ＴＡＩＬ—ＰＣＲ方法快速克隆銀杏查爾酮合成酶基因及序列分析

摘 要：熱不對稱交錯PCR(TAIL—PCR)方法已廣泛應用于從多種生物克隆已知DNA序列的側翼序列。對傳統的TAIL—PCR方法進行改良：(1)將TAIL技術應用于TAIL—PCR中第3步PCR循環。(2)以10bp的隨機簡并引物即RAPD)引物代替基因側翼簡并引物。以銀杏品種家佛手的葉基因組DNA為模板，利用簡并引物克隆到銀杏查爾酮合成酶基因(CHS)片段序列（Gbchs1，以此序列設計3條特異引物，利用改良的熱不對稱交錯PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。結果表明，Gbchs2長1 238bp，編碼304個氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白質序列與其他植物的CHS蛋白質序列高度同源，包含CHS蛋白質保守的環化作用活性位點，催化活性位點、香豆素活性位點、及催化活性基序。改良后的TAIL—PCR方法為基因全長的克隆提供了一種簡單快速高效的新方法。

關鍵詞：銀杏；熱不對稱交錯PCR；查爾酮合成酶基因；克隆；序列分析

中圖分類號：S664.3

文獻標識碼：A

文章編號：1009—9980(2007)02—237—07