等。

3.模型制作 胰腺炎模型：術前禁食12小時，自由飲水，用氯氨酮腹腔注射麻醉(100 mg/ kg)成功后，剪去腹部毛發，消毒，鋪無菌巾。經上腹部正中切口進入腹腔，提起胃、十二指腸，顯露出胰腺，確認膽胰管，在其近端和遠端均以動脈夾或一號絲線暫時結扎，將帶有四號針頭的1 ml 注射器沿十二指腸壁漿肌層穿刺距離膽胰管開口0.3～0.4 cm

處的膽管，注入4%的硫磺膽酸鈉0.1 ml/100 g，以0.2 ml/min 的速度注射畢，停留4 分鐘，去除結扎線，指壓穿刺點，查無漏膽，逐層關腹。

4.細胞因子測定 分別在模型制作完成后1 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h取各組大鼠髂內靜脈血，取上清液離心15分鐘后用酶聯免疫吸附法測定血清中TNF-α、IL-6、IL-10含量。

5.統計學分析 所有數據均以-±s表示，采用SPSS13.0統計軟件包，作重復測量方差分析。

結果

假手術組各細胞因子均處于較低水平，對照組較假手術組各個時段細胞因子水平都明顯升高，TNF-α和IL-6水平在48 h時達到高峰，72 h時均有所降低，而保護性細胞因子IL-10呈逐步增高走勢，在48～72小時時仍然維持在較高水平。他克林組大鼠，細胞因子TNF-α，IL-6在1 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h時明顯較假手術組升高（P＜0.05），但是其升高幅度與對照組相比較明顯降低，具有統計學意義（P＜0.05）。他克林組保護性細胞因子IL-10在發病初1小時有升高，但是與對照組相比，沒有統計學意義(P=0.933)； 而在12～72 h，IL-10升高明顯，并逐步達到一定高度，與對照組相比，其升高具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

討論

重癥急性胰腺炎（SAP）是臨床上常見的急癥，病情兇險，雖經多年努力，至今仍有高達20%～30%的病死率，是臨床上最棘手急癥之一。為了尋求治療SAP的有效辦法， 多年來醫學界學者在這一領域已經進行了大量的研究和探索，包括使用特異性的細胞因子拮抗劑和通過血液凈化清除過多細胞因子即抗細胞因子治療，目前已經找到許多細胞因子的特異性抑制物，包括細胞因子的可溶性受體、受體拮抗劑，各種細胞因子特異性抗體和其他一些藥物，在實驗研究中他們也確實能有效降低某種細胞因子的水平，減輕患者的癥狀和胰腺損傷，但單一的抗細胞因子治療對于SAP的療效并不確切，對于實驗動物模型生存率的改善仍存在爭議。現代臨床對于SAP的治療仍然處于被動地位，解決SAP的關鍵，就是調節炎癥反應平衡。膽堿能抗炎通路是通過減少損害性細胞因子的釋放而起作用的。目前國內外尚無膽堿能抗炎通路在急性胰腺炎治療作用方面的報告。本研究旨在通過膽堿能抗炎通路在急性胰腺炎大鼠治療作用研究，尋求一種治療急性胰腺炎有效手段。

他克林是膽堿酯酶抑制劑，靜脈應用可以提高膽堿能神經的功能。本研究通過靜脈注射他克林實現膽堿能抗炎通路在急性胰腺炎中的抗炎作用研究。研究發現對照組各個時段細胞因子水平都明顯升高， TNF-α和IL-6水平在48 h時達到高峰，72 h時均有所降低，而保護性細胞因子IL-10呈逐步增高走勢，在48～72 h時仍然維持在較高水平。而靜脈注射他克林組動物，細胞因子TNF-α，IL-6在1 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h時也明顯較假手術組升高，但是其升高幅度與對照組相比明顯降低（P＜0.05）。他克林組保護性細胞因子IL-10在發病初1 h有升高 (P=0.933)。而在12～72 h，IL-10升高明顯（P＜0.05），并逐步達到一定高度。本研究證實，靜脈注射他克林在大鼠實驗性急性胰腺炎中，可以有效降低TNF-α及IL-6等細胞因子的升高幅度，從而減輕細胞因子對機體的損害；保護性細胞因子IL-10在應用他克林后，水平較對照組明顯升高。

他克林是乙酰膽堿酯酶抑制劑，可抑制乙酰膽堿水解，提高腦膽堿能神經元功能。電刺激迷走神經或應用膽堿脂酶抑制藥物或乙酰膽堿受體激動劑，可以抑制巨嗜細胞合成TNF-α，還有核轉錄因子NF-κb［1～3］。這些炎癥始動因子得到抑制，SAP細胞因子瀑布樣連鎖反應必然減輕或消失。本研究通過靜脈注射膽堿酯酶抑制劑他克林，發現能夠有效的降低胰腺炎大鼠發病初期各損害性細胞因子濃度，升高保護性細胞因子IL-10。本研究首次將膽堿能抗炎通路引進急性胰腺炎的治療，為急性胰腺炎這一主要由細胞因子介導的全身性疾病的治療提供了新的途徑。應用膽堿能抑制劑可以增強膽堿能神經元功能，在SAP初期能阻斷細胞因子的瀑布鏈樣反應，后續的細胞因子將預期減弱，保護性細胞因子IL-10水平升高，從而減少細胞因子對全身其他器官系統的損傷作用。

參考文獻

［1］Andersson J.The inflammatory reflex-introduction［J］.J Intern Med，2005，257(2):122-125.

［2］Wang H，Liao H，Ochani M，et al.Cholinergic agonists inhibit HMGB1 release and improve survival in experimental sepsis［J］.Nat Med，2004，10(11):1216-1221.

［3］Czura CJ，Friedman SG，Tracey KJ，et al.Neural inhibition of inflammation: the cholinergic anti-inflammatory pathway［J］.J Endotoxin Res，2003，9(6):409-413.

(收稿日期：2008-06-23 修回日期：22008-08-21)

(編輯：潘明志 英文審校：唐雄林)