小鼠腦缺氧后P300在海馬結構中表達變化及其意義

王樹鵬　宋春來　于廣池　胡光宇

(集安市公安局，吉林　集安　134200)

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小鼠腦缺氧后P300在海馬結構中表達變化及其意義

王樹鵬宋春來1于廣池2胡光宇3

(集安市公安局，吉林集安134200)

〔摘要〕目的探討小鼠腦缺氧后P300在大腦海馬結構中的表達。方法隨機將50只昆明系小鼠分成10組，頸部手術結扎右側頸總動脈，術后1、3、6、12 h、1、3、6、9、12 d處死，采用免疫組化染色方法檢測P300在海馬結構中表達變化，應用CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統測量細胞內灰度值。結果P300在腦缺氧3 h后表達明顯增加。結論P300可作為腦缺氧的早期指標，并很可能參與腦缺氧后海馬功能改變。

〔關鍵詞〕腦缺氧；P300；海馬

1內蒙古興安盟突泉縣公安局2長春市公安局寬城公安分局

3嘉興市公安局

第一作者：王樹鵬(1970-)，男，副主任法醫師，主要從事法醫病理學研究。

P300為分子量大約250 kD的核蛋白，在轉錄調節方面發揮至關重要的作用。作為細胞核內的大蛋白，其蛋白表面存在著與諸多轉錄因子結合的結構域〔1，2〕。目前為止，至少已經發現400個蛋白可與P300形成物理性結合。P300可作為橋接蛋白介導DNA結合轉錄因子與基礎轉錄復合物相結合，另外，P300還具有賴氨酸乙?；富钚裕赏ㄟ^乙酰化組蛋白而調控轉錄〔3，4〕。最近的研究發現，P300表達量和活性降低均與人類神經細胞退行性改變相關聯。但神經細胞缺氧后P300的表達改變，國內外卻鮮有報道。

1材料與方法

1.1動物分組及模型建立昆明系雄性小鼠50只，隨機分為10組，包括腦缺氧實驗組及正常對照組。實驗組分別于術后1、3、6、12 h、1、3、6、9、12 d處死。實驗過程中結扎右側頸總動脈，腹腔內注射10%水合氯醛(0.35 g/kg體重)麻醉小鼠，剪毛并消毒頸部皮膚后，沿中線切開皮膚，手術分離并結扎右側頸總動脈，縫合皮膚后鼠籠飼養。不結扎頸部動脈，但切開頸部皮膚小鼠作為正常對照組。

1.2方法

1.2.1蘇木素-伊紅(HE)染色腦組織標本用10%甲醛溶液固定2 d，采用石蠟包埋，4 μm厚連續切片，進行常規HE染色。

1.2.2免疫組織化學染色采用P300一抗進行組織化學染色，按試劑盒說明書應用SP法對腦組織中P300進行檢測。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗為陰性對照，對已知陽性的切片做陽性對照。神經細胞內平均灰度值采用CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統測量。

1.3統計學方法應用SPSS13.0統計學分析軟件行單因素方差分析。

2結果

常規HE染色可見，腦缺氧3 h后，損傷灶周圍神經細胞尼氏體溶解消失，神經細胞及血管周圍間隙增寬；缺氧1 d后，腦實質內出現嗜神經細胞現象；缺氧3 d后，可見有膠質神經細胞增生(圖1)。在正常對照組海馬組織中，P300呈弱表達，實驗組海馬組織中P300在傷后3 h表達量增高，且隨缺氧時間延長后持續增高，缺氧1 d后達峰值。缺氧0 min、1、4、12 h、1、3、6、9、12、16 d的平均灰度值為165±3.5，178±7.2，157±7.9，159±5.2，136±8.9，91±6.9，76±8.2，79±9.1，73±2.3，71±6.2。

圖1　小鼠大腦缺氧后P300在海馬中的表達變化(HE，×20)

3討論

P300作為重要的轉錄因子調控因子，在神經細胞退行性變中的重要作用已被眾多學者所報道〔6〕。本研究發現，P300在正常海馬組織中呈一致性弱表達，提示P300很有可能參與海馬組織內神經細胞的正常轉錄調節過程。在腦缺氧早期，P300在海馬組織中表達即發生變化，P300表達量增加，很有可能參與腦缺氧早期細胞代償過程，提示P300可作為腦缺氧的早期診斷指標。另外，P300可通過調節轉錄因子而調控細胞中眾多基因的表達，其在海馬組織中隨缺氧時間延長而呈規律性增長，進一步說明其在神經細胞退行性變代償過程中發揮著重要功能。

4參考文獻

1von Mikecz A，Zhang S，Montminy M，etal.CREB-binding protein (CBP)/p300 and RNA polymerase Ⅱ colocalize in transcriptionally active domains in the nucleus〔J〕.J Cell Biol,2000;150(1):265-73.

2Bhattacherjee V，Horn KH，Singh S，etal.CBP/p300 and associated transcriptional co-activators exhibit distinct expression patterns during murine craniofacial and neural tube development〔J〕.Int J Dev Biol,2009;53(7):1097-104.

3Cazzalini O，Sommatis S，Tillhon M，etal.CBP and p300 acetylate PCNA to link its degradation with nucleotide excision repair synthesis〔J〕.Nucleic Acids Res,2014;42(13):8433-48.

4Ni J，Shen Y，Wang Z，etal.P300-dependent STAT3 acetylation is necessary for angiotensin II-induced pro-fibrotic responses in renal tubular epithelial cells〔J〕.Acta Pharmacol Sin，2014;35(9):1157-66.

5Viosca J，Lopez-Atalaya JP，Olivares R，etal.Syndromic features and mild cognitive impairment in mice with genetic reduction on p300 activity：differential contribution of p300 and CBP to Rubinstein-Taybi syndrome etiology〔J〕.Neurobiol Dis，2010;37(1):186-94.

6van Deursen JA，Vuurman EF，Smits LL，etal.Response speed，contingent negative variation and P300 in Alzheimer's disease and MCI〔J〕.Brain Cogn，2009;69(3):592-9.

〔2015-01-15修回〕

(編輯袁左鳴)

通訊作者：胡光宇(1976-)，男，主檢法醫師，主要從事法醫病理學研究。

〔中圖分類號〕R36

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2015)22-6366-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.22.022