培哚普利對(duì)腎性高血壓大鼠心肌纖維化及轉(zhuǎn)化生長因子β₁的影響

摘要：目的 探討培哚普利對(duì)腎性高血壓大鼠心肌纖維化作用及對(duì)轉(zhuǎn)化生長因子-β₁表達(dá)影響。方法 建立雙腎一夾腎血管性高血壓(21＜1C)大鼠模型，將24只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、高血壓組、培哚普利組，術(shù)后4周末開始灌胃培哚普利片2mg/(kg·d)。共8周。測量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓、心臟重量／體重、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)、血管周圍膠原容積分?jǐn)?shù)(PVCA)及轉(zhuǎn)化生長因子β₁₁的表達(dá)。結(jié)果 和假手術(shù)組相比，高血壓組的收縮壓、心臟重量／體重、CVF及PVCA顯著增加(P＜0.01)，TGF-β₁表達(dá)上調(diào)(P＜0.01)。和高血壓組相比，培哚普利組心臟重量／體重、CVF、PVCA及TG-β₁的表達(dá)降低(P＜0.05)。結(jié)論 培哚普利可以減輕腎性高血壓大鼠心肌纖維化，其機(jī)制可能與下調(diào)TGF-β₁有關(guān)。

關(guān)鍵詞：心肌纖維化；轉(zhuǎn)化生長因子β₁；培哚普利

中圖分類號(hào)：R544.1 R255.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-1349(2007)12-1212-03

心臟是高血壓最常損害的靶器官之一，主要表現(xiàn)為左心室肥厚，組織學(xué)上即為左室重構(gòu)。心肌纖維化是高血壓左室重構(gòu)的主要表現(xiàn)之一，可引起心臟舒張功能減退、心肌僵硬度增加、心肌缺血和室性心律失常。因此，逆轉(zhuǎn)心肌纖維、改善心肌重構(gòu)是高血壓治療的重要目標(biāo)和熱點(diǎn)之一。在影響心肌纖維化的細(xì)胞因子中，轉(zhuǎn)化生長因子-β₁(TGF-β₁被證實(shí)與細(xì)胞外基質(zhì)積聚關(guān)系密切，是器官纖維化標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)通過觀察血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)培哚普利對(duì)腎血管性高血壓(RH)大鼠心肌的膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)，血管周圍膠原面積(PVCA)及TGF-β₁的影響，進(jìn)而探討其抗RH大鼠心肌纖維化作用及可能機(jī)制。

1 資料與方法

1．1 材料 健康清潔級(jí)wistar雄性大鼠24只，OlympusBX-15型光學(xué)顯微鏡及B1—2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)由山西醫(yī)科大學(xué)生理教研室提供。培哚普利片購于法國施維雅(天津)制藥有限公司。免疫組化試劑均購自Santa Cruz公司。

1．2 模型的制作及分組 Wistar雄性大鼠，體重(200±20)g，隨機(jī)分為假手術(shù)組、高血壓組及培哚晉利組，每組8只。采用雙腎一夾(2KIC)經(jīng)典造模法復(fù)制RH大鼠模型。用5％水合氯醛按100g體重1mL進(jìn)行腹腔內(nèi)注射麻醉，行腹正中切口切開腹壁，游離左腎動(dòng)脈并用內(nèi)徑為0.25mm銀夾鉗夾，使左腎動(dòng)脈部分狹窄，右側(cè)腎動(dòng)脈不觸及。假手術(shù)組方法相同，但不安置銀夾。術(shù)后4周末測定尾動(dòng)脈血壓，凡尾動(dòng)脈收縮壓高于20kPa者確定為高血壓形成。培哚普利組于4周末給予培哚普利2mg/(kg·d)灌胃，一次性給藥，假手術(shù)組和高血壓組給予等量的蒸餾水灌胃。給藥8周后測量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓，處死大鼠進(jìn)行其他指標(biāo)的檢測。

1．3 指標(biāo)檢測

1．3．1 心重指數(shù)測定 剔除筋膜等結(jié)締組織的心臟，洗凈，稱取全心臟濕重(8)，除以大鼠體重(kg)，為心重指數(shù)。

1．3．2 心肌膠原組織學(xué)測定(Van Gieson法) 石蠟切片常規(guī)蛻蠟至水，1％酸性品紅和0.5％的飽和苦味酸染色。在VG染色下，心肌細(xì)胞呈黃色，膠原呈紅色。采用BI-2000型醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，測量心肌CVF和PVCA。CVF：膠原面積／總面積。PVCA=小動(dòng)脈管腔周圍膠原面積／動(dòng)脈管腔面積。在光鏡下，任選取4個(gè)視野，以視野中所有膠原面積之和(不包括血管周圍膠原面積)除以心肌纖維和結(jié)締組織面積總和，得出CVF。每張心肌切片任選取4個(gè)壁內(nèi)小動(dòng)脈，計(jì)算PVCA。

1．3．3 免疫組織化學(xué)法(PV－6001法)及圖像分析法檢測TGF-β₁取石蠟切片常規(guī)脫蠟入水，3％H₂O₂處理10min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗，高壓修復(fù)2 min，PBS沖洗，滴加兔多抗IgG(濃縮型兔多抗1gG，工作抗體濃度為1:200)，4℃過夜，PBS沖洗。滴加山羊抗兔lgG抗體-HRP多聚體37℃恒溫箱孵育30min，PBS沖洗，DAB顯色液顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封固。同時(shí)磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。免疫組織化學(xué)圖像分析經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)灰度校正后隨機(jī)取5個(gè)視野(×400倍)，以平均灰度的大小表示抗原的含量，灰度越小，表示抗原含量越大。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用單因素方差分析，并用LSD法進(jìn)行兩兩比較。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 各組血壓及心重指數(shù)(見表1)

2．2 各組CVP，PVCA及TGF-β₁比較 VG染色比較：假手術(shù)組血管周圍膠原纖維呈淡紅色，非連續(xù)性分布；培哚普利組膠原纖維染色呈紅色，連續(xù)性分布；高血壓組膠原纖維染色呈深紅色，環(huán)狀分布。TGF-β₁免疫組化染色比較：假手術(shù)組心肌細(xì)胞漿僅見少量細(xì)小棕黃色顆粒狀物表達(dá)，散在分布，呈弱陽性；高血壓組心肌細(xì)胞漿表達(dá)明顯增強(qiáng)，可見較多棕黃色粗顆粒狀物表達(dá)，彌散分布于細(xì)胞漿內(nèi)；培哚普利組：心肌細(xì)胞漿可見中量細(xì)小棕黃色顆粒狀物表達(dá)，散在分布。培哚普利組CVF，PVCA及7GF-β₁顯著低于高血壓組，而高于假手術(shù)組。詳見表2。

3 討 論

心肌纖維化是指在心肌細(xì)胞外基質(zhì)中膠原纖維過量積聚、膠原含量顯著升高或膠原成分發(fā)生改變。心肌纖維化常見于高血壓、心肌梗死等病理生理狀況下，是機(jī)體對(duì)負(fù)荷、炎癥反應(yīng)或者心肌細(xì)胞壞死做出的一種適應(yīng)性反應(yīng)。本研究中，以心重指數(shù)反映心肌肥厚程度，以心臟膠原含量反映心肌纖維化程度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3組大鼠隨著血壓的升高，心重指數(shù)、CVF及PVCA也就越大，表明血壓越高，大鼠心肌纖維化程度和心功能損害越重，培哚普利能顯著降低RH大鼠的血壓。這與胡文蘭等研究結(jié)果相一致。

大量研究表明，群多普利、奎那普利、雷米普利及耐諾普利都能減輕高血壓和心力衰竭的膠原沉積。培哚普利為ACEI類藥物，主要藥理作用是阻止血管緊張素I轉(zhuǎn)換為血管緊張素Ⅱ(PingⅡ)，抑制了腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的激活，從而可抑制血管痙攣，有擴(kuò)張血管作用。可降低體循環(huán)陽力和心臟前后負(fù)荷，增加心臟排血量，改善泵血功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RH大鼠使用培哚普利灌胃8周后，培哚普利組大鼠心重指數(shù)、SBP、CVF及PVCA均顯著低于高血壓組，從組織病理分析，培哚普利能明顯減輕心肌小動(dòng)脈及心肌周圍膠原沉積，減少間質(zhì)膠原含量，因此，培哚普利能降低血壓、同時(shí)逆轉(zhuǎn)RH大鼠心肌纖維化和心室肥厚。

RAAS、內(nèi)皮素、TGF-β₁以及細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺等影響膠原合成和分解的因素都參與了高血壓心肌纖維化的形成過程。AngⅡ是引起心肌纖維化增加的最主要因素，其中AngⅡ致心肌纖維化的一個(gè)途徑就是調(diào)節(jié)TGF₁的表達(dá)。TGF_s是近年來發(fā)現(xiàn)的一組調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的多肽家族，在某些慢性炎癥疾病中，尤其是伴有纖維化發(fā)生者，TGF_s、表達(dá)可明顯增多，通過蛋白質(zhì)分離及cDNA克隆技術(shù)，目前已鑒定出5種不同類型的TGF₁，即tGF_1-5，在哺乳動(dòng)物分離出3種類型的異構(gòu)體TGF₁，TGF₂，TGF₃，其中TGF₁，是參與組織損傷修復(fù)的重要調(diào)節(jié)因子之一，可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，增加纖連蛋白、蛋白聚糖和膠原蛋白合成，阻滯基質(zhì)蛋白降解等途徑引起心肌纖維化。研究表明，在壓力負(fù)荷過高的大鼠模型中產(chǎn)生的心肌纖維化和舒張功能不全，TGF₁起著因果關(guān)系作用，并發(fā)現(xiàn)阻滯TGF₁真是抑制心肌纖維化一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。有研究顯示，培哚普利可以降低QZ大鼠的TGF₁表達(dá)。在本研究中，培哚普利組大鼠心重指數(shù)、NBP、CVF，PVCA及7GF₁均顯著低于商血壓組，但高于假手術(shù)組。提示培哚普利可抑制RH大鼠心肌纖維化和心肌TGF₁的表達(dá)，TGF₁，與心重指數(shù)、CVF及PVCA呈同向性變化，提示其抑制RH大鼠心肌纖維化可能與抑制TGF₁的表達(dá)有關(guān)。

培哚普利可以抑制RH大鼠心肌纖維化的進(jìn)展，其機(jī)制除降壓、抑制RAAS外還可能與抑制TGF₁的表達(dá)有關(guān)。

作者簡介：岳勝(1980—)，男，現(xiàn)為山西醫(yī)科大學(xué)在讀碩士研究生(郵編：030001)；李茹香，工作于山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院。

(本文編輯 郭懷印)