離體替代試驗(yàn)方法在毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)中的應(yīng)用進(jìn)展

長(zhǎng)期以來(lái)，化妝品毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)在很大程度上是依賴于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲取各項(xiàng)毒性數(shù)據(jù)，以此外推對(duì)人體健康的可能危害。 盡管已知人和動(dòng)物對(duì)某些化學(xué)物質(zhì)的代謝存在差異，而且敏感動(dòng)物的某些器官組織結(jié)構(gòu)（如兔眼角膜）與人的也不盡相同，因此，有人質(zhì)疑現(xiàn)有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)是否能準(zhǔn)確地預(yù)示對(duì)人體的危害；從倫理角度看，同時(shí)也是來(lái)自公眾和動(dòng)物保護(hù)組織的壓力，是否一定要用動(dòng)物試驗(yàn)達(dá)到預(yù)示目的呢？隨著毒理學(xué)科的發(fā)展，從描述毒理進(jìn)入到機(jī)制研究，探究利用新的生物體系和生物工程技術(shù)成為可能。1959年Russel Burch提出“3R”原則， 第一個(gè)“R”是替代試驗(yàn)（Replacement），即利用簡(jiǎn)單的生物系統(tǒng)如培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞、哺乳動(dòng)物和人的組織、細(xì)胞以及特殊的動(dòng)物器官或非生物構(gòu)建體系等方法取代動(dòng)物試驗(yàn)；第二個(gè)“R”是減少動(dòng)物的使用數(shù)量(Reduction)，在保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的前提下，選擇合適動(dòng)物和方法，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，減少動(dòng)物用量； 第三個(gè)“R”是精化和改良技術(shù)(Refinement)，盡量減輕實(shí)驗(yàn)過(guò)程對(duì)動(dòng)物造成不必要的痛苦和傷害。1985年美國(guó)“倫理化國(guó)際基金會(huì)”補(bǔ)充 第四個(gè)“R”責(zé)任(Responsobility)，主要是增強(qiáng)人們的倫理觀念，不僅對(duì)動(dòng)物負(fù)責(zé)，更要對(duì)人類負(fù)責(zé)，保證各類產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)后，在正常和可預(yù)見(jiàn)的使用條件下對(duì)消費(fèi)者無(wú)傷害。

長(zhǎng)期以來(lái)，歐洲化妝品工業(yè)在評(píng)估化妝品原料和化妝品成品安全性過(guò)程中致力于發(fā)展有效的非動(dòng)物的替代方法，不僅因?yàn)樵絹?lái)越多的消費(fèi)者反對(duì)用動(dòng)物進(jìn)行安全性試驗(yàn)，重要的是使用非動(dòng)物的替代方法可以提高用于安全性評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)的質(zhì)量。這一點(diǎn)特別明確地體現(xiàn)在歐盟化妝品指南（93/35/EEC，1994）第6次修定本中，該指南規(guī)定在1998年1月以后化妝品原料或原料的混合物使用了動(dòng)物試驗(yàn)將不允許進(jìn)入歐盟國(guó)家市場(chǎng)銷售，除非沒(méi)有合適、有效的取代動(dòng)物的替代方法；1992—1993年歐共體委員會(huì)(the Commission of the European Community， ECC) 和歐洲化妝品、個(gè)人護(hù)理用品和香水協(xié)會(huì)(the European Cosmetic， Toiletry and Perfumery Association， COLIPA)倡議建立歐洲替代試驗(yàn)有效性驗(yàn)證中心 (European Centre for the Validation of alternative Methods， ECVAM)，隨后美國(guó)也成立了機(jī)構(gòu)間替代方法有效性驗(yàn)證合作委員會(huì) (the Interagency Coordinating Committee for the Validation of Alterative Methods， ICVAM)和機(jī)構(gòu)間替代方法管理小組（the Interagency Regulatory Alterative Group，IRAG），進(jìn)行離體替代方法有效性評(píng)價(jià)。自1985年以來(lái)，科學(xué)文獻(xiàn)報(bào)道的離體替代方法涉及皮膚刺激性試驗(yàn)、皮膚腐蝕性試驗(yàn)、經(jīng)皮吸收試驗(yàn)、 眼刺激性試驗(yàn)、皮膚光毒性試驗(yàn)和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)等。1996年美國(guó)化妝品、個(gè)人護(hù)理用品和香水協(xié)會(huì)(Cosmetics， Toiletries and Fragrance Association， CTFA)的替代方法評(píng)價(jià)方案報(bào)道了取自23個(gè)類型的離體眼刺激性替代試驗(yàn)中41個(gè)終點(diǎn)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)與兔眼刺激性試驗(yàn)（Draize試驗(yàn)）的數(shù)據(jù)進(jìn)行了相關(guān)性比較，結(jié)果指出，無(wú)論是動(dòng)物試驗(yàn)還是離體試驗(yàn)出現(xiàn)的預(yù)示差異，不僅反映模型選擇有誤，還反映特有物質(zhì)成分的差異，他們認(rèn)為目前離體替代方法還沒(méi)有單一終點(diǎn)超過(guò)Draize試驗(yàn)的最大平均積分（MAS）。根據(jù)OECD (the Organization for Economic Coorperation and Development， 經(jīng)濟(jì)合作和發(fā)展組織) 化學(xué)物質(zhì)試驗(yàn)方法指南的要求，一種試驗(yàn)方法無(wú)論是動(dòng)物的還是離體的，應(yīng)該具備以下條件：（1）有合適的相關(guān)終點(diǎn)；（2）其科學(xué)性、靈敏性和重復(fù)性（包括可行性）需通過(guò)嚴(yán)格審定； （3）方法可標(biāo)準(zhǔn)化；（4）在正常情況下不需要特殊儀器和技能。

事實(shí)上，離體替代方法的有效性驗(yàn)證應(yīng)該有離體試驗(yàn)與整體試驗(yàn)的對(duì)比、單個(gè)實(shí)驗(yàn)室或不同實(shí)驗(yàn)室所得結(jié)果重復(fù)性的對(duì)比以及與標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照物的對(duì)比，才能確定該替代方法在預(yù)示對(duì)人體危害方面的準(zhǔn)確性。迄今為止，ECVAM的科學(xué)顧問(wèn)委員會(huì)（the Scientific Advisory Committee， ESAC）報(bào)告了兩個(gè)離體皮膚腐蝕性試驗(yàn)的有效性驗(yàn)證過(guò)程， 歐洲化妝品和非食品科學(xué)委員會(huì)(the Scientific Committee on Cosmetic and Non-Food Products， SCCNFP)為了管理目的準(zhǔn)備驗(yàn)收并呈交OECD；對(duì)經(jīng)皮吸收試驗(yàn)的評(píng)價(jià)， 在基本規(guī)范上還需要完善（SCCNFP/0167/99）；有四種離體眼刺激性試驗(yàn)方法在歐洲進(jìn)行了一系列論證，用于鑒定有嚴(yán)重眼刺激性的化學(xué)物，一些歐盟國(guó)家已將雞胚絨毛膜尿囊膜眼刺激性替代試驗(yàn)用于化妝品的安全性評(píng)價(jià)；3T3成纖維細(xì)胞中性紅攝取光毒試驗(yàn)指南操作已呈交OECD。最近，歐共體法規(guī)重申使用過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)的化妝品原料或原料的混合物不允許進(jìn)入歐盟國(guó)家市場(chǎng)，實(shí)施日期將延至2004年9月后。我國(guó)加入WTO后，一些涉及毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法也需要與國(guó)際接軌，離體眼刺激性替代試驗(yàn)和離體光毒替代試驗(yàn)已在我國(guó)衛(wèi)生部化妝品標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)立項(xiàng)，工作正在進(jìn)行之中。