高效液相色譜法及液－質(zhì)聯(lián)儀法在中藥鑒定中的應(yīng)用

中圖分類號：R927 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C 文章編號：1006-1533(2007)07-0312-02

中藥鑒定學(xué)是一門傳統(tǒng)而古老的學(xué)問，是隨著中醫(yī)理論的建立和發(fā)展而建立并不斷完善的一項技術(shù)。發(fā)展到20世紀(jì)50年代，逐步形成了四大鑒別法：性狀鑒定法、基源鑒定法、顯微鑒定法和理化鑒定法。中藥鑒定學(xué)已成為一門系統(tǒng)而完善的學(xué)科。近年，國家制定了中藥現(xiàn)代化發(fā)展規(guī)劃。為了保證中藥的質(zhì)量，各種現(xiàn)代的鑒定法越來越多地在中藥鑒定中被應(yīng)用。而高效液相色譜法（high perfomance liquid chromatography，HPLC）是理化鑒定法中應(yīng)用較為廣泛的一種。

HPLC具有快速、靈敏、分離效能高等優(yōu)點^［1］。在中藥鑒定中，采用HPLC法分離特征成分后，用紫外檢測器（UV）或質(zhì)譜檢測器（MS）進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析和定量分析，是全面評價質(zhì)量的有效方法。中國藥典（2000年版）一部中就有59種藥材和50種中成藥采用HPLC法進(jìn)行鑒定。而且還不斷有人用HPLC法對其它的中藥進(jìn)行鑒定和成分分析研究。其中主要涉及的研究在此作一介紹。

1 建立單味中藥的高效液相指紋圖譜（HPLC fengerprent spectrum）

2000年我國中藥指紋圖譜技術(shù)全面啟動。指紋圖譜能根據(jù)中醫(yī)用藥理論，從宏觀的角度完成對中藥的綜合分析和整體分析，表達(dá)產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性、均一性；有效地鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地；指導(dǎo)中藥種植符合GAP的要求。它是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一個飛躍，也是中藥實現(xiàn)國際化的關(guān)鍵技術(shù)之一^［2］。

余靜等^［3］通過對同一產(chǎn)地（龍江伊春南岔）10批刺五加樣品，采用HPLC-UV、HPLC-MS進(jìn)行分析，得到分離度和重現(xiàn)性均較好的刺五加藥材HPLC-UV及HPLC-MS指紋圖譜，并分別對水溶性成分指紋圖譜中5個色譜峰和脂溶性成分指紋圖譜中8個色譜峰進(jìn)行了初步定性。兩個指紋圖譜相互補(bǔ)充為刺五加的相關(guān)研究提供了較全面的數(shù)據(jù)。同時表明質(zhì)譜檢測器對UV檢測器是較好的補(bǔ)充。劉艷娥等^［4］通過對10批金銀花藥材樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜研究確定了它們有11個共有峰。王榮等^［5］在對甘肅地產(chǎn)大黃道地藥材的5批樣品及其不同用藥部位的HPLC研究中確定了7個特征峰，并且發(fā)現(xiàn)其中α值（α=Tri/Trs，Tri為各組分的出峰時間，Trs為內(nèi)參照峰的出峰時間）為0.12、0.13、0.28、0.67，它們在標(biāo)準(zhǔn)對照藥材中未標(biāo)出。由此認(rèn)為共有7個色譜峰是大黃藥材鑒定的有力依據(jù)。

對單味中藥的高效液相指紋圖譜的研究，不僅在基礎(chǔ)理論上為藥材質(zhì)量的評價做了大量而有效的工作，而且也為指紋圖譜理論在應(yīng)用領(lǐng)域中的開展提供了簡便易行的方法。李磊等^［6］在對丹參水溶性成分HPLC法研究過程中，發(fā)現(xiàn)正品丹參共有18個共有峰，與其他鼠尾草屬植物的指紋圖譜存在較大差異，并且采用歸一化數(shù)藥法處理HPLC指紋圖譜得到不同類別丹參的典型指紋條形碼圖。該條形碼圖簡單明了，能直觀、快捷地對不同等級和質(zhì)量的丹參做出評價，對不同來源及真?zhèn)蔚⒆龀鰷?zhǔn)確鑒別。

2 藥材中主要化學(xué)成分的指紋圖譜研究

對于部分應(yīng)用時間長、療效肯定、成分明確的藥材，通過研究其主要化學(xué)成分的HPLC指紋圖譜，從方法學(xué)的角度講，能夠使研究的方向更加明確，結(jié)果比較確定，能對藥材質(zhì)量做出更好的評價。陳志霞等^［7］在通過對化橘紅黃酮成分的HPLC法研究后，從不同品種和產(chǎn)地的10批樣品中得到30余個峰，其中共有峰20多個，并發(fā)現(xiàn)大部分光橘紅樣品在51.4 min有一個含量超過10%的峰，而毛橘紅則檢測到此峰或含量極低，此外，毛橘紅中的柚皮苷的含量均在70%以下，表明化州柚和柚主要有效部位黃酮類成分的HPLC指紋圖譜有明顯差別。馬翠英等^［8］對10批不同地區(qū)黃芩樣品采用溶劑系統(tǒng)梯度洗脫后，確定了14個共有峰的HPLC指紋圖譜。此外，張雯潔等^［9］還進(jìn)行了三七不同部位皂苷類成分的HPLC指紋圖譜研究，認(rèn)為三七不同部位中皂苷成分大體相同，并確定了17個特征峰。

3 應(yīng)用于相似藥材的鑒別及質(zhì)量評價

許多同科或同屬的藥材，由于相似的功效，在臨床上有時混用，或在藥材流通中滲偽。與此同時，某些資源匱乏、稀有的名貴藥材，也存在急需尋找替代品的問題，而上述問題的解決都需要通過有力的質(zhì)量控制和評價方法來解決，HPLC就是其中一種方法。李曉蒙等^［10］通過對5批水牛角和羚羊角樣品的HPLC法測定，發(fā)現(xiàn)羚羊角與水牛角氨基酸含量有明顯差異，前者含較高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸，而后者則是丙氨酸、頡氨酸的含量相對較高。兩者可以用HPLC法區(qū)分。張聰?shù)?sup>［11］對中國紅參和高麗紅參進(jìn)行了HPLC指紋圖譜比較研究，表明國產(chǎn)紅參和進(jìn)口高麗紅參的品質(zhì)十分接近。還有人對半野生與野生冬蟲夏草的化學(xué)成分進(jìn)行比較，認(rèn)為兩者存在明顯差異^［12］。

4 中藥制劑的HPLC指紋圖譜研究

中藥制劑是中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個重要部分，質(zhì)量控制是影響其全面發(fā)展和國際化的一個瓶頸。2002年國家食品藥品監(jiān)督管理局要求對中藥注射劑進(jìn)行指紋圖譜研究，而其他劑型的指紋圖譜也相繼有人開展了研究。苗愛軍^［13］通過對2個不同廠家生產(chǎn)的刺五加注射液的分析，建立其24個特征峰的HPLC指紋圖譜，并發(fā)現(xiàn)不同廠家的產(chǎn)品共有峰面積的比值有一定差異 ，認(rèn)為HPLC指紋特征圖譜可以快速區(qū)分不同的產(chǎn)品。而沈嘉等^［14］對不同工藝、不同原料制備的黃連解毒湯制品以及日本漢方黃連解毒湯劑用HPLC法分析，發(fā)現(xiàn)共有15～16個特征峰為共有峰，而不同生產(chǎn)工藝及原料制品的特征峰與內(nèi)標(biāo)峰的峰高比有顯著區(qū)別，認(rèn)為HPLC指紋圖譜可以量化地區(qū)分不同原料和生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的同處方復(fù)方中藥的質(zhì)量特征。

5 結(jié)語

隨著HPLC及HPLC-MS技術(shù)的逐步發(fā)展和完善，它們必將在中藥鑒定以及中藥材的種植、中藥炮制研究、中藥活性成分的分析、生產(chǎn)工藝規(guī)范與優(yōu)化、中藥及其制劑生產(chǎn)的質(zhì)量監(jiān)控等方面起到重要的作用，從而加快中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化的步伐。

參考文獻(xiàn)

1 許瑞庭.實用藥物分析化學(xué)［M］.第1版.杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1992：548.

2 楊義芳，蔡定建.中藥指紋圖譜研究概況［J］.中草藥， 2003，34，（6）：附2-附5.

3 余靜，李茜，沈文斌，等. 刺五加HPIC/UV/MS指紋圖譜研究［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報， 2003， 34（2）：148-150.

4 劉艷娥，吳致涵，吳玉田，等.金銀花藥材HPIC指紋圖譜［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2003，19（3）：161-164.

5 王榮，張強(qiáng)，賈正平，等. 色譜指紋技術(shù)在甘肅道地藥材大黃鑒定中的應(yīng)用［J］. 中藥材， 2003，26（7）：484-486.

6 李磊，黎先春，王小如. 丹參品質(zhì)鑒定和評價的HPIC指紋條形碼技術(shù)［J］.中草藥， 2003，34（7）：649-653.

7 陳志霞，林勵，林冬梅.化橘紅黃酮成分的HPIC指紋圖譜研究 ［J］.中草藥，2003，34（7）：657-661.

8 馬翠英，戴寶成，林瑞超.黃芩中4種黃酮成分的HPLC定量分析及其黃酮類成分的指紋圖譜研究［J］.藥物分析雜志， 2003，23（2）：83-86.

9 張雯潔，張斌華，李忠瓊.三七不同部位皂苷成分的HPLC的特征研究［J］.中藥材， 2003，26（3）：181-182.

10 李曉蒙，何新榮.水牛角與羚羊角的HPLC法鑒別［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報 ，2003，19 （2）：97-98.

11 楊義芳，蔡定建.中藥指紋圖譜研究概況［J］.中草藥，2003，34（6）：附2-附5.

12 陳仁江，尹定華.鐘國躍.半野生與野生冬蟲夏草化學(xué)成分的比較［J］.中藥材，2003，26（3）：163-165.

13 苗愛東，彭燕，胡輝，等.刺五加注射液HPLC指紋圖譜研究［J］.中藥材，2003，26（3）：195-198.

14 沈嘉，曹現(xiàn)峰，劉九飛.幾種黃連解毒湯的HPLC指紋圖譜研究［J］.中成藥，2003，25（6）：185-189.

(收稿日期：2007-03-29)