正交試驗(yàn)法優(yōu)選七君顆粒提取工藝

摘要：目的：以三七皂苷R1、人參皂苷Rgl的含量為指標(biāo)，研究七君顆粒中三七、人參等10味中藥的提取工藝。方法：采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，對(duì)七君顆粒水提取工藝進(jìn)行考察，用高效液相色譜法測(cè)定三七皂苷R1、人參皂苷Rgl含量。結(jié)果：加水量12倍，煎煮1次，煎煮時(shí)間每次90min，所得提取液中三七皂苷Rl、人參皂苷Rgl的含量高。結(jié)論：此工藝對(duì)三七皂苷R1、人參皂苷Rgl的含量的提取率高，穩(wěn)定性好，可作為七君顆粒的提取工藝。

關(guān)鍵詞：七君顆粒；三七皂苷R1；人參皂苷Rgl;提取；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007－2349(2007)09－0037－02

七君顆粒由三七、人參、金錢草等10味中藥組成，具有通絡(luò)滲濕，健脾化痰之功，臨床適用于痰濕瘀阻經(jīng)脈型高尿酸血癥。方中三七為君藥，有化瘀止血、活血定痛之功，現(xiàn)代研究表明。它具有止血與活血化瘀雙重作用。本文采用正交設(shè)計(jì)法，考察加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間及三者交互作用對(duì)提取效果的影響，以三七皂苷R1、人參皂苷Rgl的含量為指標(biāo)，確定七君顆粒中水提取部分最佳提取工藝。

1 儀器與材料

1．1 儀器美國(guó)Agilentll00系列色譜儀(配自動(dòng)進(jìn)樣裝置，柱溫箱)，色譜柱Agilent C₁₈ SB 4.6×250mm，5μm；柱溫：25℃；流速：100ml／min；FA1004型電子天平(上海天平儀器廠)，SJN－500型三效節(jié)能濃縮器(浙江甌海制藥機(jī)械廠)．煎藥器，量杯、量筒，盛藥器等。

1．2 材料無(wú)水乙醇、甲醇、三七皂苷R1對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所117045－200312供含量測(cè)定用)、人參皂苷Rgl(中國(guó)藥品生物制品檢定所0703－200221供含量測(cè)定用)，由云南省藥檢所提供；藥材購(gòu)自于云南省藥材公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2．1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)選擇影響水提效果的主要因素：加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間為考察對(duì)象，并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，每個(gè)因素確定不同的水平，用L_g(3⁴)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)因素水平安排。

2．2 提取工藝過(guò)程按處方量取三七、人參等藥，合計(jì)156g，以水先浸泡12h，分別按L_g(3⁴)正交試驗(yàn)進(jìn)行水煎煮提取，合并提取液濾過(guò)，濃縮并定容至100ml量瓶中，作為樣品液。

2．3 指標(biāo)測(cè)定方法

2．3．1 含量測(cè)定指標(biāo)三七皂苷Rl和人參皂苷Rgl。

2．3．2 方法采用高效液相色譜法。

2．3．3 供試品溶液的制備取本品25ml，置25ml量瓶中，加無(wú)水乙醇至刻度，混勻，放置使沉淀，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20ml，蒸至約6ml，通過(guò)D101型大孔吸附樹脂拄(直徑1.5cm，長(zhǎng)14cm)，用水100ml洗脫，棄取水洗脫液，再用20％乙醇25ml洗脫，棄取20％乙醇洗脫液，繼用80％乙醇100ml洗脫，收集80％乙醇洗脫液，水浴上蒸干，殘?jiān)眉状级哭D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，混勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2．3．4 對(duì)照品溶液的制備精密稱取三七皂苷R1對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所117045-200312供含量測(cè)定用)3.2mg和精密稱取人參皂苷Rgl(中國(guó)藥品生物制品檢定所0703-200221供含量測(cè)定用)12.0mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，混勻，得含三七皂苷R1 0.32mg/ml和含人參皂苷Rgl 1.2mg/ml的混合溶液。

2．3．5 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈一水(21:79)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為203cm。理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000。

2．3．6 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μl(對(duì)照品溶液5μl，供試品溶液10μl)，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣3次，三七皂苷R1的RSD＝0.59％，人參皂苷Rgl的RSD＝0.51％；理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計(jì)算，均在10000以上。

2．4 數(shù)據(jù)處理分別把三七皂苷R1、人參皂苷Rgl兩項(xiàng)含量最好的指標(biāo)定為100分，每項(xiàng)按比例進(jìn)行綜合評(píng)分，鑒于在本實(shí)驗(yàn)中，三七皂苷R1比人參皂苷Rgl重要，故權(quán)重系數(shù)分別取為0.7、0.3進(jìn)行加權(quán)求和，L_g(3⁴)計(jì)算結(jié)果。

2．5 結(jié)果分析從表2的R值可知，影響提取效果的因素順序?yàn)椋杭逯髸r(shí)間(c)＞加水量(A)＞煎煮次數(shù)(B)，經(jīng)表3的方差分析得出各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果均無(wú)顯著性影響。直觀分析結(jié)果表明較佳提取工藝條件為L(zhǎng)_g(3⁴)。結(jié)合成本考慮，該結(jié)果符合生產(chǎn)實(shí)際需要，故確定其提取工藝條件為L(zhǎng)_g(3⁴)即加水量為12倍，煎煮1次，煎煮時(shí)間為每次90min。

3 討論

方中君藥三七主要含皂甙類活性成分三七皂苷R1和人參皂苷Rgl等在水、乙醇中都具有較好的溶解性Ⅲ，考慮到成本及條件的限制，故本試驗(yàn)選擇水煎提取，高效液相色譜法測(cè)定三七皂苷R1、人參皂苷Rgl含量作為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的極差分析表明，七君顆粒在水提過(guò)程中，煎煮時(shí)間是影響水提效果的主要因素。為了保證有效成分的溶出，顆粒水提部分的制備擬采用先浸泡12h，加12倍量水，煎煮1次，煎煮時(shí)間為每次1.5h。一般說(shuō)來(lái)，水提過(guò)程中，加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)的增加及浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)有助于藥物中有效成分的溶出，但由于三七中含有大量淀粉，煎煮時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、煎煮次數(shù)多易于糊化，因此，在水提取過(guò)程中煎煮時(shí)間、次數(shù)不宜過(guò)長(zhǎng)、過(guò)多。七君顆粒為復(fù)方制劑，所含成分復(fù)雜，由于時(shí)間和條件的限制，僅選擇了水提取、高效液相色譜法測(cè)定三七皂苷R1、人參皂苷Rgl含量作評(píng)價(jià)指標(biāo)。處方中究竟以何種成分作為理想的評(píng)價(jià)指標(biāo)以及其含量測(cè)定方法還有待進(jìn)一步的研究。但總的說(shuō)來(lái)本試驗(yàn)的制備工藝是完全可行的。并具有簡(jiǎn)便、實(shí)用和經(jīng)濟(jì)科學(xué)的特點(diǎn)。