穴位注射對(duì)膽色素結(jié)石模型豚鼠肝臟部分酶類的影響

甘君學(xué)等

摘要

將雌性豚鼠４０只隨機(jī)分成５組，每組８只。正常對(duì)照組，每日只喂正常顆粒飼料；造模對(duì)照組，每日喂成石飼料，連續(xù)喂養(yǎng)６０日；針刺治療組，造模后，每日電針"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴；肌肉注射組，造模后隔日非穴位肌肉注射復(fù)方當(dāng)歸注射液０.２ｍｌ；穴位注射組，造模后隔日在"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴穴位注射復(fù)方當(dāng)歸注射液。結(jié)果，造模組成石率大于正常組、穴注組，穴注組成石率最低；肝總酶各組均明顯低于正常組，只有穴注組對(duì)Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻富钚越險(xiǎn)常組高；同時(shí)穴注組對(duì)降低ＡＬＴ、ＡＫＰ、５′玻危約案巫櫓β玻恰⒌ㄖβ玻切Ч最好。

主題詞膽結(jié)石／穴位療法膽色素類肝／酶學(xué)當(dāng)歸注射液／投藥和劑量

膽石病是臨床常見病，多發(fā)病。結(jié)石雖發(fā)生于膽道系統(tǒng)，但膽汁由肝臟生成，而肝臟分泌的膽汁成分比例異常或膽汁淤滯，導(dǎo)致膽汁成石力增高，是產(chǎn)生膽石病的重要因素之一。本實(shí)驗(yàn)采用具有活血化瘀作用的復(fù)方當(dāng)歸注射液對(duì)膽色素結(jié)石模型豚鼠作穴位注射，以便通過對(duì)豚鼠肝臟和血清中部分酶類變化的觀察，了解該法經(jīng)改善肝膽系統(tǒng)血液循環(huán)和代謝狀況，從肝細(xì)胞水平調(diào)節(jié)膽汁生成和分泌，減少膽汁淤滯，逆轉(zhuǎn)成石趨勢(shì)的機(jī)理。

１材料與方法

１.１實(shí)驗(yàn)分組

取實(shí)驗(yàn)用雌性豚鼠(月齡２～３月，體重２５０±２０ｇ，南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)４０只，隨機(jī)分成５組，每組８只，豚鼠每籠飼養(yǎng)４只，先籠養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境，然后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)狀態(tài)。藥品復(fù)方當(dāng)歸注射液(四川雅安制藥廠生產(chǎn))。

(１)正常對(duì)照組：每日每只喂正常顆粒飼料５０ｇ，喂養(yǎng)１２０日，分上下午喂，并每日喂適量青飼料。

(２)造模對(duì)照組：每日每只喂成石飼料５０ｇ(含正常飼料４５.４３ｇ，致石藥物４.５７ｇ--其中酪蛋白１ｇ，蔗糖１.５ｇ，纖維素１ｇ，豬油１ｇ，膽酸０.０２ｇ，膽固醇０.０５ｇ)喂養(yǎng)６０日，后改用正常顆粒飼料喂養(yǎng)６０日，并每日喂適量青飼料。

(３)針刺治療組：喂養(yǎng)方式同造模對(duì)照組，第６１日起，每日用固定器固定豚鼠，針刺一側(cè)"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴，連接脈沖電針儀通電１５ｍｉｎ，用連續(xù)波，頻率１６０次／ｍｉｎ，左右側(cè)穴位交替使用，每日１次，１０天為一療程，療程間隔２天。

(４)肌肉注射組：喂養(yǎng)方式同造模對(duì)照組，第６１日起，每日用固定器固定１５ｍｉｎ，隔日１次用復(fù)方當(dāng)歸注射液非穴位肌肉注射０.２ｍｌ。

(５)穴位注射組：喂養(yǎng)方式同造模對(duì)照組，第６１日起，每日用固定器固定１５ｍｉｎ，隔日１次用復(fù)方當(dāng)歸注射液穴注一側(cè)"膈俞""肝俞""陽陵泉"穴，每穴０.２ｍｌ，兩側(cè)交替使用。

１.２標(biāo)本處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)束禁食２４小時(shí)，眼眶注射空氣處死豚鼠，迅速剖腹取出膽囊，觀察有無結(jié)石、沉淀及絮狀物，用注射器吸出全部膽汁；另抽取心臟血液；低溫下切取部分肝臟組織勻漿離心，各標(biāo)本均置于低溫冰箱保存待檢。

１.３觀察指標(biāo)及方法

１.３.１按協(xié)和醫(yī)院法作膽石定性并比較各組豚鼠成石情況。

１.３.２肝質(zhì)膜ＡＴＰ酶活性測(cè)定采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒檢測(cè)。

１.３.３血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ＡＬＴ）采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒檢測(cè)。

１.３.４血清堿性磷酸酶（ＡＫＰ）、５′埠塑賬崦(５′玻危)采用上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供的試劑盒檢測(cè)。

１.３.５肝組織、膽汁β財(cái)咸煙僑┧彳彰(β玻)按２舶被酶葡萄糖醛酸法檢測(cè)。

２實(shí)驗(yàn)結(jié)果

２.１各組豚鼠成石情況

見表１。

造模組成石率大于正常組(Ｐ＜０．０１）、穴注組(Ｐ＜０.０５)；針刺組和肌注組均大于正常組(Ｐ＜０.０５)；與造模組差異無顯著性意義(Ｐ＞０.０５)；穴注組與正常組差異無顯著性意義(Ｐ＞０.０５)。只有穴注組的成石率降低有統(tǒng)計(jì)意義。

豚鼠膽囊結(jié)石外形不規(guī)則，呈棕褐色，碾碎后涂在白色濾紙上留有明顯的棕黃色素，經(jīng)紅外光譜定性是膽色素為主要成分的膽色素結(jié)石。

２.２對(duì)豚鼠肝質(zhì)膜ＡＴＰ酶活性的影響

見表２。

肝總酶(Ｋ＋Ｎａ＋Ｍｇ２＋玻粒裕忻)：各組均明顯低于正常組，其中以造模組最低。Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻福航鱸炷Ｗ槊饗緣陀謖常組(Ｐ＜０.０５)；穴注組與針刺組均比造模組提高(Ｐ＜０.０５)，但與正常組比較，僅穴注組明顯高于正常組(Ｐ＜０.０５)。Ｍｇ２＋玻粒裕忻福焊髯榫明顯低于正常組(Ｐ＜０.０１)。故各組豚鼠肝質(zhì)膜ＡＴＰ酶活性比較，只有穴注組Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻富钚緣奶岣呔哂兄瘟埔庖濉

２.３對(duì)豚鼠血清ＡＬＴ、ＡＫＰ、５′玻危緣撓跋

見表３。

ＡＬＴ：造模組顯著高于其余4組(Ｐ＜０.０１)，但正常組、針刺組、肌注組、穴注組之間無顯著差異。ＡＫＰ：造模組亦顯著高于其余4組(Ｐ＜０．０１）；但針刺組低于正常組(Ｐ＜０.０５)。５玻危裕涸炷Ｗ橄災(zāi)高于正常組與穴注組(Ｐ＜０．０１)，也高于肌注組(Ｐ＜０.０５)，與針刺組無顯著差異；穴注組顯著低于正常組、針刺組和肌注組，降低５玻危緣男Ч最好。綜合判斷，穴注組降低ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危緣男Ч較好。

２.４對(duì)豚鼠肝組織β玻恰⒌ㄖβ玻塹撓跋

見表４。

肝組織β玻牽涸炷Ｗ橄災(zāi)高于正常組(Ｐ＜０.０１)，也高于穴注組(Ｐ＜０.０５)，但與針刺組和肌注組無顯著差異(Ｐ＞０.０５)。膽汁β玻牽涸炷Ｗ橄災(zāi)高于其余４組(Ｐ＜０.０１)，但穴注組、針刺組和肌注組仍高于正常組水平(Ｐ＜０.０１)。綜合判斷，穴注組降低肝組織β玻恰⒌ㄖβ玻塹男Ч較好。

３討論

３.１本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，致石食物促成結(jié)石的主要環(huán)節(jié)在于肝細(xì)胞水平，造模對(duì)照組豚鼠肝質(zhì)膜ＡＴＰ酶活性降低，調(diào)節(jié)膽汁形成的作用下降，由于肝臟的受累，血清ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危曰钚隕高，說明肝細(xì)胞毛細(xì)膽管有膽汁淤積現(xiàn)象；肝組織β玻墻入膽汁，將結(jié)合型膽紅素水解成游離膽紅素，與鈣離子結(jié)合形成膽紅素鈣石沉積于膽道系統(tǒng)。

３.２穴位注射能提高肝質(zhì)膜Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻傅幕钚裕在肝細(xì)胞水平調(diào)整膽汁的生成與分泌，阻斷致石病理膽汁的形成，發(fā)揮阻止結(jié)石形成和溶解已有結(jié)石的作用。肝質(zhì)膜ＡＴＰ在調(diào)節(jié)膽汁的形成和分泌中起重要作用，無論是膽汁酸依賴性或非依賴性膽汁，從攝入肝細(xì)胞到分泌入毛細(xì)膽管都是一個(gè)耗能過程，所以產(chǎn)能過程及ＡＴＰ酶活性就顯得非常重要。從表２可知，穴注組肝質(zhì)膜Ｋ＋Ｎａ＋玻粒裕忻傅幕钚栽齦擼與造模組和正常組比較Ｐ＜０.０５，穴位注射提高肝質(zhì)膜ＡＴＰ酶的活性，增強(qiáng)調(diào)節(jié)膽汁生成與分泌的能力，這可能是起效的重要因素之一。

３.３穴位注射能降低造模組升高的ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危曰钚裕減輕肝細(xì)胞的損傷，改善膽汁淤滯現(xiàn)象，保持膽道通暢，防止膽汁中有形成分的沉積。ＡＬＴ是反映肝臟損害的比較敏感的指標(biāo)；ＡＫＰ與５玻危允鞘粲詰ǖ老低車拿福分布于肝細(xì)胞毛細(xì)膽管一側(cè)的微絨毛及上皮細(xì)胞上，膽汁淤滯時(shí)，這些酶的生成亢進(jìn)，逆流入血，使血清ＡＫＰ、５玻危隕高。從表３發(fā)現(xiàn)，穴位注射可使致石飼料引起的豚鼠血清ＡＬＴ、ＡＫＰ、５玻危砸斐Ｔ齦叩幕钚越檔橢琳常水平，穴注組與造模組比較各項(xiàng)指標(biāo)均有非常顯著性差異(Ｐ＜０.０１)，而針刺組與造模組比較，５玻危曰钚暈廾饗圓鉅(Ｐ＞０.０５)。說明穴位注射能較好地調(diào)整肝臟疏泄功能，消除膽汁淤積而發(fā)揮消溶結(jié)石的作用。

３.４穴位注射能明顯降低造模組豚鼠肝臟、膽汁β玻腔盍Γ降低病理性膽汁的成石力，逆轉(zhuǎn)成石趨勢(shì)。肝組織的炎癥、損傷可使細(xì)胞釋放內(nèi)源性β玻仟［３］，使進(jìn)入膽汁的β玻腔钚栽齦擼水解結(jié)合性膽紅素，再與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生膽色素結(jié)石。從表４可知，穴注組肝組織β玻嗆偷ㄖβ玻腔钚越顯炷Ｗ槊饗韻陸(Ｐ＜０.０５，Ｐ＜０.０１)。說明穴位注射能穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境，提高肝細(xì)胞抗損傷能力，減少了內(nèi)源性β玻塹氖頭牛抑制了肝組織和膽汁中β玻塹幕钚裕減少了膽石的生成。至于穴位注射如何改善肝細(xì)胞代謝，穩(wěn)定肝細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，從肝細(xì)胞水平阻斷致石性的病理性膽汁的形成與分泌，抑制膽石形成并消溶結(jié)石的過程，有待進(jìn)一步研究。

６參考文獻(xiàn)

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２徐叔云，等．藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)．第２版，北京：人民衛(wèi)生出版社，１９９１：４９７

３ＯｙａｂｕＨ：ＤｉｇＤｉｓＳｃｉ，１９８４；３２９：８０９

（修回日期：２０００玻埃氮玻保叮齊淑蘭發(fā)稿）