4-氨基安替比鄰和乙醇在金魚體內積聚量的溫度和表面活性依賴

孔令辰(天津師范大學)

實驗部分

材料：4-氨基安替比鄰，乙醇，緩血酸胺和聚山梨酸酯。乙醇溶于蒸餾水中并在4℃保存。

準備工作：金魚，1-3g，置于含有0.075%氯化鈉溶液并且不斷攪拌混合的容積為48升矩形玻璃缸中。而這個玻璃缸懸在溫度維持在10℃-35℃的變溫水槽中。所有實驗用魚均來自同一批魚苗，以排除不同種群魚的差異性。

預備實驗可以證明吸收率在溫度變化調整后快速穩定。用于實驗的金魚至少在實驗條件溫度下觀察適應24個小時。然后他們被分別至于含有100ml的4-氨基安替比鄰溶液（1.5mg/ml）和75ml乙醇溶液（1.0%），并分別以0.05M緩血酸胺為緩沖溶液使溶液pH穩定在7.0。實驗操作過程中，聚山梨酸酯作為表面活性劑，在溶液中濃度為0.01%。所有實驗溶液均在當天制備。在將金魚浸入藥物溶液的各個不同實驗階段，金魚都用蒸餾水漂洗后裹上棉紙稱重。金魚從水缸中取出后，要立即進行實驗或者冷凍備用。

實驗方法：將金魚浸泡在15ml的0.05M緩血酸胺為緩沖溶液使溶液pH穩定在7.0的4-氨基安替比鄰溶液中，然后在氯仿中分散為混合均液。然后用離心機分離，并除去5.0ml的氯仿，然后加入10ml的0.01MHCl溶液并攪拌20分鐘。從水相中取2ml，加入7ml水和2ml二甲氨基苯甲醛試劑。在430nm測量其吸光度并按每克魚衡量其4-氨基安替比鄰的含量。

為測量4-氨基安替比鄰到魚體表面的吸附量，將金魚置于實驗藥液中30秒后，對4-氨基安替比鄰含量進行分析。在對之前準備的空白液和浸泡實驗魚后的實驗溶液的吸光度之間進行比較，并沒有發現顯著的不同。而沒有浸入金魚的空白實驗溶液，也在相同實驗條件下操作，僅作為參考對比。

為了確定乙醇的吸收量，每條實驗魚都用5ml的蒸餾水潤洗后，均漿用離心機分離。將0.5ml上清液轉移到閃爍管中，混合10ml的閃爍液進行計算，直到收集到最小10000的計數。甲苯用做內標來更正猝熄，計數系統的效率大概是75%。

結果與討論

分布容量表明金魚體內積聚藥物的能力。4-氨基安替比鄰的分布容量隨著溫度的升高而增加，較乙醇相比表現為溫度依賴。結果表明4-氨基安替比鄰的分布容量是熱敏平衡的，這大概是由于與血漿蛋白結合而到轉移到非水相導致的。而乙醇的分布容量沒有呈現溫度依賴，表明它有限地分布在金魚體內的水相中。在對這兩種藥物的實驗中，聚山梨酸酯都沒有影響到分布容量值。

對于這兩種藥物，吸收的間隙常量對于溫度都相當敏感。這兩個吸收反應的能壘均涉及擴散，因此他們的吸收常量都符合阿倫尼烏斯公式。對于4-氨基安替比鄰吸收行為的活化能缺乏表面活性作用，通過圖中的斜率就可以確定。而相對于物質在水中的擴散行為，吸收的活化能相當大，4-氨基安替比鄰吸收的速控步驟應該是穿過生物膜的擴散行為而不是水滯留層。相似的小分子穿過細胞膜的被動運輸的活化能也有過報道[4-5]。例如，尿素和安替比鄰穿過兔膽囊上皮細胞膜的活化能分別是13.0和9.3kcal/mol。

Fig.1 乙醇根據乙醇濃度的吸收量

Fig.2 4-氨基安替比鄰在不同溫度下根據時間的吸附量

Fig.3 4-氨基安替比鄰和乙醇根據溫度的分布容量

結論

實驗證明金魚體內乙醇的分布量不受溫度和表面活性劑的影響。而4-氨基安替比鄰的分布量同樣不受表面活性劑影響，但確隨溫度的升高而顯著增加。金魚對這兩種藥物吸收的間隙常量都是溫度依賴的。大概是因為4-氨基安替比鄰與血漿蛋白結合而到轉移到非水相，而乙醇有限地分布在金魚體內的水相中所導致。

[1]N.A.HallandW.L.Hayton,J.Pharm.Sci.,56,304(2007).

[2]M.Gibaldi and C.H.Nightingale,ibid.,57,226(2008).

[3]A.R.DiSanto and J.G.Wagner,ibid.,58,1077(2009).

[4]C.Brun,J.Lab.Clin.Med.,37,955(2011).

[5]B.E.Cohen,J.Membr.Riol.,20,205(2005)