高效液相色譜法測定新止咳合劑中兒茶素的含量

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測定新止咳合劑中兒茶素含量的方法。方法：采用Dikma鉆石C₁₈色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為乙睛－0.2％磷酸溶液(8：92)；檢測波長為280nm，流速為1.0ml／min，柱溫為35℃。結果：兒茶素進樣量在0.0425～4.25μg(r=0.99999)范圍內與峰面積線性關系良好，平均加樣回收率為99.05％，RSD=0.72％(n=9)。結論：本法簡便、快速、專屬性強、重現性好；可作為新止咳合劑的質量控制方法。

關鍵詞：兒茶素；高效液相色譜法；新止咳合劑；含量測定

中圖分類號：R927．2 文獻標識碼：A

文章編號：1007－2349(2007)10－0037－02

新止咳合劑由桔梗、陳皮、兒茶、甘草、法半夏等藥制成，具有止咳、祛痰的功效。為本院的醫療機構制劑。質量標準中沒有規定含量測定方法。本文參考《中國藥典》2005年版，采用HPLC法測定兒茶的主要成分——兒茶素的含量，作為質量控制指標，獲得滿意的結果。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀(美國Agilem 1100系列儀)，包括自動進樣裝置、VWD可變紫外檢測器、柱溫箱等；METTLER AE240型電子分析天平。兒茶素對照品(批號為877－200001，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所)；新止咳合劑由本院制劑室配制(批號20070206、20070403、20070428)。除高效液相色譜檢測所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件 色譜柱：Dikma鉆石C₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙睛－0.2％磷酸(8：92)；流速：1.0ml／min；柱溫：35℃；檢測波長：280nm；進樣量：5μl。理論塔板數按兒茶素峰計算為7000。

2．2 溶液的制備 精密稱取兒茶素對照品(置五氧化二磷為干燥劑的干燥器中，減壓干燥36h)17.0mg，置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml中含兒茶素0.85mg的溶液(貯備液)，分別精密吸取溶液(貯備液)①0.1ml、②0.5ml、③1ml、④3ml、⑤5ml、⑥10ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別得每1ml含①8.5μg、②42.5μg、③85μg、④255μg、⑤425μg、⑥850μg的對照品溶液。

取新止咳合劑5ml，用乙酸乙酯提取5次，每次10ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至20ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2．3 方法學考察

2．3．1 標準曲線和線性范圍 精密吸取兒茶素對照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各5μl，分別注入高效液相色譜儀測定。以兒茶素對照品含量(μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，直線幾乎通過原點，所以采用外標一點法進行含量測定。線性回歸方程為Y=735.4X＋1.32，r=0.99999，線性范圍為0.0425～4.25μg。

2．3．2 精密度試驗 取同一兒茶素對照品溶液③5μl，注入液相色譜儀，連續測定6次，結果峰面積積分值分別為：319.2357，318.7571，319.1373，318.9312，319.1522，318.7950；積分值平均為：319.0，RSD=0.1％。結果表明儀器精密度較好。

2．3．3 穩定性試驗 取同一對照品溶液③和同一供試品溶液(批號為20070428)各5μl，分別于0，2，5，10，15，20，25h注入液相色譜儀測定，結果峰面積積分值的RSD=1.1％，表明在25h內對照品和供試品的峰面積積分值穩定，說明測定溶液配制好后，放置25h內測定均可。

2．3．4 重復性試驗 取同一批號的新止咳合劑(批號：20070428)，按供試品溶液的制備方法重復操作測定6次，結果平均含量為485μg／ml，RSD=1.02％。

2．3．5 回收率試驗 采用加樣回收法，取已知含量的同一批號(20070428)新止咳合劑(含量為：485μg／m1)適量，分別精密加入兒茶素對照品適量，按供試品溶液的制備及測定法操作。結果見表1。

2．3．6 陰性干擾試驗 照上述條件測定新止咳合劑空白(不含兒茶藥材制成的陰性合劑)制劑，結果在兒茶素色譜峰相對應的保留時間處無吸收峰，說明處方中其它藥味對兒茶中的兒茶素測定無干擾。見圖1。

2．4 樣品含量測定 按供試品溶液的制備及測定法操作，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀測定，外標一點法計算。結果見表2。

3 討論

兒茶素是兒茶中主要的活性成分之一，也是新止咳合劑治療疾病的重要成分，故選擇該物質作為考察指標。

測定時曾選用了《中國藥典》2005年版一部“兒茶”項下【含量測定】規定的流動相：0.04mol／L枸櫞酸溶液－N，N－二甲基甲酰胺一四氫呋喃(45：8：2)，但由于是復方制劑，兒茶素在約10就出峰，色譜分離不好。試驗中還發現，進樣量不能過大，最好在5～10μl之間，否則兒茶素峰容易出現拖尾或分叉現象。

本法簡便、快速、專屬性強、重現性好，可作為新止咳合劑的質量控制方法。