基于Ｓｍａｄ３的抗瘢痕增生藥物高通量篩選體系的構(gòu)建及效果評價
2006-01-01 00:00:00唐輝梁晚益劉旭盛李金璽黃躍生
中國美容醫(yī)學(xué) 2006年5期
[摘要]目的：構(gòu)建Smad3反應(yīng)性不穩(wěn)定增強型綠色熒光蛋白(d2EGFP)報告系統(tǒng)，作為抗瘢痕增生藥物高通量篩選體系。方法：分別以EGFP、d2EGFP為報告基因，neor為篩選基因，構(gòu)建以4x成纖維細(xì)胞a 2 Ⅰ型前膠原(COLlA2)基序為增強子、SV40為啟動子的報告基因載體p4COLlA2-EGFP和p4COLlA2-d2EGFP，并分別穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞，獲得Smad3反應(yīng)性報告細(xì)胞株NIH3T3—d2EGFP和NIH3T3-EGFP。分別向兩種細(xì)胞株中加入TGF-β1，比較不同時相點d2EGFP和EGFP的表達(dá)。應(yīng)用Smad3“圈套；寡核苷酸(TFD)轉(zhuǎn)染NIH3T3-d2EGFP，加入TGF-β1，觀察TFD對TGF-β1誘導(dǎo)d2EGFP表達(dá)的拮抗作用。結(jié)果：NIH3T3—d2EGFP是較理想的Smad3反應(yīng)性報告細(xì)胞株，Smad3 TFD對TGF-β1誘導(dǎo)調(diào)控d2EGFP的表達(dá)具有明顯的拮抗作用。結(jié)論：Smad3反應(yīng)性d2EGFP報告系統(tǒng)可特異、靈敏、動態(tài)地反映和監(jiān)測Smad3的活性變化。
[關(guān)鍵詞]Smad3；COLlA2基序；不穩(wěn)定增強型綠色熒光蛋白；圈套
[中圖分類號]R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-645 5(2006)05—0521—04
